MiR-223-3p通过靶向SORBS1增加结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶的耐药性

目的:5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)是结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的一线治疗药物,CRC细胞对5-FU的耐药是导致化学治疗(以下简称“化疗”)失败的主要原因,然而耐药机制仍不明确。本研究旨在探究参与CRC细胞对5-FU耐药的抑癌基因,并寻找对该基因存在调控作用的微RNA(microRNA,miRNA)。方法:在高通量基因表达(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中下载CRC数据集GSE28702和GSE69657,分别分析2个数据集中对FOLFOX化疗方案应答组和无应答组患者的差异表达基因并确定目标基因;采用在线生物信息学数据库TargetScan、miRwalk和miRDB预测靶向目标基因含山梨醇和SH3结构域蛋白1(sorbin and SH3 domain containing 1,SORBS1)的miRNA。采用瞬时转染技术在CRC细胞系HCT116、SW620中分别转染siSORBS1、HA-SORBS1、miR-223-3p mimic、anti-miR-223-3p及其相应的阴性对照(siNC、HA、miR-NC、anti-miR-NC),在HCT116细胞中共转染miR-NC和HA、miR-223-3p mimic和HA、miR-223-3p mimic和HA-SORBS1、anti-miR-NC和siNC、anti-miR-223-3p和siNC、anti-miR-223-3p和siSORBS1。采用实时反转录PCR(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)和/或蛋白质印迹法检测细胞中SORBS1和miR-223-3p的表达水平。转染后用不同浓度的5-FU处理细胞。采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,双荧光素酶报告分析验证miR-223-3p与SORBS1的靶向关系。结果:GSE69657数据集和GSE28702数据集应答组分别有409和528个高表达基因,共有22个高表达交集基因。在22个高表达交集基因中,与CRC化疗敏感性有关的抑癌基因有3个,选择SORBS1作为目标基因进一步探索。3个在线生物信息学数据库预测的靶向SORBS1的miRNA为miR-223-3p。用5-FU(25μmol/L)处理HCT116、SW620细胞12~36 h后,2种细胞中miR-223-3p的表达水平均显著下调(均P<0.05)。转染siSORBS1或miR-223-3p mimic后,HCT116、SW620细胞中SORBS1表达水平均下调,细胞活力均增加(均P<0.05);转染HA-SORBS1或antimiR-223-3p后,HCT116、SW620细胞中SORBS1表达水平均上调,细胞活力均下降(均P<0.05)。双荧光素酶报告分析结果显示:共转染SORBS13'-非翻译区(untranslated region,UTR)野生型质粒和miR-223-3p mimic的细胞荧光素酶活性显著低于共转染SORBS13'-UTR野生型质粒和miR-NC的细胞(P<0.05)。与共转染miR-223-3p mimic和HA的细胞比较,共转染miR-223-3p mimic和HA-SORBS1的细胞活力明显降低(P<0.01);与共转染anti-miR-223-3p和siNC组比较,共转染anti-miR-223-3p和siSORBS1组细胞活力明显增加(P<0.05)。结论:MiR-223-3p通过靶向SORBS1基因增加CRC细胞对5-FU的耐药性,miR-223-3p有望成为临床治疗CRC的新靶点。

脑胶质瘤病人血清LASP1、ZBTB20水平变化及其诊断价值

目的:观察脑胶质瘤病人血清含LIM和SH3结构域蛋白1(LASP1)、锌指和BTB结构域蛋白20(ZBTB20)水平变化,并探讨血清LASP1、ZBTB20水平对脑胶质瘤的诊断价值。方法:选取2017年6月—2020年3月沧州市人民医院神经外科收治的67例脑胶质瘤病人作为研究组,采集病人入院后及术后7 d静脉血,收集病人的临床资料,另选取同期在我院体检的60名健康体检者作为对照组,采集静脉血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清LASP1水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测血清ZBTB20水平;采用Pearson相关性分析法分析LASP1与ZBTB20表达的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LASP1、ZBTB20水平对脑胶质瘤的诊断价值。结果:研究组病人血清LASP1、ZBTB20水平明显高于对照组(P<0.001),术后7 d病人血清LASP1、ZBTB20水平明显低于术前(P<0.001)。Pearson相关性分析结果显示,脑胶质瘤病人血清LASP1与ZBTB20水平呈正相关(r=0.263,P=0.031)。血清LASP1、ZBTB20及二者联合诊断脑胶质瘤的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.770,0.859,0.904,敏感度分别为76.12%、77.61%、74.63%,特异度分别为68.33%、83.33%、95.00%,二者联合诊断的效能优于各自单独诊断(Z=3.643,P<0.001;Z=2.129,P=0.003)。结论:脑胶质瘤病人血清LASP1、ZBTB20水平显著上调,二者联合检测对脑胶质瘤具有较高的诊断价值。

缺血性脑卒中患者外周血中SORBS1表达水平与炎症标志物的相关性分析

目的探讨缺血性脑卒中患者外周血中含Sorbin和SH3结构域的蛋白1(SORBS1)表达水平与炎症标志物的相关性。方法选取2020年5月至2021年2月在广州医科大学附属第六医院脑血管病科住院的缺血性脑卒中患者64例作为观察组,另选取同期本院64例健康体检者作为对照组。罗氏全自动生化分析仪检测血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、血清淀粉样蛋白(SAA)和同型半胱氨酸(Hcy)水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清SORBS1水平。亚硫酸氢盐处理后测序(BSP)法检测SORBS1启动子的甲基化水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测SORBS1表达水平。采用Spearman法分析SORBS1表达水平与各种炎症标志物水平的相关性。结果观察组外周血CRP、IL-6、SAA和Hcy水平均高于对照组(P<0.05)。与对照组比较,观察组SORBS1 mRNA相对表达水平降低(P<0.05)。观察组SORBS1蛋白表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。外周血中SORBS1 mRNA相对表达水平与CRP、IL-6、SAA水平均呈负相关(r=-0.763、-0.814、-0.735,P<0.05)。结论缺血性脑卒中患者外周血中炎症标志物水平升高,SORBS1 mRNA表达下降,SORBS1 mRNA水平与炎症标志物水平呈负相关。SORBS1基因可能是抑制缺血性脑卒中患者炎症反应的一种潜在生物指标。

非小细胞肺癌组织中SORBS1的临床意义及基因富集分析

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中含Sorbin和SH3结构域的蛋白1(SORBS1)的临床意义及其相关的通路和生物学过程。方法收集本院2016年1月至2019年12月手术切除的126对NSCLC组织和癌旁组织,采用实时定量PCR(qPCR)检测上述组织的SORBS1水平,分层分析组织SORBS1水平与NSCLC临床病理特征关系,结合随访数据进行生存分析并在Kaplan-Meier Plotter数据库中验证其预后意义。采用LinkedOmics数据库对SORBS1的基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)、Panther、Reactome和Wiki通路进行基因集富集分析(GESA)。结果NSCLC组织的SORBS1水平为0.668±0.036,低于癌旁组织的1.712±0.053(P<0.05)。分层分析发现组织SORBS1水平与TNM分期、肿瘤大小和分化程度有关(P<0.05),而与性别、年龄、吸烟史、淋巴结转移和病理类型无关(P>0.05)。单因素分析显示TNM分期、肿瘤大小、分化程度和组织SORBS1水平与NSCLC患者的OS有关,其中高水平者的中位OS为57.0个月,优于低水平者的35.0个月,差异有统计学意义(HR=3.033,95%CI:1.632~5.637,P<0.001),进一步多因素分析发现组织SORBS1水平是OS的危险因素(HR=2.745,95%CI:1.547~5.162,P=0.024)。GO分析结果表明:SORBS1的生物学过程主要富集在的细胞-细胞粘附(GO:0098742)的调控,分子功能的变化主要集中在细胞外基质结构成分(GO:0005201),细胞成分的变化主要集中在细胞外基质(GO:0031012)。KEGG、Panther、Reactome和Wiki通路分析结果显示:SORBS1富集于细胞粘附分子(hsa04514)、趋化因子和细胞因子信号通路介导的炎症反应(P00031)、细胞外基质组织(R-HSA-1474244)和软骨内骨化(WP474)相关通路。结论SORBS1在NSCLC组织中低表达且与不良预后和恶性进展指标有关,且该基因与细胞外基质相关基因表达及相关信号通路调控关系密切,有望成为NCSLC防治的潜在靶点。

敲低ASAP1降低结核分枝杆菌感染小鼠RAW264.7细胞的迁移能力

目的观察含SH3结构域-ADP-核糖基化因子(Arf)GTP酶激活蛋白-锚蛋白重复序列和PH结构域1(ASAP1)介导小鼠RAW264.7巨噬细胞对结核分枝杆菌感染过程的影响以及ASAP1对巨噬细胞迁移能力的影响。方法建立ASAP1敲低的RAW264.7细胞系,感染结核分枝杆菌H37Ra后,利用荧光共聚焦显微镜和平板计数方法对胞内细菌的载量进行检测,采用TranswellTM法检测ASAP1敲低细胞的迁移能力。结果与对照组细胞相比,ASAP1敲低的RAW264.7细胞感染H37Ra后胞内细菌载量增多,且细胞迁移能力降低。结论敲低ASAP1降低RAW264.7细胞的迁移能力。