CaMKII在吗啡成瘾中的研究进展

吗啡成瘾是一种慢性、复发性疾病,给个人和社会带来重大的健康、经济和社会问题。阻碍吗啡成瘾后戒断的主要因素是与成瘾药物相关的记忆持续存在。钙/钙调依赖性蛋白激酶II (CaMKII)是突触后致密物中巩固成瘾记忆的主要组成部分。现已证实CaMKII在导致吗啡成瘾的记忆中发挥着重要作用,其参与CaMKII调控吗啡成瘾的分子主要包括NMDAR、NO、Ng、TRPV1。其具体作用机制还不明确,仍需深入探究。

CCK-8对吗啡成瘾大鼠戒断症状及尾核内c-jun蛋白表达的影响

目的从行为学、形态学角度,初步研究了八肽胆囊收缩素(CCK-8)对吗啡成瘾大鼠戒断症状及尾核(Cd)内原癌基因c-jun蛋白表达的影响。方法采用动物行为学评估和免疫组化的方法,观察吗啡成瘾大鼠Cd内注入CCK-8(10mg.L-1,1μl)对c-jun蛋白表达和戒断症状的影响。结果①吗啡成瘾组大鼠戒断症状与生理盐水对照组大鼠行为学相比有差异;②吗啡成瘾大鼠在戒断24h时,Cd内注入CCK-8可使戒断症状降低,在戒断40h时戒断症状总分最明显;③单纯吗啡成瘾组大鼠Cd内c-jun蛋白表达与生理盐水对照组大鼠相比下降,而注入CCK-8后c-jun蛋白的表达上升。结论①成功建立吗啡成瘾大鼠模型;②Cd内注入CCK-8可使吗啡成瘾大鼠的戒断症状明显减少;③Cd内注射CCK-8可提高c-jun蛋白的表达。提示CCK-8能调控吗啡成瘾大鼠戒断症状的产生及Cd内c-jun蛋白的表达。

急性吗啡成瘾大鼠模型的建立

目的 研究建立急性吗啡成瘾大鼠模型及对血液离子成份的影响。方法 将 6 0只大鼠随机分成吗啡成瘾组和对照组 ,比较成瘾组和对照组大鼠的戒断症状和血液分析。结果 成瘾组纳络酮诱发戒断症状结果是(34.82± 0 .5 3)次 ,对照组的结果是 (1.0 1± 0 .6 4)次 ,统计学处理显示组间差异很显著 (P <0 .0 1)。在血液离子成份上 ,统计学处理显示组间差异不显著 (P >0 .0 5 )。

救迷断瘾丸对吗啡依赖动物的治疗作用

救迷断瘾丸系纯中药组成的复方制剂，不含阿片类药物。实验表明，该药能明显抑制吗啡依赖小鼠的跳跃反应，能明显减轻和抑制大鼠自然戒断和催促后的戒断症状。提示救迷断瘾丸对吗啡成瘾患者有一定的治疗作用。

吗啡成瘾大鼠四个脑区μ阿片受体的变化

目的 :观察吗啡成瘾大鼠下丘脑、额叶皮质、海马和纹状体内μ阿片受体数量和基因表达的变化。方法 :剂量递增腹腔注射吗啡建立大鼠成瘾模型 ,断头处死大鼠后分离四个脑区 ,以 3H - DAGO为标记配体进行放射配体测定 ;以β- actin为内参照进行 RT- PCR。结果 :腹腔注射吗啡 9d后成功建立成瘾大鼠模型。在放射配体实验中 ,对照组下丘脑、额叶皮质、海马、纹状体的μ受体数量 (fm ol/ mg)分别为 12 6 .5± 2 7.9、12 2 .6± 2 1.2、135 .3± 12 .6、178.7± 2 6 .7;在成瘾组分别为 76 .9± 2 7.3、95 .9± 2 0 .1、6 7.8± 15 .6、138.9± 19.8,较对照组显著下降 (P<0 .0 5 )。 RT- PCR结果显示 ,对照组下丘脑、额叶皮质、海马、纹状体内μ受体 m RNA表达量分别为 9.3± 1.2、3.2± 0 .8、3.7± 0 .3、5 .0± 1.7;成瘾组分别为 1.0± 0 .7、2 .5± 1.1、1.3± 0 .5、1.7± 0 .8,除额叶皮质外均较对照组显著降低 (P<0 .0 5 )。结论 :大鼠在吗啡成瘾过程中脑内出现 μ受体基因表达的下降和 μ受体的下调。推测 μ受体的下调可能是引起吗啡成瘾的原因之一 。

吗啡成瘾对大鼠及小鼠学习与记忆能力影响的实验研究

目的 研究吗啡成瘾对大鼠及小鼠学习与记忆能力的影响。方法 将 2 4只 SD大鼠及 5 0只昆明小鼠分别随机分成 3组 :即吗啡成瘾组、吗啡成瘾后戒断组和对照组。然后分组对动物进行 Morris水迷宫训练。结果 (1)在 Morris水迷宫掩蔽平台次训练中 ,吗啡成瘾组动物 (大鼠和小鼠 )的逃避潜伏期与对照组及吗啡戒断组动物相比 ,均明显延长 (P <0 .0 1) ;(2 )对照组动物的逃避潜伏期最短 ;(3)在 Morris水迷宫可见平台学习中 ,无论是大鼠还是小鼠 ,三组动物逃避潜伏期均随着学习训练逐渐缩短 ,无明显组间差别 (P >0 .0 5 )。

用激光扫描共聚焦显微镜观察吗啡成瘾对大鼠海马神经细胞内钙离子的影响

目的 为了取得吗啡成瘾对神经细胞内钙离子 ([Ca2 + ]i)影响的直接证据 ,探索吗啡成瘾的神经生物学机制及对吗啡成瘾可能的治疗途径。方法 根据新型荧光探针Fluo 3能与活细胞内 [Ca2 + ]i特异性结合后发出荧光的特性 ,将 1 9只新生SD大鼠随机分成吗啡成瘾组和对照组 ,给吗啡成瘾组动物腹腔注射吗啡使其成瘾 ,用Fluo 3荧光探针对两组动物的海马神经细胞分别进行染色 ,利用激光共聚焦显微镜 (laserscanningconfocalmicroscope ,LSCM)技术对两组大鼠的海马神经细胞 (主要是锥体细胞 )内 [Ca2 + ]i的变化进行了观察研究 ,并用图像分析技术进行处理。结果 吗啡成瘾大鼠海马锥体神经细胞内Ca2 + 浓度的平均荧光像素是对照组的 3 7倍。结论 吗啡成瘾可能明显增高大鼠海马锥体神经细胞内Ca2 + 浓度。

大鼠吗啡成瘾脑电图系统初步观察

以吗啡成瘾不同阶段行为特性为指导系统观察脑电图变化并作数字化分析。结果表明 。

吗啡成瘾小鼠血清及肝脏SOD和MDA含量的变化

目的:观察吗啡成瘾时小鼠血清及肝脏超氧化物歧化酶(SOD)和肝脏丙二醛(MDA)含量的变化。方法:将小鼠分为4组,分别为对照组、吗啡成瘾组、纳络酮诱发戒断组和自然戒断组,每组12只。对照组注射生理盐水,另外3组按100mg/(kg·d)注射盐酸吗啡,均注射11d,在末次注射后对对照组、吗啡成瘾组、纳络酮诱发戒断组小鼠处死收集血清,自然戒断组在末次吗啡注射24h后处死并收集血清。各组小鼠处死后立即取肝脏,称重,加入生理盐水匀浆后取上清液进行测定。采用羟胺比色法对SOD活性进行测定,采用硫代巴比妥酸比色法进行MDA测定。结果:吗啡成瘾组,纳络酮诱发戒断组及自然戒断24h组小鼠血清及肝脏SOD水平低于对照组水平(P<0.05),肝脏MDA高于对照组水平(P<0.05)。结论:吗啡成瘾和戒断时血清及肝脏SOD水平降低,MDA水平升高。

解痉镇痛和清热泻火中药对吗啡成瘾大鼠脱毒效应的观察

用吗啡成瘾大鼠模型比较解痉镇痛和清热泻火中药脱毒的效应 ,实验证实 :两种治则组方的药物均有一定的脱毒作用 ,其中以解痉镇痛药为主组成的中药脱毒效果较显著。

大鼠配对前吗啡成瘾和戒断对子代社会交往与下丘脑催产素表达的影响

为探讨大鼠配对前经历吗啡成瘾和戒断事件对成年子代鼠社会交往以及下丘脑室旁核催产素表达的影响,本研究按经典方法建立大鼠吗啡成瘾模型,戒断21d后雌雄配对分组。第1组:吗啡成瘾雄鼠和吗啡成瘾雌鼠;第2组:吗啡成瘾雄鼠和生理盐水雌鼠;第3组:生理盐水雄鼠和吗啡成瘾雌鼠;第4组(对照组):生理盐水雄鼠和生理盐水雌鼠。所生子代鼠8周时采用社会交往实验装置测试各组子代鼠的社会交往能力,免疫组化方法检测室旁核催产素的表达。结果显示,社会交往能力实验:交往的第一个10min内,第1、2、3组子代雄、雌鼠与无生命物体交往时间比第4组子代鼠均减少;第1、2、3组子代雄鼠与陌生鼠1交往时间比第4组子代雄鼠减少,子代雌鼠相比差异无显著性;在第二个10min内,第1、2、3组子代雄、雌鼠与陌生鼠2交往时间比第4组子代鼠均减少;同样第1、2、3组子代雄、雌鼠与陌生鼠1(已熟悉)交往时间比第4组子代鼠均减少。免疫组织化学结果:第1、2、3组子代雄、雌鼠室旁核催产素能神经元数目比第4组子代鼠均明显减少。以上结果提示,配对前亲代经历吗啡成瘾和戒断事件导致成年子代鼠社会交往能力下降,并且影响子代下丘脑室旁核催产素的表达。

针刺、中药、针药结合对吗啡成瘾大鼠脱毒效应的对比观察

方法：利用吗啡成瘾大鼠模型，比 较针刺、中药、针药结合脱毒的效应。结果：3种疗法均有一定的脱毒 作用，与自然戒断组比较差异有显著意义，3组间比较差异无显著性意义，针刺与解痉镇痛 中药结合后没有产生明显的增效作用，并且三种疗法本身无明显成瘾性。

吗啡急性成瘾猫模型的建立

目的:探讨及研究建立急性吗啡成瘾猫模型的方法。方法:将12只猫随机分成实验组和对照组,实验组9只,对照组3只。实验组按逐日递增原则,分别于每日8点、12点、16点行背部皮下注射盐酸吗啡。第一天吗啡单次用量5mg·kg-1,之后分别为10mg·kg-1、15mg·kg-1、20mg·kg-1、25mg·kg-1。连续5天给药。第6天实验组以0.5mg·kg-1纳洛酮诱发戒断症状。比较实验组和对照组猫的戒断症状。结果:实验组纳络酮诱发戒断症状与对照组的比较,经统计学处理显示组间差异很显著。结论:急性吗啡成瘾猫模型的建立是切实可行的。

吗啡成瘾性大鼠脑内核团神经细胞[Ca^(2+)]i变化的研究

目的研究吗啡成瘾对大鼠脑内与成瘾相关核团神经细胞[Ca2+]i的影响。方法将50只SD大鼠随机分成吗啡成瘾组和对照组,观察成瘾后的戒断症状;应用对Ca2+敏感的探针Fluo-3与Ca2+络合后被激光激发发出荧光的特性,利用激光共聚焦显微镜观察伏核、海马、内侧额前皮质神经细胞[Ca2+]i变化,并用图像分析软件进行处理。结果吗啡成瘾大鼠脑内伏核、海马及内侧额前皮质神经细胞[Ca2+]i和对照组比较明显增高(P<0.01)。结论长期使用吗啡可明显增高伏核、海马和内侧额前皮质神经细胞[Ca2+]i。

酚妥拉明阻断去甲肾上腺素对吗啡成瘾大鼠束旁核痛反应神经元电活动的影响

目的研究酚妥拉明阻断去甲肾上腺素对吗啡成瘾大鼠束旁核痛反应神经元电活动的影响。方法以串刺激右侧坐骨神经为伤害性刺激,用玻璃微电极细胞外记录大鼠束旁核痛反应神经元电活动。结果脑室去甲肾上腺素抑制束旁核痛兴奋神经元放电,促进痛抑制神经元放电,此作用可被酚妥拉明阻断。结论酚妥拉明阻断去甲肾上腺素对吗啡成瘾大鼠束旁核痛反应神经元电活动的抑制作用,提示去甲肾上腺素的镇痛作用与α肾上腺素能受体关系密切。

吗啡成瘾大鼠边缘下区脑电活动的无线遥测及分析

目的：遥测并分析吗啡成瘾大鼠条件性位置偏爱（conditionedplacepreference，cPP）模型制备前后边缘下区（infralimbiccortex，IL）脑电活动的实时变化。方法：选用雄性sD大鼠随机分2组（吗啡戒断组和盐水对照组，每组各12只），进行脑立体定位埋植电极手术，采用吗啡注射结合CPP训练制备吗啡成瘾大鼠CPP模型，对照组注射生理盐水。利用CPP视频系统和脑电无线遥测系统，检测造模前后大鼠CPP行为的变化及IL区脑电活动的改变。结果：分别与造模前和对照组白箱内停留时间比较，戒断组大鼠戒断1～3d在白箱内停留时间延长（均P〈0．01）。与对照组比较，戒断组大鼠戒断3d在白箱停留时，IL区脑电8波明显减少，B波（B：）明显增加（P〈0．05或P〈0．01），Or．波及0波变化无显著差异（P〉0．05）；戒断组大鼠由黑箱向白箱穿梭时，IL区脑电表现为8波显著增加（P〈0．01），仪波（α1、α2及β波（β1、β2）显著减少（均P〈0．01），0波无明显变化（P〉0．05）；戒断组大鼠在黑箱停留或由白箱向黑箱穿梭时，IL区脑电各波与对照组比较无显著差异（P〉0．05）。结论：吗啡成瘾大鼠穿梭觅药与停留在药物相关环境中引发的IL区脑电活动的改变机制可能不同；IL区神经元功能可能存在双重性。

激光血管内照射对吗啡成瘾动物红细胞变形能力影响的实验研究

实验证明 :低强度He -Ne激光对吗啡成瘾戒断症状有很好的抑制作用〔1〕,吸毒成瘾戒断症状除焦虑、失眼、厌食、关节及肌肉疼痛、性欲亢进和体重减轻、强烈的觅药行为等体征外 ,还包括一系列生理生化指标的异常改变。本实验着重观察激光血管内照射在吗啡成瘾戒断前后红细胞变形能力的变化情况。本实验采用成年大白兔 ,建立吗啡成瘾大白兔模型后采血并用He-Ne激光对其进行血管内照射 ,用阿片受体阻断剂纳洛酮 (Naloxone)诱发动物戒断症状后采血 ,分别测定两组血样的红细胞变形能力进行对照 ,结果发现该法能非常明显增强红细胞变形能力 。

电针对吗啡成瘾大鼠戒断-复吸行为影响的初步观察

目的 观察针刺对实验动物戒断及复吸期间操作行为的影响。方法 建立大鼠吗啡自身给药模型 ,随机分模型对照组、绑缚对照组、针刺治疗组。熄灭期 (3d)做相应处理 ,d4吗啡引燃 (2 m g/kg体重 ) ,观察动物熄灭踏板数 (L PE)、复吸踏板数(L PR)。结果 模型对照组观察到典型熄灭 -复吸曲线 (ERC) ;绑缚对照组该曲线发生变异 ,主要是缩短了熄灭的过程 ;针刺治疗组彻底改变了熄灭 -复吸曲线的形状 ,使熄灭反跳现象消失 ,但复吸值变大。以吗啡平台期平均踏板数 (AL PP)为基准值 ,各组间熄灭平均踏板数 (AL PE)和复吸踏板数 (L PR)无明显差异。结论 相对于自然戒断 ,针刺及绑缚在熄灭期间均具有较明显的抑制渴求效果 ,且针刺比绑缚作用更快 ,效果更明显 ;短期 (3d)的针刺治疗未达到抗短期复吸 (d 4 )效果。更多结果有待后续观察和进一步验证。

神经肽Urocortin2对吗啡成瘾大鼠VTA神经元放电及DA能神经传递的影响

目的明确神经肽urocortin2(UCN2)在吗啡成瘾中抑制丘脑腹侧背盖区(ventral tegmental area,VTA)神经活动的机制。方法建立吗啡成瘾大鼠模型,采用七管微电泳方法,电泳UCN2对吗啡成瘾大鼠VTA神经元自发放电的改变,及UCN2对多巴胺(dopamine,DA)能神经元簇发放电模式的影响,明确UCN2在VTA神经元中与DA存在汇聚作用。另外,给予促皮质激素释放因子(coticortropin-releasing factor,CRF)受体阻断剂及蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂,明确UCN抑制吗啡成瘾中发挥关键作用。结果UCN2使82%(31/38)吗啡成瘾大鼠VTA神经元放电频率减慢,平均放电频率由微电泳前的(20.89±2.86)Hz减少到(13.66±3.93)Hz,给药前后放电频率降低具有显著性(P<0.01),UCN2抑制作用可被PKA抑制剂H89及CRF-2R阻断剂AST-2B取消。另外,微电泳UCN2可抑制吗啡成瘾大鼠VTA中DA神经元的爆发放电,AST-2B可增强DA的兴奋效应。结论 UCN2与CRF-2R结合后,通过PKA信号途径,抑制VTA内DA神经元异常放电,在吗啡类药物成瘾中发挥抑制作用,为其用于临床治疗阿片类药物成瘾提供理论依据。

电刺激伏核对吗啡成瘾心理依赖大鼠行为学的影响

目的通过建立脑深部刺激（deep brain stimulation，DBS）SD大鼠双侧伏核的动物模型，探讨DBS伏核对吗啡心理依赖大鼠行为学的影响。方法40只大鼠同期依大鼠立体定向图谱行双侧伏核刺激电极的植入术，20只为吗啡假刺激组，20只为DBS组。术前（用药后第15天）、术后（刺激后第2～6天）对戒断症状进行评分，术前（用药后第15天）和术后（刺激后第2、4、6天）行条件性位置偏爱实验，研究大鼠的行为学变化。结果40只大鼠成功地同期双侧伏核植入DBS刺激电极，条件位置偏爱实验结果为吗啡成瘾大鼠在伴药箱平均停留时间长于非伴药箱，与生理盐水组比较具有统计学意义（P〈0．01）；DBS组与术前及吗啡假刺激组相比在伴药箱平均停留时间均明显缩短，具统计学意义（P〈0．01），提示高频电刺激伏核能有效减轻大鼠吗啡心理依赖症状。术前戒断症状评分结果表明吗啡成瘾大鼠模型的成功建立（P〈0．01）；术后DBS大鼠的戒断症状与术前相比具统计学意义，证实DBS减轻了大鼠的躯体依赖症状。结论高频刺激吗啡成瘾大鼠双侧伏核，能够有效地减轻大鼠吗啡心理依赖症状，为DBS伏核治疗吗啡等成瘾药物的心理依赖提供了实验依据。