同种和异种混合淋巴细胞反应及分类混合淋巴细胞反应的比较

目的:对比体外人外周血淋巴细胞对于异种小鼠细胞和同种异体细胞混合淋巴细胞反应. 方法:建立异种-同种混合淋巴细胞反应模型,进行分类细胞反应试验. 结果:人外周血淋巴细胞对于异种小鼠细胞的反应明显低于对于同种异体细胞的反应(P<0.05).细胞分类研究显示:在异种混合淋巴细胞反应中,主要是CD4+T细胞通过间接途径受小鼠抗原刺激而增生;在同种混合淋巴细胞反应中,主要是CD4+T细胞通过直接途径受同种异体抗原刺激而增生.在两种混合淋巴细胞反应中,CD8+T细胞也参与. 结论:异种混合淋巴细胞反应弱于同种混合淋巴细胞反应, 异种细胞只通过间接途径刺激T细胞.同种和异种混合淋巴细胞反应均需要抗原提呈细胞参与,CD4+T淋巴细胞是反应的主要细胞.

CD28、CD40通路共刺激对淋巴细胞增殖反应的影响及CsA的抑制作用

目的 :探讨CD2 8、CD4 0通路共刺激后淋巴细胞增殖反应的变化及免疫抑制剂环孢素A(CsA)、抗CTLA4单克隆抗体对共刺激通路激活后淋巴细胞增殖反应的影响。方法 :采用单克隆抗体与淋巴细胞表面CD3、CD2 8及CD4 0L分子结合产生相应刺激信号 ,根据刺激条件不同设组为 :①抗CD3单抗单刺激 (A组 ) (剂量为 1 0 μg/L、1 0 0μg/L、1 0 0 0 μg/L) ;②抗CD3单抗 +抗CD2 8单抗 (B组 ) ;③抗CD3单抗 +抗CD4 0L单抗 (C组 ) ;④抗CD3单抗 +抗CTLA4单抗 (D组 )共刺激 (A、B、C、D组中抗CD3单抗剂量固定为 1 0 0 μg/L ,其余 3种单抗各设 1 0 μg/L、1 0 0 μg/L、1 0 0 0 μg/L 3种剂量 ) ;⑤抗CD3单抗 +抗CD2 8单抗 +抗CD4 0L单抗 (E组 ) ;⑥抗CD3单抗 +抗CD2 8单抗 +抗CTLA4单抗 (F组 )共刺激 (E、F组中抗CD3单抗和抗CD2 8单抗的剂量固定为 1 0 0 μg/L ,抗CD4 0L单抗和抗CTLA4单抗的剂量各设 1 0 μg/L、1 0 0 μg/L、1 0 0 0 μg/L) ;⑦CsA干预组 :抗CD3单抗 +CsA(G组 ) ;⑧抗CD3单抗 +抗CD2 8单抗 +CsA(H组 ) ;⑨抗CD3单抗 +抗CD2 8单抗 +抗CD4 0L单抗 +CsA(I组 ) ,G、H、I组中所有单抗浓度均固定为1 0 0 μg/L ,CsA浓度设为 1 0 μg/L、1 0 0 μg/L、1 0 0 0 μg/L。采用 [3 H]

测定同种异体反应中分泌细胞因子的T淋巴细胞及其临床意义初探(英文)

本研究目的是测定同种异基因外周血单个核细胞 (PBMNCs)刺激后分泌不同细胞因子的T淋巴细胞水平并对其临床意义进行研究 ,以建立一种监测同种异体反应性T淋巴细胞的新方法。首先 ,利用新颖的细胞因子分泌检测方法 (CKSA)从单细胞水平定量测定了人混合淋巴细胞反应后分泌IFN γ ,IL 4和IL 10的T淋巴细胞水平 ;然后根据上述实验结果 ,分析 2例接受异基因骨髓移植后发生急性移植物抗宿主病 (aGVHD)的患者外周血中分泌IFN γ的T细胞水平。结果表明 :经同种异体PBMNCs刺激后分泌IFN γ的T淋巴细胞水平显著升高 [(1.12± 0 .13) % ],而分泌IL 4和IL 10的T淋巴细胞则无升高 ,分别为 (0 .12± 0 .0 3) %和 (0 .10± 0 .0 3) %。患者外周血分泌IFN γ的T淋巴细胞水平和aGVHD的发生及严重程度有一定的相关性。结论 :利用CKSA从单细胞水平定量测定同种异体PBMNCs刺激后分泌IFN γ的T淋巴细胞水平的技术具有临床应用价值 ,可以应用于对aGVHD的识别。

人重组粒细胞集落刺激因子对淋巴细胞分泌细胞因子和移植排斥反应的影响

目的 研究人重组粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)对淋巴细胞分泌白细胞介素 4 (IL 4 )和干扰素 γ(IFN γ)的影响 ,探讨rhG CSF能否通过改变细胞因子分泌而减轻急性移植物抗宿主病 (aGVHD)的发生。方法 将供髓小鼠 (雄性BALB/C ,H 2d)随机分为两组 ,rhG CSF处理组 (实验组 )和未经处理组 (对照组 )。分别培养两组小鼠外周血淋巴细胞 ,以双抗夹心ELISA法检测上清液中淋巴细胞所分泌的细胞因子IL 4和IFN γ。再用主要组织相容性抗原 (MHC)完全不合的纯种近交系小鼠建立allo BMT/aGVHD动物模型 ,观察移植排斥反应发生程度。结果 实验组外周血淋巴细胞培养上清液中IFN γ浓度较对照组明显降低 ,而IL 4浓度较之升高 ;接受经rhG CSF动员后进行骨髓移植的小鼠较供者未经动员者aGVHD发生率及程度低。结论 rhG CSF可能通过改变造血干细胞移植物中淋巴细胞因子分泌而减轻aGVHD的发生。

移植前选择性去除同种异体反应供者淋巴细胞预防移植物抗宿主病的实验研究

目的探讨在移植前选择性去除同种异体反应的供者淋巴细胞预防移植物抗宿主病（GVHD）的效果。方法以（BALB／c×C57BL／6）F1雌性小鼠（H-2^d/^b）为受鼠，于第0天接受亚致死量的^60Co γ射线全身照射（TBI），总剂量为4Gy，第1天接种P388D1白血病细胞，第2天输注由C57BL／6雄性小鼠（H-2^b）为供鼠提供的不相匹配的供者脾淋巴细胞，第6天再次TBI 9Gy，第7天输注由（BALB／c×C57BL／6）F1雄性小鼠（H-2^d/^b）提供的骨髓造血干细胞。结果以TBI选择性去除同种异体反应供者淋巴细胞组的小鼠无白血病和GVHD的发生，生存期超过了210d。对照组的小鼠出现了明显的GVHD、白血病或因出血、感染导致的死亡，生存期短，为20～36d（P〈0．01）。结论在造血干细胞移植前输注不相匹配的供者淋巴细胞诱导移植物抗白血病（GVL）效应，然后再选择性去除同种异体反应的供者淋巴细胞来预防GVHD的发生是可行的。

共刺激信号对脐血淋巴细胞增殖反应及PLCγ1表达的影响

目的探讨新生儿出生时淋巴细胞功能低下的可能环节。方法给予成人外周血和脐血淋巴细胞共刺激(抗CD3、抗CD28单抗)和跨膜刺激(phorbolmyristateacetate,PMA和ionomycin,IM)后,应用犤3H犦-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应;WesternBlot法检测淋巴细胞磷脂酶Cγ1(phospholipaseCγ1,PLCγ1)的表达。结果抗CD3+抗CD28单抗共刺激后,脐血淋巴细胞的增殖反应明显增强;PMA+IM跨膜刺激后,脐血淋巴细胞增殖反应的改善更接近于成人。给予抗CD3+抗CD28单抗共刺激后,脐血淋巴细胞PLCγ1的表达低于成人外周血;刺激前后脐血淋巴细胞PLCγ1表达差异无显著性,而成人外周血淋巴细胞PLCγ1表达则有显著增加。结论脐血淋巴细胞活化的下游途径可以发挥更接近于成人的作用,推测其功能障碍可能主要在于淋巴细胞活化的早期阶段。

TBI和环磷酰胺选择性去除同种异基因反应供者淋巴细胞的研究

本研究用全身照射(TBI)和环磷酰胺(CY)选择性去除同种异基因反应的供者淋巴细胞,为预防移植物抗宿主病(GVHD)的发生探索新的手段。以(BALB/c×C57BL/6)F1雌性小鼠(H-2d/b)为受鼠,于第0天接受亚致死量的60Co-γ射线全身照射,总剂量为4Gy,第1天接种P388D1白血病细胞,第2天输注由C57BL/6雄性小鼠(H-2b)为供鼠提供的MHC不匹配的供者脾淋巴细胞,在造血干细胞移植前诱导移植物抗白血病效应(GVL)。第6天腹腔注射环磷酰胺(CY)200mg/kg或再次TBI9Gy,选择性去除同种异基因反应供者淋巴细胞,第7天输注(BALB/c×C57BL/6)F1雄性小鼠(H-2d/b)提供的骨髓造血干细胞。结果显示:以CY和TBI选择性去除同种异基因反应供者淋巴细胞组的小鼠无白血病和GVHD的发生,生存期超过了210天,于移植后第21天出现完全供者嵌合,然后嵌合率下降,第90天表现为混合嵌合体(MC)。对照组的小鼠出现了白血病和GVHD,出血、感染明显,生存期短,为20-36天(P<0.01)。结论:同基因骨髓移植前输注不相匹配的供者脾细胞诱导GVL效应,然后再通过TBI和CY选择性去除同种异基因反应的供者淋巴细胞来预防移植物抗宿主病(GVHD)的发生是可能的。

同种异体反应性淋巴细胞克隆疫苗回输诱导受体特异性免疫耐受研究

目的 探讨同种异体移植抗原特异性免疫耐受诱导的新途径。方法 以同种异体反应性淋巴细胞克隆在体外培养条件下大量增殖后作为自身独特性疫苗 ,体内注射免疫家兔 ,以混合淋巴细胞反应来观察免疫前和免疫后对供体淋巴细胞刺激指数 (SI)的变化。结果 同种异体反应性自身独特型淋巴细胞疫苗具有显著诱导特异性免疫应答抑制现象 ,SI值显著降低 (P <0 .0 0 5 ) ,而对卡介苗诱导的特异性免疫应答并未因独特型淋巴细胞疫苗的应用下降。结论 同种异体反应性自身独特型淋巴细胞疫苗有可能成为诱导抗原特异性免疫耐受的一种手段 。

不同免疫状态肝移植受者外周血T淋巴细胞亚群及共刺激分子的表达及意义

目的探讨不同免疫状态肝移植受者外周血T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+)、共刺激分子(CD80、CD86)的表达,及其判断肝移植受者不同免疫状态的价值。方法 52例肝移植受者,分为免疫耐受组28例、急性排斥反应组(排斥组)13例、药物不良反应组(药物反应组)11例。采用流式细胞术测定三组患者外周血CD4+、CD8+及CD80、CD86的表达水平,并计算CD4+/CD8+。结果与免疫耐受组和药物反应组比较,排斥组患者外周血CD8+水平较低,而CD4+、CD4+/CD8+、CD80、CD86均较高(P<0.05～0.01)。与免疫耐受组比较,药物反应组患者外周血CD8+、CD80、CD86水平明显升高(P<0.05～0.01),而CD4+、CD4+/CD8+差异无统计学意义(均为P>0.05)。结论免疫T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)、CD80、CD86可作为判断肝移植受者免疫状态的指标。

原发性胆汁性肝硬化患者B淋巴细胞刺激因子基因表达的测定及临床意义

目的建立检测人B淋巴细胞刺激因子(BLyS)mRNA的相对定量方法,探讨其基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性。方法基于TaqM an-MGB探针技术,以18SrRNA为内参照,通过目的基因与内参基因荧光强度达到一定阈值时的循环数之差(△CT值)定量原始模板浓度,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)相对定量方法,检测30名正常人和40例PBC患者外周血单个核细胞(PBMC)BLyS基因的表达。结果PBC患者外周血单个核细胞BLyS mRNA表达的△CT值为9.5±2.5,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),其原始模板浓度为正常对照组的4.3倍。PBC患者中抗核抗体(ANA)阳性占80%;其中ANA 1∶100组BLyS检测的△CT为11.4±0.9,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而ANA 1∶1 000和ANA 1∶10 000组BLyS的△CT值与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001),两组间△CT值比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论PBC患者PBMC BLyS mRNA表达水平明显升高,且与ANA滴度相关。

ICOS-Ig融合蛋白阻断ICOS信号通路可抑制异基因反应性T淋巴细胞的功能

本研究探讨ICOS-Ig融合蛋白阻断ICOS-B7h信号通路对异基因反应性T淋巴细胞的作用和机制。建立稳定高表达ICOS-Ig的CHO细胞株,培养制备纯化的ICOS-Ig融合蛋白;以C57BL/6小鼠脾脏来源的CD4+淋巴细胞为反应细胞,BABL/C骨髓源成熟树突状细胞为刺激细胞,应用不同浓度梯度的ICOS-Ig干预,以相同浓度的人Ig作为对照。结果显示:获得的目标蛋白的分子量为54kD,内毒素含量<10EU/ml。ICOS-Ig在≥10μg/ml时可显著减少DC刺激引起的异基因反应性T淋巴细胞的增殖效应(p<0.01)。ICOS-Ig不影响T淋巴细胞的活化,ICOS-Ig浓度与CD4+ T淋巴细胞的凋亡成正相关。单纯刺激组、ICOS-Ig10μg/ml和20μg/ml干预组的CD4+Annexin V+PI-细胞群的频率分别为15.1%、26.4%和33.6%。ICOS-Ig作用后,Th1细胞因子TNFα分泌降低,Th2细胞因子IL-4分泌增加。结论:ICOS-Ig融合蛋白阻断ICOS通路可明显减弱异基因反应性T淋巴细胞的增殖反应,并改变Th细胞的极化,对CD4+ T淋巴细胞的活化无影响,但可促进活化的T淋巴细胞凋亡。

重组人粒细胞刺激因子联合VDLP方案治疗费城染色体阴性急性淋巴细胞白血病患者的临床效果

目的研究重组人粒细胞刺激因子联合VDLP方案治疗费城染色体阴性急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的临床效果。方法选取2014年3月~2018年3月肇庆市第一人民医院和平煤神马医疗集团总医院收治的60例费城染色体阴性ALL患者作为研究对象,采用随机数字表法将其分为对照组和研究组,每组各30例。对照组患者采用VDLP方案治疗,研究组患者在对照组的基础上联合重组人粒细胞刺激因子治疗。比较两组患者的治疗效果、白细胞和中性粒细胞绝对值降低时间、不良反应总发生率及治疗前后生活质量(GQOLI-74)评分。结果研究组患者的总缓解率[70.00%(21/30)]高于对照组[43.33%(13/30)],差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者的白细胞和中性粒细胞绝对值降低时间均短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者的不良反应总发生率[6.67%(2/30)]低于对照组[26.67%(8/30)],差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者的心理功能、躯体功能、物质生活、社会功能评分均高于治疗前,且研究组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论重组人粒细胞刺激因子联合VDLP方案治疗费城染色体阴性ALL患者,能有效提高治疗效果,缩短白细胞和中性粒细胞绝对值降低时间,降低不良反应发生率,改善患者预后。

抗人B-淋巴细胞刺激因子噬菌体单链抗体库的构建

目的构建抗人B-淋巴细胞刺激因子噬菌体单链抗体库。方法从B-淋巴细胞刺激因子免疫小鼠的脾细胞中抽提总RNA,经逆转录聚合酶反应合成cDNA,分别扩增小鼠重链可变区基因和轻链可变区基因。通过重叠延伸拼接法将重链可变区基因和轻链可变区基因组装成单链抗体基因,重组于载体pFUSE5,电转化E.coliXL 1-Blue。在辅助噬菌体援救下,构建成噬菌体单链抗体库。采用聚合酶链反应、核苷酸序列测定和酶联免疫分析鉴定单链抗体库的特征。结果本抗体库的噬菌体库容量约1×106,单链抗体基因插入效率为93%,存在序列差异性并含有抗B-淋巴细胞刺激因子单链抗体。结论成功地构建了抗人B-淋巴细胞刺激因子单链噬菌体抗体库,为筛选抗B-淋巴细胞刺激因子单链抗体药物奠定了良好的基础。

CD28^+T淋巴细胞的表达与心脏移植急性排斥反应的相关性研究

目的:检测CD28+T淋巴细胞在心脏移植急性排斥反应(AR)期的表达变化情况,探讨该变化与AR相关性。方法:用流式细胞仪检测正常大鼠组(T0组)、手术创伤组(T1组)、同系心脏移植组(SD→SD)(T2组)、同种心脏移植组(Wistar→SD)(T3组)CD28+T淋巴细胞的表达百分率;并对心脏移植组AR进行分级;同时分析CD28+T与AR的相关关系。结果:T1组与T0组CD28+T淋巴细胞的表达无显著差异;T2组总体CD28+T淋巴细胞的表达水平较T0组、T1组显著增加(P<0.05)。T3组总体CD28+T淋巴细胞的表达水平较T0组、T1组增加更显著(P<0.01)。同种心脏移植组AR显著高于同系心脏移植组。T2、T3心脏移植组CD28+T与AR严重程度成显著正相关。结论:心脏移植AR严重程度与CD28+T表达增高成正相关,CD28+T表达增高预示急性排斥反应的发生。

肾移植排斥反应中细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4的作用

背景:细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4是新近发现的共刺激分子,在肿瘤及自身免疫性疾病中研究较多,在肾移植领域缺少研究。目的:探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4在肾移植排斥反应中的作用。方法:纳入肾移植患者50例,根据移植后肾功能分为2组,急性排斥组20例,移植肾功能稳定组30例。同时选择30例健康查体者作为健康对照组。分别抽取外周静脉血,采用ELISA法及流式细胞术检测观察对象血清及外周血淋巴细胞中的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4水平。结果与结论:细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4在肾移植后急性排斥组、肾功能稳定组及健康对照组血清中的表达水平差异有显著性意义(F=70.008 1,P=0.000 0)。肾功能稳定组显著低于健康对照组(P=0.000 0),急性排斥组显著低于健康对照组(P=0.000 0),急性排斥组显著低于肾功能稳定组(P=0.000 0)。细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4在肾移植后急性排斥组、肾功能稳定组及健康对照组淋巴细胞中的表达水平差异无显著性意义(F=1.865 6,P=0.161 7)。提示细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4在肾移植患者发生排斥反应时血清中表达减低,具有一定的相关性,可能参与了排斥反应的发生。