同种异体间充质干细胞复合纤维蛋白修复骨缺损

[目的]探讨骨髓间充质干细胞(m esenchym al stem cells,MSCs)的体外培养,以及同种异体MSCs复合纤维蛋白修复兔股骨髁松质骨缺损的效果。[方法]在日本大耳兔双侧股骨髁制作0.6 cm×1.0 cm松质骨缺损,左侧植入同种异体MSCs纤维蛋白复合物,右侧单纯植入纤维蛋白。分别于术后2、5、8周行放射学、组织学检查,以了解骨缺损修复情况。[结果]单纯植入纤维蛋白的一侧不能自行愈合。植入复合物的一侧术后2周可见少量骨组织生成,5周可见大量模糊骨痂,术后8周骨缺损基本愈合。除少量炎性细胞浸润外,各期均未见明显免疫排斥反应。[结论]同种异体MSCs复合纤维蛋白可有效修复兔股骨髁松质骨缺损,8周内机体的免疫排斥反应较弱。

凋亡诱导因子基因敲减对骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死的影响

背景:众多基础与临床试验证实:骨髓间充质干细胞移植后的低存活率严重制约着其发挥长期的治疗效果。课题组前期研究发现凋亡相关因子在骨髓间充质干细胞凋亡过程中发挥了重要作用,其中凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)蛋白可能是其中一个关键因子。目的:将AIF敲减的骨髓间充质干细胞移植至小鼠梗死心肌中,验证低AIF表达骨髓间充质干细胞移植后的存活情况以及对进一步改善心功能的重要性。方法:首先,通过LV-AIF-shRNA慢病毒感染骨髓间充质干细胞下调AIF蛋白表达,应用流式细胞术及Western blot、RT-qPCR检测慢病毒的感染效率,CCK-8检测AIF敲减骨髓间充质干细胞在缺血缺氧条件下的细胞活力;然后,构建急性心肌梗死小鼠模型,分别将正常及AIF敲减的骨髓间充质干细胞移植至心肌梗死区域,免疫荧光检测AIF蛋白的表达,ELISA检测血清脑钠尿肽水平,心脏超声检测心功能,Masson染色观察心肌纤维化情况,RT-qPCR检测AIF敲减骨髓间充质干细胞移植后SRY基因表达反映细胞存活情况。结果与结论:①LV-AIF-shRNA慢病毒感染成功构建AIF基因敲减的骨髓间充质干细胞,感染效率为97.7%,且AIF表达有显著下降(P<0.001);②在缺血缺氧培养状态下,AIF基因敲减骨髓间充质干细胞较正常骨髓间充质干细胞的细胞活力显著增加;③与移植正常骨髓间充质干细胞相比,AIF基因敲减骨髓间充质干细胞移植后在梗死心肌中的存活数目显著升高至3.71倍(P<0.001),并且显著减少了梗死区域AIF蛋白表达、心肌纤维化程度;④与移植正常骨髓间充质干细胞相比,AIF基因敲减骨髓间充质干细胞移植后血清脑钠尿肽水平显著降低(P<0.05),左室射血分数、左室缩短分数均有显著改善(P<0.05);⑤结果表明:AIF基因敲减可通过增强骨髓间充质干细胞移植后的细胞活力、增加骨髓间充质干细胞在供体内的存活从而减少心肌纤维化,改善急性心肌梗死后心功能。

间充质干细胞在小型猪重组牙胚同种异体移植中的免疫调节作用

目的 探索在小型猪重组牙胚同种异体移植实现颌骨内牙再生过程中,间充质干细胞BMMSCs的免疫调节作用。方法 将胚胎小型猪帽状期牙胚解离重组后,移植至成年小型猪拔牙区,BMMSCs经分离鉴定后,单独或与他克莫司FK506联合应用,进行同种异体移植免疫干预;评估受体小型猪的免疫状况和牙再生小型猪百分比。结果 BMMSC组受体小型猪CD3^(+)细胞和CD3^(+)CD8^(+)细胞比例均显著下降(P<0.05),Tregs细胞比例显著上调(P<0.05),有牙再生的小型猪百分比为75%;而BMMSC^(+)FK506组CD3^(+)和CD8^(+)T细胞比例均显著下调(P<0.05),但Tregs比例与空白对照组无显著差异,该组25%小型猪有牙再生;空白对照组的免疫排斥相关指标上调,未发现牙再生。结论 相对于与FK506合用,单独使用BMMSCs更有利于同种异体重组牙胚移植。

他克莫司促进基因修饰的同种异体间充质干细胞修复骨缺损

目的 探讨他克莫司 (FK 5 0 6)在腺病毒介导的转骨形态发生蛋白 2 (BMP 2 )基因的同种异体间充质干细胞 (MSCs)修复节段性骨缺损中的作用。方法 大鼠股骨节段性骨缺损模型 ,分别植入不同的基因修饰的MSCs与胶原复合物 ,于术后 2、4、6、8周行放射学检查 ,术后 8周的标本行组织学检查及组织形态计量学分析。结果 术后 8周 ,放射学评分Adv hBMP 2转染的同系MSCs组 (A组 )、Adv hBMP 2转染的同种异体MSCs应用FK5 0 6组 (C组 )均高于Adv hBMP 2转染的同种异体MSCs未用FK5 0 6组 (D组 ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。组织学检查显示 ,术后 8周A、C组以板层骨为主 ,D组以编织骨和类骨质为主 ,内有炎症细胞浸润 ;组织形态计量学分析显示 ,术后 8周A、C组新骨形成的量多于D组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 短期小剂量应用FK 5 0 6可抑制Adv hBMP 2基因转染的同种异体大鼠MSCs移植诱发的免疫排斥反应 ,促进长骨干节段性骨缺损的修复。

脂肪间充质干细胞与甲泼尼龙联合用药对小型猪异体皮肤移植的影响

旨在探究脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells,ADSCs)与甲泼尼龙(methylprednisolone,MP)联合用药对小型猪异体皮肤移植(allogeneic skin graft,ASG)所产生的免疫排斥反应与创口愈合的影响。对12头小型猪建立同种异体皮肤移植模型,根据术后对异体皮肤移植皮片不同的干预方式,将小型猪随机分为4组:异体皮肤移植组(ASG)、甲泼尼龙组(MP)、脂肪间充质干细胞组(ADSCs)、脂肪间充质干细胞与甲泼尼龙联合用药组(ADSCs+MP)。术前与术后7、14 d采集血液和组织样本,术后即刻及术后7、14、21 d拍照记录移植表皮临床变化情况。通过对移植皮片表观检查、病理组织学检测,血常规以及血清生化,移植皮片组织氧化应激、炎症、再生的指标检测,综合评价4组不同干预方式对小型猪异体皮肤移植所产生的免疫排斥反应与创口愈合方面的影响。从皮片表观与病理学分析可知,ASG组移植皮片存活时间在7 d左右、MP组移植皮片存活时间在7~14 d、ADSCs组与ADSCs+MP组存活时间为14~21 d。并且在7、14 d时ADSCs+MP组的GSH、SOD的表达量显著升高,在免疫排斥方面,ADSCs+MP组的CD4^(+)T细胞的数量,NF-κB的蛋白与基因表达量,IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6促炎因子的表达量相对于ASG组显著降低。在创口愈合方面,ADSCs+MP组相对于ASG组VEGF、TGF-β的蛋白表达,SDF-1、CXCR4的表达显著上升。并且ADSCs+MP组相对于ASG组,PI3K、AKT、11β-HSD1的蛋白与基因的表达量显著降低。综上所述:ADSCs+MP组相对于ASG组与MP组,可以延长移植皮片存活时间。并且ADSCs+MP可以有效通过促进GSH、SOD的表达抑制氧化应激。在排异方面,ADSCs+MP可以通过抑制NF-κB的表达抑制IL-2、IFN-γ、IL-6、TNF-α等炎性因子的表达,从而抑制移植过后的免疫排斥反应。并且ADSCs+MP可以通过促进VEGF、TGF-β等愈合因子的表达促进创口愈合。进一步研究发现ADSCs可能通过PI3K/AKT来影响11β-HSD1的表达,进而抑制皮肤皮质醇含量,并促进TGF-β、VEGF等生长因子的表达来促进创口肉芽组织再生与血管迁移。

骨髓间充质干细胞与同种异体骨复合修复犬下颌骨缺损:成骨能力检测

背景:同种异体骨与自体骨有相似解剖外形和生物学特性,是较佳的生物支架材料。自体骨髓来源的间充质干细胞具有多分化潜能,能向成骨、成软骨细胞分化,加速骨组织及软骨组织的形成。目的:探讨同种异体骨支架复合自体骨髓间充质干细胞促进犬下颌骨半侧缺损的新骨成骨能力。方法:拔出24只比格犬左侧下颌牙,伤口愈合后2个月,人为造成犬下颌骨缺损,对照组用单纯冻干同种异体骨修复,实验组用同种异体冻干骨加自体骨髓间充质干细胞修复。术后4,12,24周对下颌骨体部进行骨密度扫描以及Micro-CT检查。结果与结论:实验组移植后12周开始,下颌骨的骨密度显著高于对照组(P<0.05),随着时间推移,实验组和对照组骨密度均增高,但实验组增高明显高于对照组。随时间推移,实验组骨结构参数成阶梯式递增或递减,对照组虽也有递增或递减,但不明显。术后24周实验组感兴趣区骨小梁分离度大于对照组(P<0.05),骨体积分数、骨小梁数量、骨小梁厚度小于对照组(P<0.05)。结果表明骨髓间充质干细胞能加速同种异体骨的骨改建速度。

大鼠骨髓间充质干细胞对同种异体骨髓移植造血重建的影响

为了探讨大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcell,MSC)对同种异体骨髓移植造血重建的影响,建立大鼠同种异体骨髓移植模型,通过外周血像检测、病理分析和流式细胞术检测综合评价MSC对骨髓移植(bonemarrowtransplantation,BMT)的积极作用。结果表明:①共移植后30天,MSC可在致死量照射的受者存活,并被发现受者胸腺、脾脏和骨髓;②MSC可促进BMT后造血重建,促进外周血白细胞、淋巴细胞和血小板的明显恢复;促进骨髓细胞数恢复及B淋巴系、巨核系分化增强;有利骨髓组织学的明显恢复发善。结论:大鼠MSC与骨髓共移植可在受体的造血器官长期存在,MSC可明显促进同种异体骨髓移植后造血重建。

同种异体骨髓间充质干细胞移植对家兔股骨头缺血性坏死的治疗作用

目的:虽然骨髓间充质干细胞的体外培养和扩增技术已经成熟,但是自体细胞移植仍处于细胞培养和临床治疗相互分离的现状,不便于临床实际应用。为建立骨髓间充质干细胞库,以及为临床应用提供实验证据,实验拟比较同种异体和自体骨髓间充质干细胞移植,对实验性家兔股骨头缺血性坏死的治疗作用。方法:实验于2004-03/2007-04在河北医科大学人体解剖学教研室,白求恩国际和平医院骨科完成。①实验材料:实验所用新西兰大白兔由白求恩国际和平医院实验动物中心提供,雌雄不拘,四五月龄,体质量2.5～3.5kg。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法:采用全骨髓培养法制备新西兰大白兔骨髓间充质干细胞。采用液氮冷冻法制作兔股骨头缺血性坏死模型。将造模后家兔随机分成自体细胞移植组和同种异体细胞移植组,12只/组,自体细胞移植组钻孔后,植入含有体外培养的自体骨髓间充质干细胞的明胶海绵;同种异体细胞移植组钻孔后,植入含有同种异体骨髓间充质干细胞的明胶海绵。③实验评估:分别于术后2,4,6,8周,进行股骨头标本的X射线和组织学观察。结果:24只新西兰大白兔均进入结果分析。①X射线观察显示,2周时自体细胞移植组与同种异体细胞移植组,股骨头钻孔区边缘密度增加,8周时两组的钻孔区,均出现骨小梁结构。②组织学观察表明,2周时两组的钻孔区内,都有大量的成骨细胞,边缘有较多的骨组织形成;在同种异体细胞移植组的钻孔区内,出现少量淋巴细胞和浆细胞。4周时两组的钻孔区内,充满了新生的骨小梁结构,8周时钻孔区内的骨小梁趋于成熟,两组间骨小梁面积图像分析无明显差异。结论:同种异体和自体骨髓间充质干细胞移植,对实验性家兔股骨头缺血性坏死的治疗效果相似。

深低温冻储同种异体气管移植并骨髓间充质干细胞移植后气管上皮细胞血管内皮生长因子的表达

背景:深低温冷冻后的组织可以保持其原有的活力和组织完整性,并能消减抗原性。目的:静脉移植骨髓间充质干细胞合并深低温处理供体气管后进行同种异体气管移植,观察骨髓间充质干细胞在促进上皮再生和再血管化后的作用。方法:用深低温冻储2周和6周的气管进行Wistar大鼠同种异体气管移植后,用PKH-26标记的3～5代骨髓间充质干细胞经鼠尾静脉移植入受体内,等量的磷酸盐缓冲液注射作为实验对照。观察供体气管的组织学和血管内皮生长因子蛋白表达。结果和结论:骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储后的移植气管结构完整,软骨无变性坏死;深低温6周的移植气管上皮再生情况优于2周。骨髓间充质干细胞移植组的上皮细胞表达血管内皮生长因子水平高于磷酸盐缓冲液对照组。结果提示,骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储6周后移植气管存活期好于深低温冻储2周;骨髓间充质干细胞能够促进移植物周围新生血管的增加,从而促进气管损伤的修复。

同种异体骨复合骨髓间充质干细胞用于髁突缺损修复的实验性研究

目的:运用组织工程的方法,以同种异体冻干骨支架复合骨髓间充质干细胞修复髁突缺损的重建方案,为临床单侧髁突缺损患者的修复提供实验依据。方法:12只12月龄比格犬,自髁突颈部切除所有动物左侧髁突,制造单侧髁突缺损的动物模型,随机分为两组,实验组用同种异体冻干骨支架复合骨髓间充质干细胞修复重建,对照组仅用同种异体冻干骨修复重建。分别于术后4、12、24周观察开口度变化,24周时进行螺旋CT扫描,然后处死动物,取标本行大体观察、Micro-CT扫描和组织学检测。结果:实验组和对照组所有动物同种异体冻干骨均能与自体骨愈合,24周时2组动物张口度基本正常,髁突形态无明显改变,实验组动物同种异体骨几乎全部被自体骨替代,对照组中,新骨主要在同种异体骨与自体骨结合部形成,实验组骨密度及成骨质量较对照组好(P<0.05)。结论:同种异体骨支架复合骨髓间充质干细胞能加速成骨,术后24周髁突形态变化不大,功能恢复良好,为进一步研究同种异体骨支架复合BMMSCs对髁突缺损的临床修复打下基础。

基因转染骨髓间充质干细胞复合同种异体骨修复绵羊极限骨缺损

背景:多项体内外实验表明外源性植入碱性成纤维细胞生长因子能明显促进骨形成过程,但外源性碱性成纤维细胞生长因子在体内易降解,影响疗效。目的:利用分子生物学技术将碱性成纤维细胞生长因子转染至骨髓间充质干细胞中,观察同种异体骨复合基因转染骨髓间充质干细胞修复绵羊极限骨缺损的效果。方法:将同种异体骨复合碱性成纤维细胞生长因子转染骨髓间充质干细胞组织工程骨、骨髓间充质干细胞复合同种异体支架骨材料、同种异体支架骨材料、β-磷酸三钙材料分别植入羊髂骨极限缺损处,植入后4,8,12周行组织学、免疫组织化学染色观察。结果与结论:同种异体骨复合碱性成纤维细胞生长因子转染骨髓间充质干细胞组织工程骨植入后12周,手术结合区成软骨样结构较多,术区中央可见大量成骨样细胞,整个术区的支架材料降解较其他组多,支架材料孔洞内爬满纤维结缔组织,材料周围常见破骨样细胞;骨涎蛋白与Ⅰ型胶原呈强阳性表达。其他3组手术结合区虽有成软骨样结构及成骨样细胞出现,但中央区为死骨结构,且骨涎蛋白与Ⅰ型胶原呈弱表达。表明碱性成纤维细胞生长因子转染的骨髓间充质干细胞复合同种异体骨可基本修复绵羊极限骨缺损。

同种异体骨支架复合自体骨髓间充质干细胞修复下颌骨节段缺损动物模型的建立

目的:建立同种复合自体骨髓间充质干细胞修复下颌骨节段性的动物模型,为研究同种异体骨支架复合自体骨髓间充质干细胞修复下颌骨节段性缺损效果及其机制打下基础。方法:24只1岁龄比格犬,拔出所有动物右侧下颌前磨牙和磨牙,伤口愈合后制造左侧下颌骨3mm节段性缺损(从颏孔后1mm到下颌角前),随机分两组,实验组用同种异体骨支架复合骨髓间充质干细胞修复重建,对照组仅用同种异体骨修复重建。术后4、12、24、48周处死动物(每组3只),取标本并行CT检查。结果:实验组和对照组所有动物同种异体骨均能与自体骨愈合,48周时实验组动物同种异体骨几乎全部被自体骨替代,但是新骨的大小较植入时同种异体骨支架变小。对照组中,新骨主要在同种异体骨与自体骨结合部形成,新骨大小与原植入时同种异体骨大小变化不大。结论:同种异体骨支架复合自体骨髓间充质干细胞能加速成骨,该动物模型的成功建立,为进一步研究同种异体骨支架复合自体骨髓间充质干细胞修复下颌骨节段行缺损的效果及其机制打下基础。

同种异体脱钙骨与骨髓间充质干细胞关节腔内共培养:与同腔软骨性状的对比

背景:临床发现膝关节内游离体能长期存在于关节腔内并能保持一定的软骨组织学特性和生理学特性,因此大胆提出假设:关节腔环境可能是软骨细胞生长、发育的较佳环境并提出"腔内培养,腔内移植"的理念。目的:观察兔骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨基质体外培养或关节腔内培养组织工程软骨与同腔软骨的性状差异。方法:实验分3组进行,体外培养组将经成软骨诱导的乳兔骨髓间充质干细胞与成年兔脱钙骨基质体外复合培养;腔内培养组将经成软骨诱导的乳兔骨髓间充质干细胞与成年兔脱钙骨基质以筋膜包裹,复合培养于成年新西兰兔膝关节腔内,以同腔内正常软骨为对照。结果与结论:培养12周后:①体外培养组苏木精-伊红染色见软骨细胞少量增生,胞核蓝染;甲苯胺蓝染色见软骨细胞排列无序,少量周围基质包绕;Masson染色阳性区域小,细胞排列无序;Ⅱ型胶原免疫组织化学见软骨细胞胞浆及胞外基质少量黄色颗粒。②腔内培养组苏木精-伊红染色见软骨细胞增生,胞核蓝染;甲苯胺蓝染色见软骨细胞成串排列,软骨陷窝形成,周围基质包绕;Masson染色阳性,软骨细胞多,基质蓝染,按一定应力方向排列;Ⅱ型胶原免疫组织化学见细胞外基质中出现较多棕黄色颗粒,Ⅱ型胶原染色阳性。说明骨髓间充质干细胞与同种异体脱钙骨基质复合物可在体外及膝关节腔内培养出组织工程软骨,关节腔内培养的软骨比体外培养的软骨更接近正常软骨。

同种异体血清在体外培养骨髓间充质干细胞的作用研究

[目的]适当的血清浓度可维持骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外培养,血清浓度过低不利于细胞的生长,而高浓度血清则易引起细胞分化。而血清的不同来源对MSCs的培养同样产生影响。传统的培养方法用胎牛血清作为营养支持,临床应用时存在潜在的风险。本研究探讨同种异体血清在体外培养人骨髓间充质干细胞(hBM-SCs)的可行性。[方法]无菌条件下收集人骨髓悬液,分离hBMSCs,分别用含胎牛血清和人血清的培养基培养。分别测定2种方法培养的hBMSCs细胞生长曲线;采用流式细胞仪检测分析培养的hBMSCs表面抗原类型;并将培养的hBMSCs诱导分化为软骨细胞及神经细胞,诱导后的软骨细胞及神经细胞采用免疫组化染色分析。[结果]2种方法培养的间充质干细胞表面抗原CD29、CD44、CD105阳性,CD34、CD45、CD106以及HLA-DR阴性,表达强度无显著性差异;人血清培养的hBMSCs细胞生长速度快于胎牛血清培养组,但分化效率低于后者。[结论]通过生长特性、表面抗原表达以及分化潜能等方面的对比研究,人血清培养hBMSCs与胎牛血清培养差别不大,可以作为一种适合临床的安全培养方法。

同种异体骨髓间充质干细胞移植在心肌梗死后心室重建中的作用

背景:心肌梗死会导致心肌出现缺血性改变,引发心室重构的出现,成为导致死亡的重要原因。心肌梗死在中老年群体中多发,但患者自体骨髓间充质干细胞的增殖、分化能力较弱,为此需要积极的尝试予以同种异体干细胞移植,以获得更好的治疗效果。目的:探讨同种异体骨髓间充质干细胞移植在心肌梗死后心室重建中的作用机制。方法:取10只SD乳鼠与10只SD大鼠,进行骨髓间充质干细胞分离培养与鉴定。另取40只SD大鼠,随机分为4组,每组10只。模型组和乳鼠骨髓间充质干细胞移植组、大鼠骨髓间充质干细胞移植组均制备心肌梗死模型,假手术组予以假手术处理,造模后2个干细胞移植组分别予以相应的干细胞移植治疗。术后4周,检测各组大鼠的心功能;收集心脏组织标本,检测心脏梗死区胶原变化及梗死区血管密度。结果与结论:(1)心功能指标:术后4周,模型组各项指标与其他3组比较差异均有显著性意义(P<0.05);乳鼠骨髓间充质干细胞移植组和大鼠骨髓间充质干细胞移植组各组指标均优于模型组,但2组间差异无显著性意义(P>0.05);(2)心肌梗死区胶原含量:术后4周,模型组梗死区可观察到存在大量胶原组织形成,乳鼠骨髓间充质干细胞移植组和大鼠骨髓间充质干细胞移植组的胶原组织明显减少(P<0.05);(3)心肌梗死区血管密度:术后4周,假手术组梗死区血管密度均显著大于其他各组(P<0.05),乳鼠骨髓间充质干细胞移植组、大鼠骨髓间充质干细胞移植组梗死区血管密度均显著大于模型组(P<0.05);(4)结果表明,心肌梗死后实施成年鼠、乳鼠同种异体骨髓间充质干细胞移植均可以有效改善大鼠心功能,减少心肌梗死区胶原的形成,延缓梗死后心室重构。

间充质干细胞诱导糖尿病小型猪同种异体胰岛移植的免疫耐受

背景:胰岛移植为有望根治糖尿病的一种方法,而移植排斥问题阻碍了移植的开展,诱导受体对供体移植物的免疫耐受是解决同种异体移植排斥反应的关键。目的:观察骨髓间充质干细胞输注对糖尿病小型猪同种异体胰岛移植物存活时间的影响。方法:无菌条件下抽取动物骨髓,离心弃上清。取单核细胞层,洗涤后加入L-DMEM培养基,调整细胞浓度为1×109L-1。培养48h后换液去除未贴壁的细胞,依据贴壁培养法分离和扩增间充质干细胞。取第5代细胞作为移植供源,调整细胞浓度为1×1010L-1。四氧嘧啶制备糖尿病小型猪模型,随机分为骨髓细胞组和干细胞+骨髓细胞组,经肝门静脉分别植入胰岛细胞、骨髓细胞,胰岛细胞、骨髓细胞和骨髓间充质干细胞。结果与结论:骨髓间充质干细胞联合骨髓细胞输注较单纯骨髓细胞输注能显著延长同种异体小型猪胰岛移植物存活时间(P<0.05),同时受体血清胰岛素能较长时间维持较高水平。提示骨髓间充质干细胞输注能显著延长猪胰岛移植物存活时间,并促进胰岛移植物正常功能的发挥。

血管内皮生长因子基因转染骨髓间充质干细胞同种异体移植治疗大鼠急性心肌梗死

目的探讨同种异体血管内皮生长因子(VEGF)基因转染的骨髓间充质干细胞(MSCs)在大鼠梗死心脏局部存活、分化及对心功能的影响;明确同种异体干细胞及VEGF基因转染干细胞移植治疗急性心肌梗死(AMI)的可行性及效果。方法雄性SD大鼠30只,随机分为单纯注射培养基对照组、MSCs治疗组及VEGF基因转染MSCs治疗组。分离纯化雄性Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs),于左冠状动脉前降支结扎1h后植入到SD大鼠心组织,移植4周后检测心功能并取心脏行组织染色检查。结果异体大鼠MSCs可在梗死心组织定居、生存;免疫组化检测MSCs转化为心肌细胞及血管内皮细胞;与对照组比较VEGF基因转染异体细胞移植组左室射血分数升高(P<0.05),梗死边缘区心肌面毛细血管数目明显增加(P<0.05)。结论同种异体VEGF基因转染MSCs移植治疗AMI可行、有效。

间充质干细胞复合同种异体脱钙骨的形态学观察

目的探讨以间充质干细胞(MSC)与同种异体脱钙骨复合培养法构建组织工程化生物衍生骨的可行性。方法预先制备同种异体脱钙骨,取健康成人骨髓,用单核细胞分离液分离MSC,间充质干细胞基础培养基原代和传代培养。倒置显微镜下观察细胞生物学特性,用FITC标记的抗CD105对第3代细胞进行流式细胞鉴定,并与同种异体脱钙骨复合培养1周后行扫描电镜观察。结果原代及传代培养的MSC增殖迅速,第3代CD105阳性细胞占64.1%,复合同种异体脱钙骨培养1周后细胞生长状态良好,增殖迅速,在材料表面形成细胞层。结论未诱导的MSC是骨组织工程适宜的种子细胞,与同种异体脱钙骨复合可作为骨组织工程的载体。

组织工程化软骨细胞和骨髓间充质干细胞用于修复同种异体关节软骨缺损

背景:关节软骨几乎没有自身修复的能力,目前临床大多采用自体或异体软骨移植修复、软骨膜或骨膜移植修复、软骨细胞移植修复。由于自体软骨来源有限,异体软骨又存在慢性免疫排斥反应,最终可能导致预后不佳;软骨膜或骨膜移植修复的软骨易于退化,导致修复效果不佳。目的:总结组织工程化软骨细胞、骨髓间充质干细胞及两者共培养对同种异体软骨缺损修复作用的研究现状。方法:应用计算机检索PubMed数据库及中国期刊网全文数据库1994-01/2012-01有关组织工程化软骨细胞和骨髓间充质干细胞用于修复同种异体关节软骨缺损方面的文章,英文检索词为"cartilage defect,allograft,chondrocyte,mesenchymal stem cells,bone marrow mesenchymal stem cells",中文检索词为"软骨缺损,同种异体移植,软骨细胞,骨髓间充质干细胞"。排除重复性及非中英文语种研究,共保留35篇文献进行综述。结果与结论:随着体外细胞培养方法的不断改进,现已能够把软骨细胞从坚韧的软骨中分离出来,并获得大量高纯度的软骨细胞并繁殖出新生软骨细胞。软骨细胞培养增殖能力低,传代培养容易引起老化和去分化;而成体骨髓中骨髓间充质干细胞含量少,随传代次数的增多成软骨潜能明显降低。骨髓间充质干细胞和软骨细胞共培养,两种细胞相互促进增殖和分化,作为种子细胞可减少软骨细胞增殖传代次数并节省软骨细胞数量,与组织工程支架材料复合能有效修复关节软骨缺损。

两次同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死一例

1临床资料患者男性，76岁，因反复胸痛2年、加重7h入院。既往患有高血压、2型糖尿病、高脂血症病史。入院体检：血压130／70mm Hg（1mm Hg=0．133kPa），神志清楚．自动体位．