白假丝酵母菌吡咯类药物相关耐药基因的突变和表达

目的了解白假丝酵母菌吡咯类药物相关耐药基因的突变和表达情况。方法采用裂解法提取白假丝酵母菌DNA,扩增ERG11基因后测序,选取3种吡咯类药物(氟康唑、酮康唑、咪康唑)均耐药的全耐药菌株DNA片段进行TA克隆;利用荧光定量PCR技术对CDR1、CDR2、MDR1基因表达的m RNA进行相对定量,比较耐药株与敏感株表达水平的差异。结果 37株耐吡咯类白假丝酵母菌中,ERG11存在41个碱基突变位点,其中20个同义突变,21个错义突变,发现新变异:N12I、Y13F、S16F、V36F、V51L、G129E、T123I、E194K、K344N、E517G、V234A;CDR1基因2-ΔΔCt值敏感株为1.09±0.27,耐药株为1.46±0.24,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);敏感株与耐药株间CDR2和MDR1基因的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论白假丝酵母菌耐药机制较为复杂,可能与ERG11某些位点突变导致的氨基酸变异和CDR1高表达有关,CDR2和MDR1表达与耐药关系有待进一步研究。

白假丝酵母菌耐吡咯类药物的ERG11基因分析

目的 研究白假丝酵母菌耐吡咯类药物的ERG11的变异情况.方法 将93例诊断为真菌性阴道炎的患者的阴道分泌物标本进行真菌培养,筛选白假丝酵母菌菌株,利用纸片扩散法进行氟康唑、酮康唑、咪康唑药敏试验,用加热裂解法提取菌株DNA,扩增ERG11基因,扩增后的PCR产物进行双向测序,测序结果与GenBank中的标准序列（SC5314）比较分析.结果 93例均培养出假丝酵母菌,包括60株白假丝酵母菌,19株热带假丝酵母菌,9株克柔假丝酵母菌和5株光滑假丝酵母菌;白假丝酵母菌对氟康唑、酮康唑、咪康唑耐药率分别为13.33%,20.00％和51.67％;对白假丝酵母菌的ERG11基因测序发现存在25个碱基突变位点,其中13个同义突变,12个错义突变,其中有6个是新变异：V36F,V51L,T123I,E194K,Y257H和K344N.结论 耐吡咯类药物白假丝酵母菌ERG11基因有多个错义突变位点,其中某些位点突变导致的氨基酸变异可能与其耐药性产生有关.

生殖道白色念珠菌耐吡咯类药物的基因表达

目的了解生殖道白色念珠菌耐吡咯类药物基因的表达情况。方法收集真菌性阴道炎患者分泌物标本93份,分离白色念珠菌后用纸片扩散法进行药敏试验,裂解法提取白色念珠菌的吡咯类药物耐药株和敏感株的总RNA,逆转录为cDNA,采用实时荧光定量PCR技术检测白色念珠菌多药耐药基因CDRl、CDR2、MDRl的表达情况。结果共培养出59株白色念珠菌,18株热带念珠菌,10株克柔念珠菌,6株光滑念珠菌;白念珠菌中37株对氟康唑、酮康唑、咪康唑不同程度耐药,耐药率分别为16.7%、18.3%、51.7%;白念珠菌耐药株CDR1基因的2^(-△△Ct)为1.46±0.24,敏感株为1.09±0.27,两组比较,差异有统计学意义(t=-4.22,P=0.001);CDR2及MDRl基因的表达差异均无统计学意义(P=0.170,P=0.800)。结论白色念珠菌耐药机制较为复杂,可能与CDR1高表达有关,CDR2和MDR1表达与耐药性的关系有待进一步研究。

吡咯类抗真菌药物制剂微生物限度检查方法的研究

目的:研究建立吡咯类抗真菌药物制剂的微生物限度检查方法。方法:通过预试验摸索,拟以含有组氨酸、卵磷脂和聚山梨酯80的混合溶液作为稀释剂及冲洗液,采用离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用的方法进行此类药物的微生物限度检查并进行方法学验证。结果:按《中国药典》2005年版附录要求对拟定方法进行验证,结果验证菌株的回收率均大于70%,控制菌检查阳性菌也生长良好。结论:以含有组氨酸、卵磷脂和聚山梨酯80的混合溶液作为稀释剂及冲洗液,采用离心沉淀集菌法与薄膜过滤法联用进行吡咯类抗真菌药物制剂的微生物限度检查,方法是可行的。

一种质子泵抑制剂吡咯磺酰类药物的合成工艺

阐述了质子泵抑制剂吡咯磺酰类药物2-[3-[[2-(2-氟苯基)-4-[(甲氨基)甲基]-1 H-吡咯-1-基]磺酰基]苯氧基]-N,N-二甲乙酰胺(1)的合成方法。该方法以5-(2-氟苯基)-1 H-吡咯-3-甲醛(2)、3-[2-(二甲氨基)-2-羰基乙氧基]苯-1-磺酰氯(3)为原料,经缩合反应得到2-[3-[[2-(2-氟苯基)-4-甲酰基-1 H-吡咯-1-基]磺酰基]苯氧基]-N,N-二甲乙酰胺(4),化合物(4)经还原氨化得到化合物(1)。该工艺路线简短,操作简便,副反应少,反应收率高,适合工业化生产。

社区医院反复发作性假丝酵母菌感染性阴道炎药敏及耐药情况分析

目的分析反复发作性假丝酵母菌感染性阴道炎药敏及耐药情况。方法收集反复发作性阴道炎患者标本100例,用科玛嘉假丝酵母菌显色培养基作菌种鉴定,对其中60株白假丝酵母菌用纸片扩散法进行药敏试验,对药敏结果进行对比分析。结果 60株白假丝酵母菌对咪康唑、酮康唑和氟康唑敏感率分别为36.7%、56.1%和80%。结论重视假丝酵母菌的耐药检测及药敏分析和菌种培养鉴定,合理利用抗生素,减少耐药株产生。

阴道白假丝酵母菌的耐药性与MDRl基因表达关系研究

目的：探讨白假丝酵母菌中 MDR1基因表达水平与菌株对吡咯类药物敏感性下降的关系。方法于2011年8月-2012年8月收集反复发作阴道炎患者白假丝酵母菌60株，用科玛嘉念珠菌显色培养基作菌种鉴定，纸片扩散法进行药敏试验；根据药敏结果把菌株分为4组菌株：全敏感组、氟康唑中度敏感或耐药组、酮康唑中度敏感或耐药组、咪康唑中度敏感或耐药组，每组随机选取12株菌株，运用荧光定量 PCR技术检测菌株中 MDR1基因的表达量，采用t检验方法把中度敏感或耐药组与敏感组的 MDR1基因表达水平进行比较分析。结果60株白假丝酵母菌中酮康唑中度敏感或耐药株有26株、氟康唑中度敏感或耐药株有12株、咪康唑中度敏感或耐药株有38株、全敏感株有22株；酮康唑中度敏感或耐药组、氟康唑中度敏感或耐药组、咪康唑中度敏感或耐药组和敏感组中 MDR1基因相对表达量分别为3.32±4.46，2.27±3.05，0.9±0.81和0.41±0.47；酮康唑、氟康唑、咪康唑的中度敏感或耐药组与敏感组比较，t值分别为-2.177，-2.130和-2.094，差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 MDR1基因的表达量与临床白假丝酵母菌对吡咯类药物的耐药性关系有待进一步研究。

阴道白假丝酵母菌的耐药性和ERG11基因突变关系研究

目的探讨ERG11基因突变与白假丝酵母菌对吡咯类药物敏感性下降的关系。方法收集VVC患者的白假丝酵母菌60株,用科玛嘉念珠菌显色培养基作菌种鉴定,纸片扩散法进行药敏试验,选取所有中度敏感株和耐药株用聚合酶链反应扩增(PCR)ERG11基因,将PCR产物进行测序分析和比对分析。结果 60株白假丝酵母菌对咪康唑、酮康唑和氟康唑敏感率分别为36.7%、56.1%和80%;将38株中度敏感株和耐药株进行ERG11基因分析后共发现29个有义突变和25个同义突变,其中,有义突变中发现多个新突变位点。结论有些新发现的突变位点可能与耐药相关;多位点有义突变可能降低菌株对药物的敏感性。