含溴结构域蛋白4在心血管疾病发病机制中的研究进展

心血管疾病(cardiovascular diseases)一直以来都是我国乃至全球疾病负担的主要原因,其生存率低,发病率一直呈现上升趋势[1]。据推测,我国目前心血管疾病患者高达3亿,导致的死亡人数约占全国死亡人数的40%,有数据显示,我国每年因心血管疾病产生的费用高达1700亿元,给医疗卫生保健资源带来了极大的负担[2-3]。心血管疾病涉及冠心病、心律失常、高血压、心肌病和心力衰竭等,虽然临床表现存在差异,但在发病机制中仍有许多相似之处。溴结构域和额外终端域(bromodomain and extra-terminal domain,BET)家族蛋白是一种表观遗传调控蛋白,由含溴结构域蛋白2(bromodomain-containing protein 2,BRD2)、BRD3、BRD4和睾丸特异性含溴结构域蛋白(testis-specific bromodomain-containing protein,BRDT)组成[4]。

含溴结构域蛋白4加重高糖诱导的内皮细胞损伤机制探讨

目的 探讨含溴结构域蛋白4(BRD4)对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的作用及机制。方法 培养脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为对照组、高糖刺激组(HG)、BRD4沉默组(BRD4 siRNA组)、BRD4沉默的HG组(BRD4 siRNA+HG组)。采用ELISA法检测各组炎症细胞因子水平,采用试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)水平,采用试剂盒检测各组超氧化物歧化酶2(SOD2)和谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx)活性以及丙二醛(MDA)水平,采用一氧化氮(NO)检测试剂盒检测NO含量,采用免疫荧光染色检测核因子E2相关因子2(NRF2)的表达以及核转位情况。结果 对照组和BRD4 siRNA组细胞促炎症因子、ROS、MDA、NO水平、SOD2和Gpx活性、细胞活性、细胞凋亡数量、NRF2表达及核转位水平差异无统计学意义(P>0.05)。HG组及BRD4 siRNA+HG组细胞促炎症因子、ROS、MDA水平高于对照组,SOD2、Gpx、NO水平、细胞活性、NRF2表达以及核转位水平低于对照组,且BRD4 siRNA+HG组细胞促炎症因子、ROS、MDA水平低于HG组,SOD2、Gpx、NO水平、细胞活性、细胞NRF2表达以及核转位水平高于HG组(P<0.05)。HG组及BRD4 siRNA+HG组细胞凋亡数量多于对照组,与HG组相比,BRD4 siRNA+HG组细胞凋亡数量减少(P<0.05)。结论 BRD4通过抑制NRF2的核转位加重高糖诱导的内皮细胞损伤,BRD4可能参与糖尿病并发症的发生发展。

组蛋白甲基化转移酶SETD4对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响

目的:明确组蛋白甲基化转移酶含SET结构域蛋白4 (SET-domain-containing protein 4, SETD4)在临床鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)组织中的表达,分析SETD4对NPC细胞增殖和迁移的影响。方法:采用免疫组织化学法检测86例临床NPC标本与对照组30例鼻咽黏膜慢性炎症(nasopharyngeal chronic inflammation,NPI)组织中SETD4蛋白的表达;基于CRISPR/Cas9技术敲除CNE2细胞中SETD4基因,DNA测序结合半定量RTPCR进行鉴定;以SETD4敲除前后的CNE2细胞为研究对象,于倒置显微镜下观察细胞形态,采用CCK-8实验分析细胞增殖活性、Transwell实验观察细胞迁移能力变化、Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、细胞周期相关蛋白、上皮-间充质转化标志物和组蛋白赖氨酸甲基化的变化,并通过生物信息学富集SETD4相关联的功能和信号通路。结果:SETD4蛋白主要定位于NPC细胞核中,NPC组织中SETD4阳性表达率显著低于NPI对照组(P<0.01)。基于CRISPR/Cas9技术成功敲除了CNE2细胞的SETD4基因,获得基因敲除的纯合子细胞。与野生型(wild-type, WT)细胞株相比,SETD4敲除(knockout, KO)细胞株呈现更明显的梭形和多角形,增殖活性和迁移能力均显著增加(P<0.01),E-cadherin和p21蛋白表达显著下调(P<0.05),而cyclin D1、cyclin E1、Ncadherin和vimentin蛋白表达则显著上调(P<0.05)。此外,与WT组相比,SETD4KO组细胞中H3K4me2、H3K4me3、H3K9me1、H3K27me3、H3K79me2和H4K20me2水平显著降低(P<0.05)。基因集富集结果显示,SETD4与细胞周期的功能和信号通路相关。结论:临床NPC组织中SETD4蛋白的表达减弱或缺失;SETD4表达减弱通过上调细胞周期相关蛋白促进NPC细胞增殖,通过诱导上皮-间充质转化而促进细胞迁移;SETD4影响NPC细胞中H3K4、H3K9、H3K27、H3K79和H4K20多个位点的甲基化。

含锌指和BTB结构域7B(ZBTB7B/ThPOK)及其相关因子在T细胞分化及功能中的作用

含锌指和BTB结构域7B(ZBTB7B/ThPOK)是CD4谱系分化中的关键转录因子,并抑制CD8谱系生成。ThPOK蛋白表达促进CD4谱系分化,维持CD4谱系稳定性,并抑制CD8谱系分化。首先在胸腺内,ThPOK基因表达受T细胞受体(TCR)信号、基因增强子、基因沉默子等调节,且ThPOK表达受GATA结合蛋白3(GATA3)、Runt相关转录因子3(Runx3)、白血病/淋巴瘤相关因子(LRF)、胸腺细胞选择相关性高迁移率族盒基因(TOX)、Myc关联的锌指蛋白相关因子(MAZR)、E1A结合蛋白p300(P300)等转录因子影响,进而影响CD4、CD8谱系分化。而在外周T细胞中,ThPOK影响CD_4^+T细胞亚群、CD_8^+T细胞分化及功能。在此基础上,正逐步展开针对外周疾病中ThPOK作用的研究。

苦豆碱通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路改善香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤

目的探究苦豆碱(Alo)对香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤的作用及其可能的作用机制。方法16HBE人支气管上皮细胞经100 mL/L香烟烟雾提取物(CSE)和(50、100、200)μmol/L Alo共处理后,CCK-8法检测细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)、Western blot法检测细胞凋亡,ELISA检测炎性因子水平;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针和相关试剂盒检测氧化应激水平;Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白表达水平。16HBE细胞经100 mL/L CSE和200μmol/L Alo共处理后,采用上述方法检测过表达TLR4对TLR4/NF-κB/NLRP3通路、细胞LDH活性、凋亡、炎症反应及氧化应激的影响。结果CSE暴露可降低16HBE细胞活力,增加LDH释放和细胞凋亡,增强炎症反应和氧化应激水平,且激活TLR4/NF-κB/NLRP3通路;经Alo处理后,细胞活性升高,LDH释放减少、凋亡降低、炎症减轻、氧化应激水平下降,且TLR4/NF-κB/NLRP3通路失活;TLR4过表达可逆转Alo处理对CSE诱导的16HBE细胞损伤的保护作用。结论Alo可通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路减轻CSE诱导的人支气管上皮细胞损伤。

JMJD3-IRF4信号通路介导的巨噬细胞极化对多发性骨髓瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨含Jumonji结构域蛋白3(JMJD3)-干扰素调节因子4(IRF4)信号通路介导的巨噬细胞极化对多发性骨髓瘤(MM)细胞恶性生物学行为的影响。方法:佛波酯(PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,将THP-1巨噬细胞分为对照组(正常培养)、M2诱导组(添加重组人IL-4、IL-13蛋白)、M2+JMJD3蛋白组(添加重组人IL-4、IL-13和JMJD3蛋白)和M2+JMJD3抑制剂组(添加重组人IL-4、IL-13蛋白和JMJD3抑制剂),流式细胞术检测CD206^(+)细胞比例,ELISA检测培养上清液中IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)水平,实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测细胞中精氨酸酶-1(Arg-1)、JMJD3、IRF4 mRNA表达水平,免疫印迹(Western blot)检测Arg-1、JMJD3、IRF4蛋白表达水平。相应地,使用各组THP-1巨噬细胞培养上清液培养人MM细胞U266,MTT法、平板克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3)表达水平,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭情况。结果:与对照组比较,M2诱导组THP-1巨噬细胞中CD206^(+)细胞比例,Arg-1、JMJD3、IRF4 mRNA和蛋白表达水平以及细胞培养上清液中IL-10、TGF-β水平明显升高(P<0.001),同时U266细胞增殖活力、集落形成数明显增加(P<0.01),细胞凋亡率以及促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3表达水平明显降低(P<0.001),迁移、侵袭细胞数明显增多(P<0.001)。与M2诱导组比较,M2+JMJD3蛋白组THP-1巨噬细胞中CD206^(+)细胞比例Arg-1、JMJD3、IRF4 mRNA和蛋白表达水平以及细胞培养上清液中IL-10、TGF-β水平均进一步升高(P<0.01),同时U266细胞增殖活力、集落形成数明显升高(P<0.05),细胞凋亡率以及促凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3表达水平明显降低(P<0.01),迁移、侵袭细胞数明显增多(P<0.001);而M2+JMJD3抑制剂组上述各指标变化趋势与M2+JMJD3蛋白组相反。结论:JMJD3-IRF4信号通路介导的巨噬细胞M2极化能够促进MM细胞增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡。

P2X4调控NLRP1/Caspase-1通路在脑出血炎性损伤中的作用机制

目的探讨嘌呤能受体2X4(P2X4)调控含NLR家族pyrin结构域蛋白1(NLRP1)/半胱氨酸天冬氨酸酶1(Caspase-1)通路在脑出血炎性损伤中的作用机制,为寻找脑出血治疗新措施提供实验依据。方法选取100只8~10周C57BL/6雄性小鼠建立脑出血模型,采用随机数字表法分为对照组、模型组、P2X4激动剂组、P2X4拮抗剂组、NLRP1激动剂组,每组各20只。对照组、模型组经小鼠经腹腔给予15μl生理盐水,P2X4激动剂组给予15μl胞苷5′-三磷酸(5′-CTP);P2X4拮抗剂组小鼠经腹腔注射15μl P2X4特异性拮抗剂5-BDBD;NLRP1激动剂组给予15μl胞壁酰二肽(MDP)。在实验第1、3、5、7天进行改良神经功能缺损评分(mNSS),采用ELISA法测量炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定P2X4、NLRP1、Caspase-1蛋白表达,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法测定P2X4、NLRP1、Caspase-1 mRNA表达,并进行组间比较。结果建模后第1、3、5、7天,模型组的mNSS评分高于对照组,P2X4激动剂组、NLRP1激动剂组的mNSS评分高于模型组,而P2X4拮抗剂组的mNSS评分低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。建模后第1、3、5、7天,模型组的IL-1β、TNF-α水平高于对照组,P2X4激动剂组、NLRP1激动剂组的IL-1β、TNF-α高于模型组,而P2X4拮抗剂组的IL-1β、TNF-α低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组的P2X4、NLRP1、Caspase-1 mRNA和蛋白表达高于对照组,P2X4激动剂组、NLRP1激动剂组的相应指标均高于模型组,而P2X4拮抗剂组的相应指标低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论P2X4通过调控NLRP1/Caspase-1通路参与脑出血炎性损伤的发生发展,抑制该通路对改善炎症反应有一定积极作用,值得深入研究。

BRD4蛋白作为恶性胶质瘤治疗靶点的研究进展

近年来研究表明,脑胶质瘤中广泛存在表观遗传学异常现象。与基因突变不同,表观遗传学是可逆的,它可以调控胶质瘤细胞致瘤和非致瘤状态间的转换。组蛋白乙酰化是一种重要的表观遗传学修饰方式。组蛋白乙酰化阅读器——布罗莫结构域蛋白4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)作为胶质瘤治疗靶点,为恢复胶质瘤细胞正常的表观遗传学状态,更有效地治疗恶性胶质瘤提供了新的研究角度[1-3]。目前研究表明,下调BRD4基因或采用BRD4选择性抑制剂JQ1,能够有效地抑制胶质母细胞瘤干细胞(glioblastoma stem cells,GSCs)增殖,促进细胞凋亡,但作用效果有一定的局限性,这提示不能被JQ1抑制的胶质瘤细胞存在其它途径维持异常的自我更新,因此BRD4抑制剂与其它药物联用治疗脑胶质瘤可能具有广阔的前景。

布罗莫结构域4抑制剂jQ1对Ph阳性急性淋巴细胞白血病细胞增殖的抑制作用和机制研究

目的观察布罗莫结构域4（brd4）抑制剂JQ1对Ph阳性急性淋巴细胞白血病（Ph＋ALL）细胞株SUP．B15的增殖抑制、凋亡作用及对brd4及其下游基因myc、p53表达的影响，探讨其是否对bcr—ab1有逆转作用。方法采用不同浓度的JQ1处理SUP-B15细胞。四甲基偶氮唑蓝（MTr）法检测细胞的增殖抑制率；AnnexinV—FITC／PI荧光染色流式细胞术检测细胞凋亡率；实时荧光定量PCR（RT—PCR）法检测bcr-ab1、brd4、myc、p53的mRNA表达。结果不同浓度的JQ1均能抑制SUP-B15细胞的增殖，诱导细胞发生凋亡，凋亡率较对照组明显增高，并呈时间-剂量依赖性，作用72h半数抑制浓度为1．0μmol／L。同时JQ1可以使bcr—ab1、brd4、myc的mRNA水平下降，而使p53mRNA的水平升高。结论brd4抑制剂JQl可通过下调brd4的表达，影响其下游基因myc及p53的表达，同时逆转bcr-ab1表达，达到抑制Ph＋ALL细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用。

GSK-J4通过抑制STAT3磷酸化对HepG2肝癌细胞凋亡和侵袭的影响

目的探讨GSK-J4通过抑制组蛋白去甲基化酶含Jumonji结构域蛋白3(Jumonji domain-containing protein 3,Jmjd3)并上调H3K27me3的表达影响HepG2肝癌细胞凋亡和侵袭的分子机制。方法体外培养人正常肝细胞L02及人肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞株HepG2、SMMC7721,RT-PCR检测Jmjd3 m RNA表达,Western blot检测Jmjd3、H3K27me3蛋白表达;CCK-8法检测不同浓度GSK-J4(0、10、30、50μmol/mL)处理HepG2后增殖能力;流式细胞仪检测凋亡率;Transwell检测细胞侵袭力;Western blot检测Jmjd3、H3K27me3和凋亡相关蛋白Bcl2、Bax、Caspase3、上皮细胞间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标记物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)以及p-STAT3、STAT3蛋白表达。结果与L02比,Jmjd3高表达,H3K27me3低表达于HepG2、SMMC7721肝癌细胞株(P<0.05);GSK-J4抑制HepG2增殖(P<0.05);GSK-J4处理组细胞凋亡率明显提高,细胞侵袭能力减弱(P<0.05);GSK-J4处理HepG2后Jmjd3水平降低,H3K27me3水平增高,Bcl2水平降低,Bax、Caspase3水平增高,E-cadherin表达增高,Vimentin水平降低(P<0.05);p-STAT3表达下调(P<0.01)。结论 GSK-J4通过抑制Jmjd3并上调H3K27me3表达而诱导HepG2发生凋亡并减弱侵袭,其可能与抑制EMT形成和STAT3的磷酸化有关。

含溴结构域和额外终端域家族蛋白——表观遗传领域的新型治疗靶点

BET(bromodomain and extraterminal)是一类能解读表观遗传密码的蛋白,通过识别和结合乙酰化的组蛋白或非组蛋白,在调节基因转录中发挥重要的作用。BET抑制剂在肿瘤和炎症等临床前疾病模型中表现出良好的疗效,且已有部分抑制剂进入临床阶段,这表明以BET为治疗靶点的药物研发具有可观前景。本文将对BET蛋白的结构功能、BET抑制剂与疾病治疗以及其作为治疗靶点的分子机制等方面进行阐述。

BRD4抑制剂通过靶向BTK杀伤ABC-DLBCL细胞(英文)

目的:研究含布罗莫结构域蛋白4(BRD4)抑制剂JQ1和I-BET-762对活化B细胞样弥漫大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)的杀伤作用及其分子机制。方法:以不同浓度的BRD4抑制剂JQ1和I-BET-762及布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂依鲁替尼(ibrutinib)处理ABC-DLBCL细胞,CCK-8法检测细胞活力,PI染色检测细胞凋亡,real-time PCR检测B细胞受体(BCR)/核因子κB(NFκB)信号通路BTK、磷脂酶Cγ(PLCγ)、LYN、SYK、白细胞介素6(IL-6)、蛋白激酶Cβ(PKCβ)、黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤易位蛋白1(MALT1)等分子及转录因子MYC和RELA的m RNA表达,Western blot检测BTK、PLCγ、MYC和RELA的蛋白表达;通过生物信息学分析ABC-DLBCL细胞系HBL-1和生发中心B细胞样弥漫大B细胞淋巴瘤(GCB-DLBCL)细胞系Ly1中的BTK基因是否受超级增强子调控。结果:与Burkit淋巴瘤细胞系Raji和GCB-DLBCL细胞系BJAB相比,ABC-DLBCL细胞系HBL-1和Ly10对BRD4抑制剂JQ1更加敏感,JQ1能够抑制BCR/NFκB靶分子IL-6的表达。另一种BRD4抑制剂I-BET-762同样具有杀伤ABC-DLBCL细胞的作用。进一步机制研究发现,JQ1和I-BET-762能明显抑制BCR/NFκB信号通路关键分子BTK,而对其它分子影响较小。生物信息学分析显示,BTK基因附近无超级增强子,但JQ1处理可显著抑制BRD4结合到BTK基因区。有意思的是,BRD4抑制剂对耐ibrutinib的SU-DHL-2细胞也具有较强的杀伤作用。结论:BRD4抑制剂通过抑制BTK对ABC-DLBCL细胞有显著杀伤作用,与BCR信号通路抑制剂联合应用效果更为显著。JQ1或可用于治疗耐BTK抑制剂ibrutinib的ABC-DLBCL。

氧化苦参碱减轻糖尿病肾病小鼠肾组织炎症及纤维化反应的机制研究

目的 通过观察氧化苦参碱(OMT)对同源结构域相互作用蛋白激酶2 (HIPK2)、Toll样受体4(TLR4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、上皮钙黏素(E-cadherin)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-18表达的影响,初步探讨OMT在糖尿病肾病(DKD)中抗炎抗纤维的可能保护机制。方法 健康6周龄的db/db小鼠适应性喂养2周,随机分为糖尿病组(DM组)和OMT组,每组10只。OMT组给予腹腔注射氧化苦参碱[120 mg/(kg·d)],持续8周,并设同月龄同背景db/m小鼠为正常对照组(NC组)。处死小鼠前收集血液和尿液,检测各项生化指标,HE和Masson染色观察小鼠肾组织病理形态学改变,Western blotting检测、免疫组织化学染色观察各组小鼠肾皮质TLR4、HIPK2、NLRP3、Ecadherin、Fibronectin的表达水平及部位;酶联免疫吸附试验检测各组小鼠血清IL-1β、IL-18水平。采用Pearson法对HIPK2与TLR4、NLRP3蛋白表达进行相关性分析。结果 DM组体重、血糖、24 h尿蛋白量、总胆固醇、甘油三酯水平较NC组均升高(P <0.05),OMT组24 h尿蛋白量、总胆固醇、甘油三酯水平较DM组降低(P <0.05)。病理染色显示,DM组可见肾小球系膜区节段性增生,基底膜无明显增厚,肾小管管腔明显扩张,肾小管上皮细胞空泡样变性,间质区炎症细胞浸润和蓝色胶原纤维沉积;经OMT治疗后,相较于DM组,OMT组肾小球系膜区增生程度减轻,肾小管病变有所改善,间质区炎症细胞浸润减少。DM组TLR4、HIPK2、NLRP3、Fibronectin蛋白相对表达量较NC组升高(P <0.05),E-cadherin蛋白相对表达量较NC组降低(P <0.05);OMT组小鼠TLR4、HIPK2、NLRP3、Fibronectin蛋白相对表达量较DM组降低(P <0.05),E-cadherin蛋白相对表达量较DM组升高(P <0.05)。DM组血清中IL-1β、IL-18相对表达量较NC组升高(P <0.05),OMT组较DM组降低(P <0.05)。Pearson相关相关性分析显示,DM组肾组织中HIPK2蛋白与TLR4、NLRP3蛋白表达均呈正相关(r=0.881和0.774,均P <0.05)。OMT组HIPK2蛋白与TLR4、NLRP3蛋白表达均呈正相关(r=0.814、0.871,均P <0.05)。结论 OMT抑制DM小鼠肾组织的炎症反应和纤维化程度,可能与抑制HIPK2及炎症信号通路的活化有关。

CUL4A、BRD4在非小细胞肺癌患者中的表达及临床意义

目的检测Cullin4A(CUL4A)、布罗莫结构域蛋白4(BRD4)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织中的表达,探讨CUL4A、BRD4与NSCLC的临床病理特征的关系。方法 120例NSCLC患者和30例非癌症组织在免疫组织化学SP法下检测CUL4A、BRD4表达情况,分析CUL4A、BRD4表达与患者的临床病理资料的相关性。结果 NSCLC癌组织中CUL4A、BRD4阳性表达率明显高于正常对照组织(P<0.01),CUL4A阳性表达与年龄、TNM分期存在明显相关(χ~2分别为6.485和8.442,P=0.011和0.004),BRD4阳性表达与年龄、组织类型、TNM和有无淋巴结转移分期有明显相关(χ~2分别为4.350、6.389、12.105和13.841,P=0.009、0.006、0.000和0.000)。结论 CUL4A、BRD4在NSCLC癌组织中表达明显增高,可能在肿瘤发生发展过程中发挥重要作用,并成为预测NSCLC诊断、预后的参考指标之一。

Ac-SDKP抑制YEATS4拮抗实验性矽肺的机制

目的研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酰(N-acetyl-seranyl-aspartate-lysyl-proline,AcSDKP)通过调节含YEATS结构域蛋白4(YEATS domain containing protein 4,YEATS4)从而抑制矽肺纤维化的作用及其机制。方法 RAW264.7细胞分为si RNA阴性对照组(si RNA-Control,si C)、si RNA-YEATS4组(siY)、SiO_(2)+si RNA阴性对照组(S+si C)和SiO_(2)+si RNA-YEATS4组(S+siY);以及对照组(Control,C)、SiO_(2)诱导组(SiO_(2),S)、SiO_(2)+Ac-SDKP处理组(SiO_(2)+Ac-SDKP,S+Ac)和Ac-SDKP处理组(Ac)。Wistar大鼠分为对照24周组(Control 24week,C24)、矽肺24周组(Silicosis 24 week,S24)和Ac-SDKP治疗组(Ac-SDKP treatment 24 week,Ac24)。免疫印迹法(Western blot)检测I型胶原(Collagen type I,COL I)、巨噬细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、精氨酸酶-1(Arginase-1)和YEATS4的表达。免疫组织化学染色法(Immunohistochemical staining,IHC)检测YEATS4在肺组织中的定位及表达。结果 Western blot结果显示,在RAW264.7细胞中,分别与si C、S+si C组比较,siY组、S+siY组COL I、MCP-1、Arginase-1表达均明显降低(P<0.05);与C组比较,S组COL I、MCP-1、Arginase-1和YEATS4高表达;与S组比较,S+Ac组中COL I、MCP-1、Arginase-1和YEATS4表达降低(P <0.05)。IHC及Western blot结果显示,与C24组大鼠比较,S24组中COL I、MCP-1、Arginase-1和YEATS4表达上调;与S24组比较,Ac24组中COL I、MCP-1、Arginase-1和YEATS4表达降低(P<0.05)。结论 Ac-SDKP可能通过抑制YEATS4发挥抗矽肺纤维化的作用。

免疫检查点分子在复发性流产中的研究进展

复发性流产近年来发病率呈升高趋势,其病因复杂,约40%~50%的患者流产没有明确病因,尚无令人满意的治疗方案,严重影响育龄期患者的身心健康,如何改善这部分患者的妊娠结局是目前生殖医学领域急需解决的一大问题。免疫检查点分子是抑制免疫效应细胞的调节分子,已在肿瘤学、免疫学等领域得到了广泛的研究。近期研究表明免疫检查点分子在母胎界面免疫耐受中起重要作用,其异常表达可能通过调节母胎界面免疫细胞功能,进而参与复发性流产的发病。本文就目前研究较深入的免疫检查点分子对复发性流产的影响及干预免疫检查点分子对复发性流产妊娠结局的影响进行综述,已期为下一步病因相关的基础研究和治疗相关的临床应用提供新的思路。

基于VSIG4/NLRP3炎症复合通路探讨异甘草素对中性粒细胞性哮喘小鼠气道炎症的影响

目的探讨异甘草素对中性粒细胞性哮喘小鼠气道炎症的影响及其可能的作用机制。方法用卵清蛋白建立中性粒细胞性哮喘小鼠模型。将Balb/c小鼠随机分为对照组(给予等量的0.9%NaCl处理)、模型组(卵清蛋白建模)、地塞米松组(腹腔注射4 mg·kg^(-1)的地塞米松)、低剂量实验组(腹腔注射100 mg·kg^(-1)的异甘草素)、高剂量实验组(腹腔注射200 mg·kg^(-1)的异甘草素),每组11只。在最后1次雾化激发后的24 h内,检测各组小鼠气道阻力后处死小鼠取支气管肺泡灌洗液及肺组织。用细胞计数板进行总细胞计数;用瑞氏-吉姆萨染色法进行细胞分类计数;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测支气管肺泡灌洗液炎性因子水平;用蛋白质印迹法检测肺组织蛋白表达水平。结果对照组、模型组、地塞米松组、低剂量实验组、高剂量实验组的气道阻力值分别为(0.84±0.08)、(3.34±0.34)、(1.23±0.15)、(2.47±0.19)和(1.54±0.18)cmH_(2)O·s^(-1),白细胞总数分别为(15.03±0.11)、(331.20±26.64)、(38.73±3.28)、(180.35±16.89)和(82.74±10.51)×10^(4)·mL^(-1),白细胞介素17(IL-17)水平分别为(4.79±0.58)、(19.21±2.39)、(6.35±0.81)、(15.96±1.10)和(9.04±0.65)pg·mL^(-1),含V型集和免疫球蛋白结构域4(VSIG4)蛋白表达水平分别为0.67±0.04、0.24±0.04、0.59±0.06、0.37±0.04和0.53±0.05,NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)蛋白表达水平分别为0.24±0.02、0.74±0.07、0.35±0.04、0.65±0.08和0.44±0.03。模型组的上述指标与对照组比较,地塞米松组、低剂量实验组、高剂量实验组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论异甘草素可能通过调节VSIG4/NLRP3复合炎性通路,降低气道阻力、抑制炎性介质的释放改善中性粒细胞哮喘小鼠气道炎性。

GSK525762A对KU812细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制

本研究旨在观察4型含Bromo结构域蛋白(bromodomain-containing protein 4,BRD4)抑制剂GSK52-5762A对KU812细胞增殖及凋亡的影响及其机制。用GSK525762A 100、250、500、1000、2500和5000 nmol/L处理KU812细胞48和72 h,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;GSK525762A 1.0、2.5和5.0μmol/L处理72 h,利用流式细胞术检测其对KU812细胞的凋亡诱导作用。将KU812细胞经DMSO和2.5μmol/L的GSK525762A处理后,利用实时荧光定量PCR观察c-Myc、BCL-2、CDK6、BCL-xL、BAK和BAX基因的mRNA表达水平。结果表明,GSK525762A能显著抑制KU812细胞的增殖,且抑制作用存在量-效关系(r=0.970)和时-效关系(r=0.956);GSK525762A能促进KU812细胞的凋亡;GSK525762A处理后促增殖基因c-Myc、CDK6和抗凋亡基因BCL-2和BCL-xL的mRNA较对照组降低,而促凋亡基因BAK和BAX的转录水平较对照组升高。结论:GSK525762A显著抑制KU812细胞的增殖并促进其凋亡,其机制可能与下调c-Myc、BCL-2、CDK6、BCL-xL的表达和上调BAK、BAX的表达有关。

传染性单核细胞增多症患儿外周血B淋巴细胞中免疫抑制因子的表达及意义

目的观察4种免疫抑制因子〔程序性死亡受体-1(PD-1)、程序性死亡受体-1配体(PD-L1)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)、含T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白(TIGIT)〕在传染性单核细胞增多症(IM)B淋巴细胞上的表达水平及临床意义。方法以2017年4月—9月湖南省儿童医院收治的IM患者为研究对象(IM组),急性期59例,恢复期34例,20例健康体检儿童为正常对照组。采用流式细胞术分别检测PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT在各组B淋巴细胞上的表达水平及急性期表达量与血浆/血清EBV-DNA含量的相关性。结果与正常对照组比较,IM急性期组患者的PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT在B细胞上均显著升高〔PD-1:5.22(3.15)%比0.76(0.86)%,PD-L1:7.80(5.29)%比0.87(0.09)%,CTLA-4:4.23(6.21)%比0.52(0.28)%,TIGIT:9.78(5.72)%比2.23(1.05)%,均P<0.05〕。IM恢复期组PD-L1、TIGIT在B细胞上的表达较正常对照组明显升高〔PD-L1:4.43(6.27)%比0.87(0.09)%,TIGIT:6.03(5.46)%比2.23(1.05)%,均P<0.05〕,但其升高程度明显低于急性期组(均P<0.05)。对急性期59例患者抽血查EBV-DNA检测结果为(8.44±2.04)×10~5拷贝/mL。相关性分析显示,IM患者急性期TIGIT在B细胞上表达水平与EBV-DNA含量呈正相关(r=0.371,P=0.006);而其余3个指标则无相关性,PD-1:r=0.049,P=0.723;PD-L1:r=0.068,P=0.625;CTLA-4:r=0.662,P=0.659。结论PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIGIT在IM急性期表达上调,随着疾病恢复而表达有所下降,提示在IM发病中有一定作用;同时急性期TIGIT表达水平与血浆/血清EBV-DNA含量高低有关。

用于肿瘤治疗的免疫检查点及其抑制剂研究进展

肿瘤免疫检查点的发现为肿瘤免疫治疗提供了全新的思路。除了传统免疫检查点细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)、程序性死亡蛋白1(PD-1)之外,T细胞免疫球蛋白和黏蛋白3(TIM-3)、淋巴细胞活化基因3(LAG-3/CD223)、具有免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域的T细胞免疫球蛋白(TIGIT)、B、T淋巴细胞衰减因子(BTLA)、含免疫球蛋白V结构域T细胞活化抑制因子(VISTA)等新型免疫检查点也逐渐被发现,极大的丰富了肿瘤免疫治疗的选择维度。与之相关的免疫检查点抑制剂如CTLA4抑制剂伊匹单抗(ipilimumab)和替西木单抗(tremelimumab), PD-1/PD-1配体1(PD-L1)抑制剂纳武单抗(nivolumab)、帕姆单抗(pembrolizumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)等相继问世,其在黑素瘤、非小细胞肺癌、消化道肿瘤等实体瘤的治疗方面获得了极大的成功。然而,免疫相关不良事件、耐药性等问题也应该引起足够的重视。本文主要对免疫检查点、免疫检查点抑制剂及其在恶性肿瘤中的应用等方面的研究进展进行综合评述。