向日葵锈菌侵染过程的超微结构研究

采用电子显微镜技术对向日葵锈菌的侵入和扩展过程进行了研究,结果表明,向日葵锈菌夏孢子萌发产生1个芽管,遇到合适结构的气孔后,在气孔上方形成附着胞从气孔侵入,胞间菌丝与叶肉细胞壁接触后分化出吸器母细胞,吸器母细胞进入叶肉细胞内部形成吸器。胞间菌丝在吸器母细胞处分化出次生菌丝,在叶肉细胞间扩展,病菌菌丝多在寄主细胞间隙或沿寄主细胞壁延伸。在病原菌侵染早期,寄主细胞的超微结构变化并不明显;侵染中、后期,被侵染叶肉细胞发生质壁分离,叶绿体膨胀变形,细胞器解体,细胞崩解。

向日葵白锈病菌的Padlock探针及检测方法研究

本研究设计了向日葵白锈病菌(Albugo tragopogi(Persoon)Schr?ter var.helianthi Novotelnova)的Padlock探针,并对探针的灵敏度和特异性进行了验证。结果表明:该探针特异性强,只能从目标病原菌扩增出102 bp的片段,而在非目标病原菌中不能扩增出该片段,探针的灵敏度可达10 pg/μL。将设计的探针与基因芯片技术相结合,对田间向日葵种子进行检测,实现了对向日葵白锈病菌的高通量检测,本研究建立的检测技术可为口岸和田间开展向日葵其他重要病原菌检测提供参考。

两种向日葵检疫性真菌病害的多重DPO-PCR检测方法

本研究根据向日葵白锈病菌大亚基核糖体RNA基因序列,向日葵黑茎病菌的ITS-5.8S r RNA基因序列,分别设计特异性DPO(dual priming oligonucleotide)引物,建立同时检测这两种检疫性病菌的多重DPO-PCR检测方法,并对其特异性和灵敏度进行评价。结果表明,所设计的DPO引物特异性强,仅向日葵白锈病菌和向日葵黑茎病菌可分别扩增出307 bp与388 bp的特异性条带,其他参照菌株及阴性对照均无条带;检测体系对混合模板中向日葵白锈病菌和向日葵黑茎病菌的DNA灵敏度均达0.05 ng/μL;且该检测方法对退火温度不敏感,适用范围广。该方法能够准确、快速的检测向日葵白锈病菌和向日葵黑茎病菌,适合于口岸实验室的快速检测。