程序降温法用于同种瓣膜的制备

目的 研究同种瓣膜的制备方法 ,减轻制备过程中的细胞损伤。方法 记录程序降温过程组织细胞的降温曲线 ,比较不同方法的组织细胞损伤。结果 对照组在 - 4℃～ - 6℃区域 ,出现明显的降温速率减缓 ,甚至小幅度温度回升过程。实验组保持均匀的降温速率。实验组组织细胞的损伤程度较对照组明显减轻。结论 同种瓣膜的降温过程中存在相变点的异常温度变化 。

液氮冷冻保存同种瓣膜临床使用现状

同种瓣膜在心脏外科使用越来越频繁 ,被用于右心室和左心室流出道重建 ,也被用于三尖瓣、二尖瓣替换。但是同种主动脉用于肺动脉瓣替换和同种肺动脉用于高压动脉血管替换的耐久性较差。其优点为优良的血流动力学特性 ,无需抗凝治疗和血栓栓塞并发症发生率低。但取材限制和远期狭窄问题使其使用受到限制。

用人同种瓣膜的主动脉瓣置换手术

当前用于主动脉瓣病手术的代用品主要是以机械瓣为主,其次是用谷醛处理过的异种生体瓣。机械瓣具有耐久性优点,但抗细菌感染力差,患PVE(假体瓣性心内膜炎)常是致命的,并且需要终生的抗凝疗法,对血栓病或因抗凝疗法所致的出血也应十分注意。异种生体瓣几乎不需抗凝疗法,但经过6～7年后常会发生瓣膜功能不全。保存得当的人同种瓣完全不需要术后的抗凝疗法,抗菌力强。

动脉血流对深低温保存同种瓣膜活性的影响

目的研究动脉血流在同种心脏瓣膜制备保存中对瓣膜的保护作用及可能机制。方法 12只健康成年中国白兔作为受体,1个月～1.5个月龄的中国白兔36只作为供体,取其带瓣主动脉,随机分为A组、B组、C组。A组作为对照组梯度降温后深低温液氮保存;B组、C组作为实验组均移植于受体的两侧颈动脉,于术后48h、72h分别取出,梯度降温后深低温液氮保存。1个月后,观察瓣膜组织的结构变化并检测其细胞活率。结果光镜观察3组室面层皱缩程度相近,但B组、C组纤维质层皱缩程度均小于A组;B组、C组细胞活率均高于A组(P<0.05),但B组与C组细胞活率差异无统计学意义(P>0.05)。结论动脉血流可减小同种瓣室面层与纤维质层之间的舒缩程度差异,减小瓣膜保存过程中的细胞损伤。

去细胞同种心脏瓣膜的再内皮细胞化

目的:初步构建受体内皮细胞化的组织工程同种心脏瓣膜,减轻移植后免疫排斥反应,并探讨内皮细胞适宜的种植方法,增强内皮细胞与细胞外基质的黏附性。方法:实验于2004-06在阜外医院心血管外科先心病研究室完成。①实验材料:取冠状动脉搭桥患者术中剩余的大隐静脉(该材料是术中多余弃掉部分,患者知情同意),研究方案获伦理委员会批准。②实验方法:采用低渗液-去污剂(10g/L去氧胆酸)-核酸酶法去除同种心脏瓣膜组织中的全部细胞成分,构建去细胞的同种心脏瓣膜;取培养3～4代的成人大隐静脉内皮细胞,依照内皮细胞密度分为生理密度种植组:以1.5×108L-1密度种植;超生理密度种植组:以(4～5)×108L-1密度种植;生理密度反复种植组:以1.5×108L-1密度,反复种植3d。③实验评估:种植于脱去全部细胞的同种心脏瓣膜上,静态培养5d,扫描电镜观察内皮细胞的覆盖情况。结果:去细胞同种心脏瓣膜的细胞外基质有着良好的细胞黏附性;3种不同的内皮细胞种植密度,其中以内皮细胞超密度(4～5)×108L-1种植,静态培养5d,同种组织瓣膜表面基本覆盖单层内皮细胞,细胞间相互延伸汇合,形态结构良好。以生理密度种植内皮细胞覆盖率较低,细胞大多孤立存在,细胞间较少相互延伸汇合。生理密度反复种植3d,内皮细胞覆盖率低于超生理密度种植组,细胞间可见相互延伸汇合,细胞形态结构良好。结论:去细胞同种心脏瓣膜的再内皮细胞化保留了同种心脏瓣膜的正常结构、功能及良好的组织相容性,有望延长瓣膜的使用寿命,取得更好的临床疗效。

同种心脏瓣膜、带瓣血管的免疫原性及其移植后受体细胞替换

液氮冻存的人同种异体心脏瓣膜、带瓣血管（ＣＶＨ）的耐久性及其远期疗效是影响其临床应用的主要因素。ＣＶＨ移植后的远期疗效（１２～１５ 年后），与植入时供体组织活性的保持及其程度、植入后受体免疫排斥反应的有无及其程度、受体细胞替换供体组织的有无及其程度均有着密切的关系。本文就ＣＶＨ的免疫原性及其移植后免疫排斥反应、移植后受体细胞替换供体组织方面的实验研究和临床研究结果作一简述。

海洋制剂金蓝宝在大鼠同种异体瓣膜移植中的免疫抑制作用

目的探讨海洋制剂金蓝宝在减轻排斥反应、改善同种带瓣主动脉移植远期疗效中的作用.方法成年SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体.分别行同种异体带瓣主动脉腹主动脉的异位移植,实验组移植后给予金蓝宝(JLB)0.5g·kg-1,共2周.对照组不做任何处理.各组术后2,4,8,12周使用流式细胞仪测定大鼠CD25和CD71的表达,免疫组化测定移植物CD28的表达,同时进行标本组织病理学观察.结果实验组在移植后早期(2～4周)CD25、CD71和CD28的表达均明显低于对照组.结论海洋制剂金蓝宝可抑制同种异体瓣膜移植后早期的免疫排斥.

同种生物瓣膜低温保存效果的评价

目的从功能代谢角度评价深低温保存生物瓣膜的实际效果,观察冷冻保存对同种带瓣膜动脉活性的影响。方法主动脉瓣膜取自空气栓塞处死的兔子,修剪后程控降温,液氮长期保存。复温后光镜检查,体外培养检测糖消耗量,同时采用组织块贴壁法进行原代细胞培养检测细胞生长活性。结果带瓣动脉解冻后弹性纤维结构基本完整,有轻度水肿和黏膜变性,动脉壁结构大致正常;体外培养葡萄糖消耗量平均为>16mmol/dl.d;复温后材料有生长和代谢活性。结论同种生物瓣膜低温保存技术较稳定较理想。

液氮保存对人同种瓣组织代谢及活性的影响

目的 主要观察液氮 (- 1 96℃ )保存 1～ 2 4个月不同时间瓣膜组织葡萄糖代谢率和同位素标记的胸腺嘧啶核苷掺入量的变化 ,为临床适用的冷冻保存人同种主动脉瓣的适宜保存期限提供实验依据。方法 选取健康成年男性的主动脉瓣膜 2 0个。实验依据保存时间分为 1 0组 ,Ⅰ组为新鲜对照组 ,Ⅱ～Ⅹ组分别为冷冻保存 1～ 2 4个月瓣膜。新鲜瓣膜取材后直接供实验用 ,冷冻组各瓣膜缓慢降温 (1℃·min- 1 ) ,液氮中保存 ,快速复温。瓣膜置入培养液 2 4h ,置入前后分别测定培养液中的葡萄糖含量并计算其差值。同位素测定标本加入氚标记的胸腺嘧啶核苷 ,做CBPM计数 ,计算每mg组织3H TdR掺入量。结果 新鲜瓣膜组葡萄糖消耗量和3H TdR掺入量均最高 ,冷冻保存组随液氮保存时间延长 ,组织的葡萄糖消耗量和3H TdR掺入量逐渐减低 ;冷冻保存 1～ 1 5个月瓣膜葡萄糖代谢率与新鲜瓣膜组比较无统计学意义 ,冷冻保存 1 8～ 2 4个月瓣膜葡萄糖消耗量明显减低 (P <0 .0 5 ) ,冷冻保存 1 2～ 2 4个月瓣膜3H TdR掺入量较对照组明显减低 (P <0 .0 5 )。结论 液氮保存对人同种瓣膜组织葡萄糖代谢率和胸腺嘧啶核苷掺入量有一定影响 ,其程度随保存时间增长而加重 ,液氮保存 1 5～ 2 4个月瓣膜组织代谢率明显减低 ,因此瓣膜耐久性可?

海藻糖保护同种带瓣大动脉的最适浓度

背景：目前液氮低温保护组织和器官技术已经非常成熟,但其保护剂一直以来争论不一。目的：观察不同冷冻保护剂对液氮深低温冻存同种带瓣大动脉组织细胞凋亡和代谢的影响,寻求最佳的冷冻保护剂及冷冻保护剂的最适浓度。方法：取新西兰大白兔带瓣主动脉、肺动脉标本,将其在液氮中冻存12,15,18个月,冻存液分别使用0.1mol/L二甲基亚砜,0.1mol/L海藻糖,0.1mol/L海藻糖＋0.1mol/L二甲基亚砜,0.2mol/L海藻糖＋0.1mol/L二甲基亚砜,0.3mol/L海藻糖＋0.1mol/L二甲基亚砜。标本复温后,免疫组织化学方法检测标本的细胞凋亡情况,葡萄糖消耗量测定法检测组织细胞的代谢水平。结果与结论：免疫组织化学和葡萄糖消耗量测定结果均显示经0.1mol/L海藻糖＋0.1mol/L二甲基亚砜,0.2mol/L海藻糖＋0.1mol/L二甲基亚砜冻存液处理的标本冻存效果最好,其次是经0.3mol/L海藻糖＋0.1mol/L二甲基亚砜处理和经0.1mol/L海藻糖单独处理的标本,单独使用0.1mol/L二甲基亚砜处理的标本冻存效果最差。说明海藻糖对液氮深低温保存同种带瓣大动脉活性有很好的保护作用,单独使用海藻糖优于单独使用二甲基亚砜,联合应用海藻糖和二甲基亚砜效果更好,且联合应用的海藻糖最佳浓度范围是0.10~0.20mol/L。

无支架人工瓣膜治疗急性感染性心内膜炎

目的 急性感染性心内膜炎的外科治疗 ,传统上的经验是使用同种生物瓣膜 (同种主动脉带瓣管道 ) ,但是由于来源的短缺 ,型号不全等种种问题 ,限制了其大量使用。Shelhigh无支架生物瓣膜和带瓣管道在临床的使用 ,使外科医生有了更大的选择空间。本研究目的是通过比较接受同种瓣膜植入的患者和接受Shelhigh生物瓣膜植入的患者在手术后心脏功能的恢复情况 ,以及再感染的发生率等指标来比较两种瓣膜的差异 ,最后评价Shelhigh瓣膜是否可以替代同种生物瓣膜在临床使用的结论。方法 :从 1997年 1月到 1999年 11月 ,在德国心脏中心 (柏林 ) ,有 6 8名患者因为主动脉瓣心内膜炎以及瓣环脓肿接受了同种瓣植入手术 ,平均年龄 (5 3± 14 )岁 ,4 6名男性和 2 2名女性 ,作为对照组随访至 2 0 0 0年1月 ;研究组为 2 0 0 1年 1月至 11月连续 2 3名感染性心内膜炎患者 ,使用Shelhigh瓣膜或带瓣管道进行了主动脉瓣膜置换手术。平均年龄 (4 8± 2 0 )岁 ,男性 14名 ,女性 9名 ,随访到 2 0 0 1年 1月。在人口统计学上 ,两组间没有显著差异 ,患者都接受了详细的心脏超声检查来明确心内膜炎扩展情况以及左室和瓣膜的功能。结果 :对照组 6 0d死亡率为 16 % ,研究组为 13%。 (NS)再感染率为对照组 4 % ,研究组为零。

抗菌处理对猪肺动脉瓣膜细胞活性及组织结构的影响

目的 探讨抗菌处理对肺动脉瓣膜细胞活性和组织结构的影响因素及优化同种瓣膜的制备方法。方法 3组猪肺动脉瓣叶 (n =6 )浸泡在含抗生素的DMEM液中 ,在不同温度下孵育 6h或 2 4h。然后通过XTT比色法测定瓣膜细胞活性 ,用免疫组织化学荧光染色检测瓣膜细胞和细胞外基质 ,并行光镜观察。结果 抗菌时间为 2 4h ,37℃抗菌组与 4℃抗菌组的瓣膜细胞活性与瓣膜组织结构无明显区别。抗菌 6h组的瓣膜细胞活性与瓣膜组织结构明显优于抗菌 2 4h组。结论 抗菌时间为 2 4h时 ,抗菌温度对瓣膜细胞活性及结构完整性无明显影响。抗菌时间缩短至6h 。

连续冻融对硫酸软骨素保存心脏瓣膜的影响

①目的观察舍硫酸软骨紊（cs）的液氮冷冻保存的心脏瓣膜在连续冻融下细胞活力及瓣膜组织学结构的变化。②方法选取60只兔主动脉随机分成6组，每组10只并经灭茵处理。对照组灭茵后立即检测；实验Ⅰ—Ⅴ组转入装有7．5％硫酸软骨素的抗冻剂的无茵冻存管内。实验Ⅰ、Ⅲ、V组分别于瓣膜保存4、16、32周后取出复温，然后立行Ⅰ检测。实验Ⅱ、Ⅳ组分别于4、16周后取出，解冻后在室温下放置10min，更换保存液后再次按照程序控速降温法冷冻保存，4周后再次取出复温，然后检测。③结果实验I、Ⅲ、Ⅴ组瓣膜组织学结构损伤较轻。与对照组相比，实验Ⅰ组细胞活力下降不明显（P〉0．05）；实验Ⅲ、Ⅴ组细胞活力明显低于对照组（P〈0．05），实验Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ组之间比较，细胞活力差异无显著性（P〉0．05）。实验Ⅱ、Ⅳ组瓣膜组织学结构损伤较重。实验Ⅱ、Ⅳ组细胞活力明显低于对照组和实验Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ组（P〈0．05）。④结论舍硫酸软骨素的液氮冷冻保存的心脏瓣膜在单次冷冻保存32周内皆可作为移植瓣膜选用；连续冻融的瓣膜，不管首次保存时间多短，一旦融化则不可再用，即便是用程序控速降温法并加入辅保护剂硫酸软骨素的冷冻液保存的亦无法再用。

无支架二尖瓣制备、保存和体外三尖瓣置换技术探讨

目的观察深低温保存猪二尖瓣超微结构，探索无支架二尖瓣制作方法和置换三尖瓣技术。方法采用猪二尖瓣制成无支架瓣膜，抗生素灭菌深低温保存，透射电子显微镜观察深低温保存１个月的猪二尖瓣组织结构。将离体猪心三尖瓣切除，将无支架猪二尖瓣前瓣环缝合于隔瓣环，二尖瓣后瓣环缝合于三尖瓣前后瓣环，两乳头肌缝合于右心室前壁，完成无支架二尖瓣置换三尖瓣，注水试验观察瓣膜启闭功能。结果透射电子显微镜观察到，深低温保存猪二尖瓣内皮细胞结构完整，胶原纤维结构致密，排列整齐，成纤维细胞胞膜完整，细胞核无固缩现象，线粒体无明显肿胀。无支架二尖瓣置换的离体猪心三尖瓣启闭功能良好。结论深低温保存的无支架猪二尖瓣结构完整，活性得到很好保持。瓣膜设计合理。