多重调理吞噬试验方法的重复性和再现性研究

目的研究中国食品药品检定研究院（以下简称＂我院＂）建立的多重调理吞噬试验方法（MOPA）的重复性和再现性。方法采用MOPA方法对19份血清样本,针对13个血清型肺炎球菌的体外调理吞噬试验（OPA）滴度在我院及美国阿拉巴马大学肺炎链球菌血清学参比实验室分别进行两轮检测,对两个实验室间检测结果及本室的两轮试验结果进行比较分析。结果总体上,13个血清型的总的OPA滴度比较比较显示,两个实验室间相关系数为0.94,本室内部则可达到0.96,均呈现出良好的相关性。另一方面,各血清型的两实验室间和我院内相关系数范围分别为0.87-0.99和0.68-0.99。结论我院建立的MOPA方法具有良好的重复性和再现性,为我国开展肺炎链球菌疫苗的免疫保护效力评价工作奠定了良好的基础。

小吞噬试验的两种常用方法对照

目的对小吞噬试验的两种方法进行比较。方法分别用体内法和体外法染出的标本片进行比较。结果体外法染出的标本显微镜下观察细胞胞质及分叶核清晰可见,所吞噬的细菌多且位于胞质中,中性粒细胞多。体外法染出的标本显微镜下观察细胞结构形态不清,中性粒细胞少,背景脏。结论体内法染出的标本镜下观察结构清晰,便于学生观察和计数,操作简便,特适合用于实验室大批制片和教学。

一种简单的巨噬细胞体内吞噬试验

巨噬细胞能吞噬鸡红细胞。我们采用小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬鸡红细胞试验，来观察巨噬细胞内的鸡红细胞的形态，并计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞的百分比和吞噬指数，效果很好。据此判断巨噬细胞的吞噬功能和消化功能。提示巨噬细胞体内吞噬鸡红细胞试验，是一种观察巨噬细胞吞噬功能的简捷的方法。

体外小吞噬试验方法的改进

本试验方法用小鼠断尾血代替了人血,大大降低了本科生操作的危险性,而且断尾的小鼠不至于死亡,还可应用于其他试验,大大降低了试验成本,节省了经费开支。几年来作者将以上方法应用于医学微生物学与免疫学的试验教学中,取得了满意的教学效果,且方法简单易行,学生乐意参与和动手操作。

一种简单的巨噬细胞体外吞噬试验

介绍一种检测巨噬细胞吞噬功能的新方法--染色酵母菌体外吞噬试验,该方法操作简单,快速准确,效果良好.

空气呼吸器火焰吞噬试验装置研制

为了提高空气呼吸器在火焰环境中的安全性和适应性,满足开展火焰吞噬试验的需要,研制了拥有自主知识产权的试验装置,讨论了该试验装置的系统组成、总体设计、技术要求、各子系统的设计,完善了我国空气呼吸器试验验证手段,将有效提高我国空气呼吸器的总体技术性能。

多型调理吞噬试验方法的长期稳定性

目的通过对2010—2016年间09CS针对13个型别的肺炎链球菌荚膜多糖特异性抗体滴度的分析,探讨调理吞噬杀菌试验(multiplexed opsonophagocytic killing assays,MOPA)的长期稳定性。方法统计2010—2016年检测人肺炎链球菌质量控制血清(质控血清)09CS中针对1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F共13个血清型的OPKA滴度,分别计算2010、2011、2012、2013、2014—2016年09CS针对各个型别的OPKA滴度的GMT值及其95%可置信区间;统计09CS针对13个血清型的OPKA滴度在质量控制范围之内的比率;计算2010—2016年09CS针对13个血清型各型别的OPKA滴度CV值。结果从OPKA滴度来看,2010年普遍较低,而2011年、2012年、2013年、2014—2016年这几年间的09CS针对13个血清型的滴度结果稳定。2011—2016年期间检测结果在质控血清滴度范围的比率:2010年最低值是4%,均值为30%;2011年最低值是65%,均值为80%;2012年最低值是73%,均值为85%;而2013年最低值为77%,均值为94%;2014—2016年最低值为71%,均值为90%。2010—2016年09CS针对13个血清型的OPKA滴度各型别CV:各年份的平均值分别为:125%、64%、47%、41%和39%。结论充分证明了从2011年起本实验室建立的MOPA稳定性良好。

评价肺炎链球菌多糖结合疫苗效力的调理吞噬试验条件的优化

目的优化评价肺炎链球菌多糖结合疫苗效力的调理吞噬试验(Opsonophagocytic assay,OPA)的条件。方法参考美国阿拉巴马大学的WHO指定实验室于2007年1月发布的A.02版实验规程,优化OPA的试验条件。分别以抗性和非抗性肺炎链球菌菌株作为靶细菌检测其对应型结合物受试血清的调理吞噬效价后,再与相应的ELISA效价比较,分析二者的相关性。结果 0.8%二甲基甲酰胺(DMF)诱导HL-60细胞分化4d后,细胞表面标志表达量分别为:CD11b和CD35≥55%、CD71≤15%,活细胞比例≥65%;各型肺炎链球菌工作种子批的复活率≥80%;补体的非特异性杀伤率为18%;各血清型均表现出良好的杀菌活性,且OPA法与ELISA法测定的血清抗体效价比较,相关系数和斜率非常接近。结论优化的OPA条件符合该试验要求,可用于肺炎链球菌荚膜多糖结合疫苗的效力评价。

13价肺炎球菌多型调理吞噬试验方法的建立及验证

目的建立标准化的针对肺炎链球菌荚膜多糖特异性抗体的多型调理吞噬试验(multiplexed opsonophagocytic killing assay,MOPA)方法,并进行验证。方法参照有关组织研究和发布的MOPA实验操作规范(UAB-MOPA),通过菌种鉴定、HL60细胞分化规律的确定、补体筛选、质控血清质控范围的确定,建立本实验室的MOPA实验方法,并对方法进行特异性、线性、精密性、准确性以及耐受性验证。结果工作菌种的所有指标均符合UAB-MOPA操作规范的要求;HL60细胞在分化后3~6 d均可作为工作细胞使用;27531和84321N两批补体可作为工作补体使用;建立了09CS、QC2、B、C和F 5个质控血清的质控范围。方法的特异性、线性、精密性、准确性及耐受性均符合预定指标。结论成功建立了标准化的13价肺炎球菌多型MOPA方法,并进行了验证。

不同来源HL60细胞用于调理吞噬杀菌试验的比较

目的通过比较不同来源的HL60细胞分化后细胞的表面标志、活性及其对肺炎链球菌调理吞噬杀菌指数的动态变化，评价HL60细胞的来源对肺炎链球菌调理吞噬杀菌能力的影响。方法使用流式细胞仪连续监测来源于美国ATCC和中国科学院上海细胞研究所的HL60细胞在分化后1～7d的表面标志CDllb、CD35和CD71的表达情况，并观察活细胞、凋亡细胞和死亡细胞的比例；同时使用两种不同来源的细胞检测09CS和B两份质控血清对肺炎链球菌血清型6B、7F、14和23F菌株的调理吞噬杀菌指数，同时观察09CS对13价结合疫苗血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F菌株的调理吞噬杀菌指数。结果两种不同来源HL60细胞分化3～6d细胞的表面标志、活细胞比例均可达到国际实验室的要求指标；两份质控血清对检测菌株的调理吞噬杀菌指数均能稳定于质控范围之内；两种细胞检测的09CS对13价肺炎链球菌结合疫苗血清型菌株的调理吞噬杀菌指数具可比性。结论两种来源不同的HL60细胞分化3-6d均能用于评价肺炎链球菌疫苗免疫血清的调理吞噬杀菌试验，这为调理吞噬杀菌试验及其标准化在国内的建立提供了便利。

表皮角质细胞在金颗粒吞噬玻片上迁移活动的观察

为研究人表皮角质细胞（EKC）的迁移活动，应用显微摄像方法在金颗粒吞噬玻片上观察，发现EKC的迁移运动可区分为缓慢平移、多向快速运动及飘移3种形式。非活化EKC在非调理情况下仅有极微弱的缓慢平移，而基质蛋白的调理作用可使其出现持续时间较短、相对活跃的迁移活动；活化的EKC在非调理情况下也有比较活跃的迁移活动，基质蛋白调理可使其迁移活动的3种形式表现得很活跃，运动持续时间最长。结论认为，活体创面具备活化及基质蛋白调理的条件，体外观察到EKC的3种迁移活动形式，可出现在活体创面重上皮化的修复过程中。

HL-60分化细胞表面标志、活性及其对肺炎链球菌调理吞噬杀菌能力的动态变化

目的分析HL-60分化细胞的表面标志、活性及其对肺炎球菌调理吞噬杀菌能力的动态变化。方法以流式细胞仪连续监测分化1～7 d的HL-60细胞表面标志CD11b、CD35和CD71的表达以及活细胞、凋亡细胞和死亡细胞的比例,同时用09CS、QC2、B、C和F 5份质控血清以调理吞噬杀菌试验检测肺炎链球菌血清型6B、7F、14和23F的杀菌滴度。结果分化3～6 d的HL-60细胞表面标志、活细胞比例可达到实验室要求,5份质控血清的调理吞噬杀菌滴度稳定而且在质控范围之内。结论分化3～6 d的HL-60细胞可以用于评价肺炎链球菌疫苗免疫血清的调理吞噬杀菌试验,为调理吞噬杀菌试验的建立和标准化提供了依据。

苦马豆素的抑瘤和免疫增强作用

目的研究苦马豆素(SW)的抑瘤和免疫增强作用。方法采用小鼠移植瘤模型,灌胃给药21 d,分别观察SW对小鼠S180肉瘤的抑瘤率和对EAC腹水癌小鼠的生命延长率,并测定SW对S180荷瘤小鼠的免疫机能的调节作用。结果SW 0．31和0．62 g·kg-1剂量组对小鼠S180肉瘤的抑瘤率分别为33．30％和32．48％(P<0．01);病理组织学检查显示SW 0．62 g·kg-1剂量组的肿瘤组织坏死面积明显大于荷瘤对照组(P<0．01)。SW对小鼠EAC艾氏腹水癌的生命延长率为10．17％～11．44％(P<0．05)。SW 0．155 g·kg-1剂量组的脾指数以及SW 0．155和0．31 g·kg-1剂量组的胸腺指数均明显高于荷瘤对照组(P<0．05);0．31和0．62 g·kg-1剂量组的淋巴母细胞和过渡型细胞百分率均显著增加(P<0．01);0．62 g·kg-1剂量组的吞噬指数κ明显高于荷瘤对照组(P<0．05)。结论SW对小鼠移植性S180实体瘤具有明显的抑制作用。其抗癌作用机制与苦马豆素能明显促进荷瘤小鼠机体的免疫功能有关。

藏药绿萝花水提物对小鼠免疫功能的影响

探讨藏药绿萝花对机体免疫功能的影响,为临床合理用药和进一步开发利用提供科学依据.本研究以L9(34)正交设计试验所获得的绿萝花水萃取干膏制剂为研究材料,以N2Hmice小白鼠为研究对象,以Con A诱导小鼠淋巴细胞转化试验(CCK-8法)、血凝和血凝抑制试验及巨噬细胞吞噬试验为研究方法,以(SI)刺激指数、(HI)新城疫抗体效价、吞噬百分率和吞噬指数为检测指标,探讨不同剂量绿萝对机体免疫功能的影响.实验结果显示低剂量绿萝花能够增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数,其增强作用极显著优于空白组;低、中剂量绿萝花组具有促进小鼠血清ND抗体产生的作用,作用显著优于空白组;低、中剂量绿萝花组具有促进小鼠外周血淋巴细胞增殖的作用,作用显著优于空白组.研究结果表明低(1.08g/次/d,7d)、中(2.16g/次/d,7d)剂量绿萝花对小鼠免疫功能具有增强作用.

薏苡仁油抗肿瘤作用研究

薏苡仁油5-4g/kg 对小鼠移植性S180 肉瘤抑制率两次试验均达到30 % 以上,1-8g/kg 、5-4g/kg 对小鼠移植性HAC 肝癌抑制率两次试验亦均达到30 % 以上。薏苡仁油1-8g/kg 可显著增加小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率,5-4g/kg 组对小鼠NK

评价肺炎链球菌疫苗免疫效果的功能性抗体检测方法的建立

目的建立肺炎球菌疫苗免疫效果评价的功能性抗体滴度检测方法。方法参考美国阿拉巴马大学的多重调理吞噬实验(MOPA)方法,构建并鉴定HL-60效应细胞库、肺炎球菌工作菌种库和补体;在此基础上对5份血清样本进行调理吞噬活性检测。结果 HL-60细胞分化后表面标志表达量CD35为71.78%,CD71为10.97%,活细胞比例为72.96%。13个血清型的肺炎链球菌工作菌种的冻存复活率均高于90%;抗生素抗性与敏感性与预期结果一致;工作稀释度均≥1000。补体的非特异性杀菌率均≤70%。血清样本的杀菌曲线均为标准的S型,平行孔间的差异不超过3倍。结论效应细胞、工作菌种、补体及血清样本的检测结果均符合阿拉巴马大学参考方法的标准要求,成功建立了基于MOPA的功能性抗体检测方法。

重组大肠杆菌外膜蛋白OmpT对小鼠免疫保护作用的研究

为评价大肠杆菌(E.coli)外膜蛋白酶T(OmpT)的免疫原性及对小鼠的免疫效率,本研究将原核重组表达纯化的OmpT蛋白(rOmpT)免疫小鼠,并以灭活的E.coli 308-2全菌疫苗株作为对照组,通过检测其抗体效价、体外调理吞噬作用和细胞因子表达水平以及攻毒试验进行保护效率评价。结果表明rOmpT免疫组在二免后14 d其抗体水平可以达到峰值(1∶64 000),并且其抗血清具有显著促进巨噬细胞对E.coli的吞噬作用;同时,重组蛋白与全菌免疫组均能够显著提高小鼠体内IL-4和IFN-γ的表达。而且重组蛋白免疫组对4个进化种系(Phylogenetic group)的E.coli攻毒的免疫保护率均为60%左右,比全菌免疫组高约10%。研究结果显示rOmpT比全菌灭活E.coli能够诱导小鼠产生更有效免疫保护作用,表明rOmpT可以作为E.coli亚单位疫苗候选蛋白。

复合真菌多糖抗肿瘤作用研究

对复合真菌多糖作为保健食品的抑癌作用进行评价，并初步研究其作用机制。［方法］选用小鼠Ｓ_(１８０)肉瘤及Ｌｅｗｉｓ肺癌移植性肿瘤模型，以《保健食品功能学评价程序和检验方法》为实验依据。［结果］复合真菌多糖０．３３ ｇ／ｋｇ、１．００ ｇ／ｋｇ剂量组对小鼠移植性Ｓ_(１８０)肉瘤及Ｌｅｗｉｓ肺癌抑制率两次均达到３０％以上．复合真菌多糖０． ３３ ｇ／ｋｇ组可显著增加小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率，１． ００ ｇ／ｋｇ组对小鼠 ＮＫ细胞活性也有明显增强作用人［结论］复合真菌多糖对小鼠 Ｓ_(１８０)肉瘤及 Ｌｅｗｉｓ肺癌有明显的抑癌效应，其机制可能与调节机体的免疫功能，提高机体的免疫监视作用有关。