经液氮保存具有活性的同种生物瓣脱细胞支架的制备

目的为体外构建组织工程瓣提供脱细胞的同种生物瓣支架材料,并建立相应的技术方法。方法选取经液氮保存、具有活性的同种生物带瓣管道作为实验材料,用含十二烷基硫酸钠(SDS)的Tris低渗缓冲液脱去同种带瓣管道存在的细胞;固定剂固定后,分别行HE染色、胶原纤维和弹力纤维染色的光镜和扫描电镜观察、摄片。结果用质量浓度为0.03%SDS的Tris低渗缓冲液与同种瓣膜共同孵育48h,完全脱去了表面的内皮细胞(ECs),又较完整地保留了胶原纤维和弹力纤维等细胞外基质主要成分,其形态学结构在脱细胞前后无明显改变;瓣叶中心部位有部分成纤维细胞存留。而对于脱主动脉壁细胞,质量浓度为0.1%SDS更合适。结论质量浓度为0.03%～0.1%SDS的低渗缓冲液对制备脱细胞的同种生物瓣支架效果较佳,有利于同种瓣再内皮化时种植细胞的粘附和扩增,可进一步应用于组织工程瓣体外构建的研究。

两种细胞洗涤剂制备脱细胞同种生物带瓣管道支架的研究

目的 比较去氧胆酸钠(deoxycholic acid,DOA)和十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulphate,SDS)两种细胞洗涤剂制备脱细胞的同种生物带瓣管道(homograft bioprosthetic tube valved,HBTV)支架的效果,为体外构建组织工程瓣(tissue- engineering heart valve,TEHV)提供同种生物瓣支架材料。 方法 对同种带瓣主动脉管道和带瓣肺动脉管道,分别用含0 .5 % DOA或0 .0 3% SDS的Tris低渗缓冲液共同孵育4 8h,脱去经液氮保存、具有活性的HBTV表面的内皮细胞,固定剂固定后分别进行HE、胶原纤维和弹力纤维染色的光镜观察,以及扫描电镜观察,摄片。 结果 两种洗涤剂均完全地脱去了HBTV表面的内皮细胞,中心部位的成纤维细胞有部分存留;细胞外基质,如胶原纤维和弹力纤维等均较完整地保留下来,其形态结构与脱细胞前无明显改变。 结论 0 .0 3%～0 .1% SDS或0 .5 % DOA的低渗缓冲液对制备HBTV脱内皮细胞支架效果均较佳,有利于HBTV再内皮化时种植细胞的黏附和扩增,可进一步应用于体外构建TEHV的研究。对于脱主动脉壁的细胞,SDS浓度应增至0 .1%为佳。

组织工程心脏瓣膜支架的研究现状和发展趋势

瓣膜疾病是心脏外科常见病、多发病，每年全世界瓣膜置换术约17万例，我国成年风湿性心脏病患病率2.34％-2.72％，等待瓣膜置换近20万例。现有临床瓣膜替代物各有不足之处：机械瓣置换术后需终生抗凝，易致出血或栓塞；异种生物瓣易退行性变、钙化，10年左右需再次手术；同种生物瓣来源困难，并潜在排斥反应。寻找和研制更理想的瓣膜替代物一直是广大心外科医生努力方向，20世纪80年代后期出现的组织工程心脏瓣膜（TEHV）为实现这一梦想带来新的曙光。心脏瓣膜部位、功能特殊，机械强度和弹性要求较高，使近年TEHV研究较其他（骨、皮肤、血管等）组织工程滞后。作为组织工程基本要素之一的支架材料近年研究活跃。以支架材料为突破口调控种子细胞与细胞外基质（ECM），现已成为TEHV构建关键环节。