齐口裂腹鱼同种移植炎症因子AIF-1的克隆及蛋白质结构预测

同种移植炎症因子AIF-1是一种细胞质的钙离子结合蛋白。本研究采用RT-PCR方法从齐口裂腹鱼脾脏中克隆到AIF-1,并运用生物信息学方法预测其蛋白质结构。结果表明:齐口裂腹鱼AIF-1基因包含一个444 bp的完整阅读框,编码一个由147个氨基酸组成的蛋白。AIF-1蛋白预测分子量为16.5 KDa,理论pI为4.43,无信号肽,有一个跨膜区,二级结构以α-螺旋为主,未见β-折叠区。同源建模显示齐口裂腹鱼AIF-1蛋白与已测定的小神经胶质细胞特定蛋白具有非常相似的三级结构。这为深入研究AIF-1分子结构和功能积累了参考资料。

牦牛同种移植炎症因子AIF-1基因的克隆与表达

采用RT-PCR方法从成年麦洼牦牛脾中克隆到同种移植炎症因子AIF-1的编码基因,并研究了其在各组织中的表达模式。结果表明,AIF-1基因包含一个444 bp的完整阅读框,编码一由147个氨基酸组成的蛋白,推测其分子质量约为16.6 ku,与其他多种动物的AIF-1的氨基酸序列有89%-95%的同源性。RT-PCR半定量分析结果显示,AIF-1基因在麦洼牦牛的脾、肾中都有转录,在脾中表达水平相对较高,而在肝、乳腺、心、肌肉中未见明显表达。

牦牛AIF-1蛋白表达及对巨噬细胞炎性因子mRNA的影响

旨在对牦牛同种移植炎症因子-1(allograft inflammatory factor-1,AIF-1)蛋白进行原核表达、纯化,并探讨其对巨噬细胞炎性因子的影响。采用q-PCR检测AIF-1基因在牦牛5种组织中的表达量,构建原核表达载体表达纯化AIF-1蛋白,q-PCR检测小鼠巨噬细胞4种炎性因子的表达量。结果表明,AIF-1基因在麦洼牦牛脾中表达水平最高,极显著高于其它组织(P<0.01)。表达并纯化出约29.47 ku的AIF-1重组蛋白,1.0、10.0、100.0μg·mL^-1 AIF-1蛋白均能促进小鼠巨噬细胞IL-1β、IL-6、TNF-α和iNOS的表达。这表明AIF-1在巨噬细胞免疫应答中发挥着一定作用,为深入研究牦牛AIF-1功能提供参考。