移植物厚度对角膜内皮失代偿行简易后弹力层角膜内皮移植效果的影响

背景:研究表明较薄移植物视力恢复更快、排斥风险更低,国内缺乏对内皮移植术后不同植片厚度的临床疗效分析,因此,确定最佳移植物厚度对于提高手术疗效至关重要。目的:评价简易后弹力层剥离内皮角膜移植术后不同植片厚度对视力恢复及其他预后指标的影响。方法:选取2013年1月至2023年2月在北部战区总医院接受简易后弹力层剥离内皮角膜移植手术治疗的角膜内皮失代偿患者共72例(72眼),其中薄植片组(<100μm)32例(32眼),厚植片组(≥100μm)40例(40眼)。随访1年,观察两组术前及术后1,3,6,12个月的最佳矫正视力,术后1年角膜内皮细胞数、角膜植片透明度、术后并发症、植片生存情况。结果与结论:①两组患者术后视力较术前均有显著提高,薄植片组患者术后3个月最佳矫正视力优于厚植片组(P<0.05);②两组术后1年角膜内皮细胞数及植片透明度比较差异无显著性意义(P>0.05);③两组患者继发性青光眼、植片免疫排斥、植片移位等术后并发症发生率比较差异无显著性意义(P>0.05);④两组术后1年植片生存率比较差异无显著性意义(93.8%,92.3%,P>0.05);⑤结论:简易后弹力层剥离内皮角膜移植术是一种安全有效的角膜内皮移植手术方式,其术后疗效与传统后弹力层剥离内皮角膜移植术相似,而且植片植入方式更为简便。较薄植片能够更早提供最佳矫正视力,更早完成角膜重塑,因此在治疗角膜内皮失代偿疾病时,优先选择薄移植物来提高恢复时间。

前节OCT对不撕除后弹力层角膜内皮移植术治疗复杂角膜内皮病变形态学观察

目的应用前节OCT（AS—OCT）研究不撕除后弹力层的角膜内皮移植术（nDSEK）术后角膜厚度，角膜结构功能的改变。方法回顾性临床研究。收集2007年9月至2011年9月在厦门大学附属厦门眼科中心行nDSEK的20例的角膜内皮病变患者（男9例，女11例），平均年龄（57＋20）岁。采用裂隙灯显微镜、前节OCT分别在术前，术后第7天及术后第1、3、6、12、24、36个月，对角膜形态进行连续对比观察？观察的指标包括：角膜中央厚度（包括植床和角膜内皮植片），板层积液以及植片移位等情况。结果平均随访（30±9）个月，所有患者角膜内皮植片与受体内皮面贴附良好。前节OCT显示20例患者术前角膜中央厚度平均值为：（679±124）μm，术后1周角膜中央平均厚度达（1012±124）μm，角膜植片平均厚度为（208±42）μm，在术后1周到术后3个月角膜厚度明显下降。角膜厚度的改变与内皮细胞功能的恢复有关。在nDSEK术后1周至1个月角膜厚度明显降低，变化速率为6．3μm／d．术后1～3个月（30天）降低至1．6μm／d，3—12个月为5．4μm／fl。内皮植片在术后1个月厚度降低明湿，1．5μm／天，1个月后植片厚度保持稳定。结论nDSEK术后角膜内皮功能恢复快，角膜厚度在术后1个月明显降低，3个月后趋于稳定。前节OCT可有效评估nDSEK术后植片内皮细胞功能恢复情况及植床和植片位置关系。

角膜内皮细胞改良培养技术的初步探讨

目的评价角膜后弹力层撕除联合酶消化法分离角膜内皮细胞的效率，分析细胞体外生长的生物学特性。方法将兔角膜带有内皮细胞的后弹力层完整撕下，用胰蛋白酶-EDTA联合酶消化，纯化的角膜内皮细胞进行体外培养。观察细胞形态，用神经元烯醇化酶抗体进行细胞表型鉴定。苏木精-伊红染色以及茜素红-台盼蓝联合染色分析细胞活性，流式细胞仪检测细胞体外生长过程中Anne xiv—PE的表达情况，透射电镜和扫描电镜进行细胞超微结构形态的观察。结果带角膜内皮细胞的后弹力层撕除联合酶消化法可快速获得大量纯化的角膜内皮细胞，快速贴壁生长并增生，体外培养3～4d即融合成单层细胞，且表达神经元烯醇化酶抗体阳性，苏木精-伊红染色及活性染色提示细胞功能良好，Anne xiv—PE抗体表达水平微弱。结论角膜后弹力层撕除联合酶消化法可提高角膜内皮细胞的获取和培养效率，为工程化角膜内皮移植膜的构建提供稳定的种子细胞来源。

飞秒激光辅助角膜内皮移植术治疗大泡性角膜病变的疗效观察

目的:评估飞秒激光辅助的后弹力层撕除角膜内皮移植术治疗大泡性角膜病变的临床疗效及安全性。方法:回顾性分析2013-03/2014-02在我科住院治疗的大泡性角膜病变患者15例16眼,其中男7例7眼,女8例9眼,平均年龄66.3±18.4岁,采用飞秒激光制作薄层角膜内皮植片,进行后弹力层撕除角膜内皮移植术。术后随访12mo,观察角膜刺激症状消退、植片恢复和并发症等情况,观测指标包括最佳矫正视力、眼压、前节光学相干断层扫描及角膜内皮细胞计数。结果:所有患者手术顺利,无术中并发症发生;术后眼压正常,最佳矫正视力较术前不同程度提高。角膜刺激症状自术后1d开始逐渐减轻,术后3wk完全缓解。术后1眼(6%)发生内皮植片脱位,3眼(19%)植片与植床之间存在局灶性层间积液。术后1mo角膜上皮变光滑,基质水肿消退,中央角膜厚度(638±86.51μm)较术前(811±137.55μm)明显变薄。随访期间,发生植片急性排斥反应和植片内皮功能失代偿各1眼(6%)。末次随访,角膜内皮细胞计数为1687±507个/mm2。结论:应用飞秒激光辅助后弹力层撕除角膜内皮移植术治疗角膜内皮病变,可以个体化、精确、高效地制作内皮植片,手术安全性高,术后恢复快。

白内障术后角膜病变治疗的新进展

白内障患者晶状体超声乳化术后的角膜水肿、干眼、角膜内皮功能失代偿致大泡性角膜病变等严重影响着患者满意度和视觉质量。长期以来,穿透性角膜移植是角膜内皮功能失代偿患者视力恢复的有效方法,但角膜供体缺乏及移植后角膜内皮细胞密度降低等问题仍然无法解决。近年来,角膜内皮移植、局部角膜后弹力层撕除、人工培养角膜内皮细胞植片的移植、Rho激酶抑制剂调节角膜内皮细胞增殖等方面的进展和新手段,为白内障术后角膜内皮功能失代偿患者的治疗带来新思路。

角膜内皮细胞体外原代培养及生物学鉴定

背景角膜盲是中国主要的致盲眼病之一。随着组织工程技术的进步和发展，组织工程移植膜的构建将为角膜病的治疗开辟新的途径，而选择和培养理想的种子细胞是工程化角膜的基础。目的采用胰蛋白酶消化法体外分离培养角膜内皮细胞（CECs）并进行常规培养，观察并鉴定细胞体外生长的生物学特性，为实验研究和工程化角膜的构建提供种子细胞。方法3月龄新西兰白兔12只，摘除新鲜眼球，光学显微镜下将兔角膜带有内皮细胞的后弹力层面完整分离，胰蛋白酶消化、纯化后得到CECs，进行体外培养。倒置显微镜下观察细胞的形态变化；锥虫蓝染色法计算培养细胞的存活率并绘制细胞生长曲线；采用CM—Dil染色法进行细胞标记传代；采用苏木精一伊红染色法观察培养细胞的形态，并用免疫组织化学染色法观察神经元烯醇化酶（NSE）抗体的表达，对细胞进行细胞表型鉴定；扫描电子显微镜下观察培养细胞的表面结构；采用免疫荧光染色法观察细胞质紧密连接蛋白1（ZO-1）的表达。结果揭取带有内皮细胞的后弹力层联合酶消化法可快速获得大量纯化的CECs，且快速贴壁生长并增生，体外培养5～7d即融合形成单层，呈铺路石样排列，培养细胞的存活率为95％；CM—Dil染色显示培养的CECs呈现红色环状的荧光颗粒，标记率达90％以上，连续传代后仍显示红色荧光。苏木精一伊红染色显示培养细胞呈多角形，核圆，细胞质中NSE呈棕黄色染色。扫描电子显微镜下可见细胞表面有丰富的微绒毛，细胞间足突相互连接，细胞体积大而扁平；荧光显微镜下可见细胞间ZO-1呈绿色荧光。结论通过完整分离角膜后弹力层联合胰蛋白酶消化法可体外培养、纯化和传代兔CECs，传2～3代的细胞具有CECs的生物学特性，有望为组织工程化角膜内皮移植膜的构建提供优质的种子细胞来源。

塑料胶片辅助DSAEK术的临床疗效观察

目的对后弹力层撕除自动板层内皮移植术(DSAEK)的内皮植片植入方式进行改良并观察其临床效果。方法回顾性分析2015年4月至2017年3月改良DSAEK 8例(8只眼)患者的资料。术中采用塑料胶片辅助植入内皮植片,术后随访至少持续3月。术后观察视力、眼压、内皮植片位置、角膜厚度、内皮细胞密度和形态等。结果术后6例角膜内皮植片与植床贴附良好,OCT显示无层间积液积气;眼压正常6例,高眼压2例,均经侧穿切口放气后眼压恢复正常;植片脱位2例,经前房重新注气固定后复位。术后视力0.03~0.6,1例ICE综合征术后12个月因虹膜炎和青光眼致内皮功能失代偿而取出内皮植片改行PKP。术后3个月植片内皮细胞密度减少24%(679.07/2829.43)。结论塑料胶片辅助植入内皮植片有利于简化DSAEK操作步骤、保证手术效果、降低医疗成本,值得推广。

简化DSEK技术在复杂性大泡性角膜病变中的应用

目的观察简化的后弹力层撕除角膜内皮移植术(Descemet’s stripping endothelial keratoplasty,DSEK)治疗复杂性大泡性角膜病变的疗效。设计回顾性病例系列。研究对象2015年12月至2017年8月北部战区总医院接受手术治疗的11例(11眼)复杂性大泡性角膜病变患者。方法所有患者接受了DSEK,术中所有供体植片采用手工剖切制作,平均直径(8.05±0.57)mm,植片均采用滑板法植入。主要指标术后早期植片贴附情况及并发症;随访1年时最佳矫正视力(BCVA)、角膜散光、植片透明度和厚度、内皮细胞密度和手术并发症。结果11眼中8眼术后植片与植床贴附良好;3眼术后植片半脱位,经再次前房注气后植片贴附良好。1眼术后4个月继发开角型青光眼。术后1年BCVA 7例患者≥0.3;平均角膜散光度数为(1.83±0.46)D;11眼植片均透明,平均植片厚度(126±19)μm;平均内皮细胞密度(954±218)个/mm2;11眼均无排斥反应发生。结论复杂性大泡性角膜病变行简化DSEK可获得满意的疗效。

颞侧透明角膜隧道切口行白内障摘除及人工晶体植入术

目的探讨经颞侧透明角膜隧道切口行现代白内障囊外摘除及人工晶体植入术的效果及其优、缺点。方法用角膜隧道专用刀在颞侧角膜周边血管弓中央的透明角膜上,做一宽3.2mm,长1.75～2mm的隧道切口,对180例(180只眼)白内障施行现代白内障囊外摘除及人工晶体植入术,术中观察手术时间,术后观察视力、角膜散光及角膜内皮的变化。结果手术时间平均11分钟;术后第1天、1周、1月和3月,51.2%、79.6%、95.3%和97.8%的术眼矫正视力达到或超过0.8,早期切口基本闭合好,视轴中央角膜散光无明显变化,角膜内皮细胞丢失率为5.42%。并发症主要有角膜后弹力层撕脱(1.66%)、囊样黄斑水肿(0.55%)、切口自闭欠佳(1.11%)。结论经颞侧透明角膜隧道切口行现代白内障囊外摘除及人工晶体植入术,具有操作方便、手术时间短、手术疗效好及稳定、术后角膜影响小等优点。