sox19b在斑马鱼胚胎眼睛发育中的作用

目的通过抑制sox19b基因的表达,探讨sox19b基因在斑马鱼胚胎眼睛发育和形成中的作用。方法通过显微注射sox19b吗啉寡聚核苷酸(MO)抑制sox19b基因的表达,观察胚胎发育过程中表型的变化;采用石蜡包埋组织切片及HE染色、RT-PCR和整封原位杂交等方法探讨敲除sox19b后对斑马鱼胚胎眼睛发育的调控机制。结果敲除sox19b基因后,斑马鱼胚胎眼睛发育受到影响,表现为眼睛变小或缺失,视网膜及晶状体结构发育异常(n=57/93);眼睛发育过程中重要调控基因rx3、pax2a及vsx2等表达明显降低,进而影响眼睛的发育和形成。结论 sox19b基因作为转录调控因子,可以通过调节眼区转录因子的表达进而影响斑马鱼胚胎早期眼睛的发育和形成。

一种在体基因干扰技术研究神经嵴细胞向平滑肌细胞的分化

目的建立一种在体基因干扰技术研究神经嵴细胞向平滑肌细胞分化。方法使用鸡胚在体电转染的方法导入绿色荧光蛋白示踪或核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleprotein A2/B1,hnRNPA2/B1)特异性吗啉基反义寡聚核苷酸(morpholino)干扰其基因表达。通过分析鸡胚的成活率及转染率确定在体转染的设备参数,之后将胚胎固定、包埋、冰冻切片并进行免疫组织化学染色,在荧光显微镜下观察神经嵴细胞的标记、迁徙及向平滑肌细胞的分化。结果转染电压为7.5V时胚胎成活率和转染率均较高,因此在本实验中作为标准电压。电转后6小时,右侧神经嵴细胞成功表达绿色荧光蛋白。第2天,神经嵴细胞开始向腮弓迁徙并达到第2、3鳃弓。hnRNPA2/B1特异性morpholino可以抑制hnRNPA2/B1的表达从而影响神经嵴细胞的迁徙和分化,导致鳃弓动脉平滑肌层形成障碍,最终破裂。结论鸡胚在体基因干扰技术被成功建立并可用来研究神经嵴细胞向平滑肌细胞分化。

先天性心脏病发生机制的体内实验研究方法

对于先天性心脏病的研究需依赖于体内实验，而体内实验的成功必须借助于准确、有效的实验方法。近年来，随着新理论的发现，不断有新的实验方法应用于体内实验。该文就近年常用的及新出现的应用于研究先天性心脏病发生机制的体内实验方法作一综述。