解整合素-金属蛋白酶10及肝细胞配体B2在乙肝-肝纤维化-肝癌患者中的表达

目的探讨解整合素-金属蛋白酶10(ADAM10)、肝细胞配体B2(Ephrin-B2)在“肝炎-肝纤维化-肝癌”轴中的表达以及二者与肝纤维化之间的相关性。方法选取400例HBV感染患者为研究对象,以病情的严重程度分为肝纤维化组(200例)、肝细胞癌组(200例),将肝纤维化组进一步分为以下4个亚组:乙型肝炎组(56例)、轻度纤维化组(87例)、中度纤维化组(34例)、肝硬化组(23例),另外选取200例健康体检患者为健康对照组,对比组间血清ADAM10、Ephrin-B2、肝功能指标、肝纤维化指标;免疫组化检测健康肝组织、乙肝不同分级肝纤维化肝组织、肝癌组织间ADAM10与Ephrin-B2表达。采用t检验进行单因素分析,二元logistic进行多因素分析,皮尔逊相关性检测相关性,受试者工作特征(ROC)曲线进行诊断价值分析。结果ADAM10、Ephrin-B2、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、凝血酶原时间(PT)、白蛋白(ALB)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)水平在乙型肝炎组、轻度肝纤维化组、中度肝纤维化组、肝硬化、肝细胞癌组依次升高,且均显著高于健康对照组(P<0.05),免疫组化检测显示ADAM10、Ephrin-B2二者阳性表达在乙肝肝纤维化组织与肝癌组织中显著高于健康肝组织,且随着乙肝肝纤维化的进展Ephrin-B2、ADAM10表达显著升高。ADAM10高表达组和Ephrin-B2高表达组AST、ALT、PT、ALB、LN、Ⅳ-C、HA、PC-Ⅲ显著高于ADAM10低表达组和Ephri-B2低表达组(P<0.05)。患者血清ADAM10与Ephrin-B2呈显著正相关(P<0.05),ADAM10、Ephrin-B与血清AST、ALT、PT、ALB、LN、Ⅳ-C、HA、PC-Ⅲ以及肝纤维化分期呈显著正相关(P<0.05)。ADAM10、Ephrin-B2、AST、ALT、PT、ALB、LN、Ⅳ-C、HA、PC-Ⅲ为HBV感染患者患“肝炎-肝纤维化-肝癌”轴进展的影响因素。ADAM10诊断肝纤维化、肝细胞癌曲线下面积(AUC)分别为0.680、0.713,敏感度为0.821、0.794,特异度为0.577、0.639;Ephrin-B2诊断肝纤维化、肝细胞癌AUC为0.663、0.730,敏感度为0.757、0.834,特异度为0.651、0.693。结论ADAM10、Ephrin-B2与“肝炎-肝纤维化-肝癌”轴进展呈递增表达关系,ADAM10、Ephrin-B2可能在HBV感染患者肝纤维化和肝细胞癌发生和发展进程中发挥了重要作用,ADAM10、Ephrin-B2有希望成为“肝炎-肝纤维化-肝癌”轴疾病诊断和病情监测的重要血清标记物。

外周血微RNA-122-5p和解整合素金属蛋白酶10在桥本甲状腺炎中的表达及临床意义

目的探究外周血微RNA-122-5p(miR-122-5p)和解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)在桥本甲状腺炎(HT)病人中的表达情况及临床意义。方法选择2020年1月至2022年1月在南京医科大学第四附属医院经病理诊断的HT病人86例作为HT组,同期选择经甲状腺腺瘤切除手术的非癌病人62例作为对照组。收集两组病人的一般资料并检测甲状腺功能。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组外周血中miR-122-5p表达水平,ELISA法检测两组外周血中ADAM10水平。Pearson法分析miR-122-5p或ADAM10水平与甲状腺功能参数的相关性。logistic回归分析模型评估HT的影响因素。ROC曲线用于评估miR-122-5p和ADAM10对HT发生的诊断价值。结果与对照组比较,HT组游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)[(8.79±0.85)nmol/L比(13.15±1.21)nmol/L]、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)[(3.74±0.15)nmol/L比(4.56±0.24)nmol/L]水平及ADAM10表达[(3.21±1.13)μg/L比(5.02±1.69)μg/L]降低(P<0.05);促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、C反应蛋白(CRP)水平及miR-122-5p表达(1.57±0.46比1.02±0.34)均升高(P<0.05)。HT组和对照组miR-122-5p与TGAb、TPOAb、CRP水平呈正相关(P<0.05);ADAM10与TGAb、TPOAb及CRP均呈负相关(P<0.05)。HT组中miR-122-5p与ADAM10水平呈负相关(r=−0.46,P<0.05)。MiR-122-5p、ADAM10、TGAb和TPOAb是HT发生的影响因素(P<0.05)。MiR-122-5p、ADAM10及二者联合区分HT组和对照组的最佳截断值分别为1.22、4.74μg/L、0.42,曲线下面积分别为0.83(0.76,0.89)、0.85(0.78,0.90)、0.91(0.85,0.95)。结论HT病人外周血中miR-122-5p表达升高,ADAM10水平降低,二者与甲状腺微结构损伤有关,且对HT的早期诊断具有一定价值。

解整合素金属蛋白酶10与激素性股骨头坏死患者骨髓间充质干细胞的增殖及成骨分化

背景:众多研究发现,激素性股骨头坏死的病理进展与骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化异常有关,其中解整合素金属蛋白酶10(A disintegrin and metalloproteases 10,ADAM10)高度参与此过程,但具体作用机制尚不清楚。目的:探讨ADAM10对激素性股骨头坏死患者来源骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响及其可能机制。方法:选择23例激素性股骨头坏死患者和17例股骨颈骨折患者,于术中无菌条件下取股骨近端骨髓,采用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞,分别得到激素性股骨头坏死患者来源骨髓间充质干细胞(S-BMSCs)和股骨颈骨折患者来源骨髓间充质干细胞(F-BMSCs),体外培养至第3代,采用CCK-8检测两组细胞增殖活性;茜素红染色和碱性磷酸酶染色观察两组细胞成骨分化能力;qRT-PCR和Western blot检测两组细胞中ADAM10 mRNA和蛋白表达水平。采用ADAM10过表达载体慢病毒感染S-BMSCs,再联合Notch信号通路抑制剂DAPT进行处理,CCK-8检测细胞增殖活性;茜素红染色和碱性磷酸酶染色观察细胞成骨分化能力;qRT-PCR检测细胞中成骨标志物碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、骨钙素mRNA表达水平;Western blot检测细胞中Notch信号通路相关蛋白Notch1、NICD、Hes1表达水平。结果与结论:(1)S-BMSCs的增殖活性、成骨分化能力及ADAM10表达水平均显著低于F-BMSCs(均P <0.01);(2)ADAM10过表达后S-BMSCs增殖活性、成骨分化能力及碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、骨钙素mRNA表达水平和Notch1、NICD、Hes1蛋白表达水平均显著升高(P <0.05);然而,DAPT联合干预可显著抑制ADAM10过表达对S-BMSCs增殖活性和成骨分化能力的促进作用,并抑制Notch信号通路的活化;(3)结果表明,ADAM10在S-BMSCs中低表达,ADAM10过表达可增强S-BMSCs的增殖活性及成骨分化能力,其作用机制可能与激活Notch信号通路有关。

解整合素金属蛋白酶10通过介导Wnt/β-catenin信号通路促进子宫内膜癌细胞上皮-间质转化

目的:探讨解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)对子宫内膜癌(EC)细胞上皮-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:收集84例EC患者的新鲜癌组织及癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测癌组织及其癌旁组织中ADAM10 mRNA表达水平。以人EC细胞株HEC-1B作为研究对象,采用ADAM10过表达慢病毒感染HEC-1B细胞,并联合Wnt/β-catenin信号通路特异性抑制剂XAV939进行干预,再将细胞分为空白对照组(blank)、慢病毒阴性对照组(Lv-NC)、ADAM10过表达慢病毒组(Lv-ADAM10)和Lv-ADAM10+XAV939组。采用qRT-PCR检测感染后各组细胞中ADAM10 mRNA表达水平;划痕和Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力;Western blot法分析各组细胞中ADAM10及EMT相关蛋白和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果:EC患者癌组织中ADAM10 mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。与blank组或Lv-NC组比较,Lv-ADAM10组细胞中ADAM10 mRNA和蛋白表达水平以及N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Snail、MMP2和MMP9等蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05),而E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05),同时细胞迁移和侵袭能力显著增强(均P<0.05)。与Lv-ADAM10组比较,LvADAM10+XAV939组细胞中N-cadherin、Vimentin、β-catenin、Snail、MMP2和MMP9等蛋白表达水平显著降低(均P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05),且细胞迁移和侵袭能力明显降低(均P<0.05)。结论:ADAM10在EC组织中高表达,其过表达可促进HEC-1B细胞的EMT进程,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

解整合素金属蛋白酶10在重度子痫前期胎盘中的表达及其意义

目的通过对孕妇胎盘组织中解整合素金属蛋白酶10(a disintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)的检测,探讨ADAM10与子痫前期发病的关系。方法选择2009年9月至2012年3月在北京大学人民医院产科住院分娩的30例重度子痫前期(子痫前期组)和30例正常孕妇(正常妊娠组),采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测两组孕妇胎盘组织中ADAM10mRNA的表达,并采用免疫组化二步法和蛋白质印迹法(Western Blot)检测胎盘组织中ADAM10蛋白的表达。结果 ADAM10表达于胎盘组织的细胞滋养细胞和合体滋养细胞的细胞浆和细胞核中。子痫前期组中ADAM10mRNA及蛋白的表达均明显高于正常妊娠组(P<0.05)。结论重度子痫前期胎盘组织中ADAM10的过度表达可能与子痫前期的发生和发展有关。

胰腺癌患者解整合素样金属蛋白酶10与吉西他滨化疗敏感性的关系分析

目的研究胰腺癌患者肿瘤组织中解整合素样金属蛋白酶10(ADAM10)水平与吉西他滨化疗敏感性的关系。方法选取四川大学华西医院2015年1月至2017年1月胰腺癌患者79例,采用吉西他滨化疗前,利用免疫组织化学染色法对癌组织样本ADAM10蛋白表达水平进行检测,分析ADAM10蛋白表达与患者临床病理参数、化疗效果和预后的关系。结果ADAM10蛋白在胰腺癌患者中的总阳性率为98.74%,其中阳性高表达65.82%;其表达水平与患者分化等级、浸润分期、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05)。化疗效果显示,吉西他滨对ADAM10阳性高表达组患者治疗总有效率为42.31%,明显低于ADAM10低表达组患者的66.67%(P<0.05);Pearson分析表明,ADAM10表达与胰腺癌吉西他滨化疗敏感呈负相关(r=-0.457,P<0.001)。两年随访显示,ADAM10蛋白高表达组患者的中位生存时间、无病生存率、总生存率明显低于低表达组(P<0.05)。结论胰腺癌组织中ADAM10蛋白表达水平可以作为吉西他滨化疗敏感性的生物标志。

散结镇痛理气方对原发性肝癌中人解整合素样金属蛋白酶10表达影响的实验研究

目的观察散结镇痛理气方对原发性肝癌大鼠体内人解整合素样金属蛋白酶10(ADAM10)表达的影响并探讨其临床效用。方法90只大鼠随机分为正常组、模型组及给药组,每组30只,模型组及正常组以DEN诱导构建大鼠原发性肝癌模型,给药组予散结镇痛理气方汤剂,正常组及模型组则予等量生理盐水灌胃。观测比较肝组织的病理学特征及ADAM10及相关因子在各组大鼠肝脏组织中的表达。结果模型组、给药组ADAM10的阳性表达率显著高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05),但给药组在给药干预后则显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),且有肿瘤质量体积的缩减,差异有统计学意义(P<0.05),肝细胞变性坏死亦有一定程度改善。结论散结镇痛理气方通过对肝癌组织中ADAM10的表达抑制,阻断肝癌形成与发展进程。

白藜芦醇对阿尔茨海默病小鼠前额叶皮质SIRT1、RARβ、ADAM10蛋白表达及Tau蛋白磷酸化水平的影响

目的探讨白藜芦醇(Res)对阿尔茨海默病(AD)小鼠前额叶皮质沉默信息调节因子2相关酶I(SIRT1)、维甲纬酸受体β(RARβ)、含有解整合素和金属蛋白酶结构域的蛋白10(ADAM10)表达及Tau蛋白磷酸化水平的影响。方法选取6月龄C57BL/6雄性小鼠6只作为空白对照组(BC组,生理盐水灌胃),6月龄APPswePSEN1dE9(APP/PS1)转基因小鼠12只制备AD小鼠模型后均分为AD组(生理盐水灌胃)、AD+Res组(800 mg/kg Res灌胃),采用Morris水迷宫实验(MWM)检测3组小鼠6月龄和9月龄时找到水中平台的时间;9月龄小鼠完成MWM后麻醉处死,取前额叶皮质,采用荧光实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测3组小鼠前额叶皮质SIRT 1和ADAM 10 mRNA表达水平,采用免疫蛋白印迹(Western blot)技术检测3组小鼠前额叶皮质SIRT1、RARβ及ADAM10蛋白表达及Tau蛋白磷酸化位点Ser396位点[p-tau(S396)]磷酸化水平。结果9月龄AD组和AD+Res组小鼠小鼠较本组6月龄时找到水中平台的时间延长(P<0.01),9月龄AD组小鼠较同月龄BC组小鼠找到平台的时间延长(P<0.01);AD组小鼠前额叶皮质SIRT 1和ADAM 10 mRNA表达水平较BC组小鼠下降(P<0.01),AD+Res组小鼠前额叶皮质ADAM 10 mRNA表达水平较AD组升高(P<0.01);AD组小鼠前额叶皮质SIRT1、RARβ、ADAM10蛋白表达水平较BC组降低(P<0.01),AD+Res组小鼠前额叶皮质SIRT1、ADAM10表达水平较AD组升高(P<0.05);AD组小鼠前额叶皮质p-tau(S396)磷酸化水平较BC组升高(P<0.001),AD+Res组小鼠前额叶皮质p-tau(S396)磷酸化水平较AD组降低(P<0.01)。结论Res可改善AD小鼠的认知功能,其机制可能与AD小鼠前额叶SIRT1、RARβ及ADAM10表达上调和Tau蛋白磷酸化水平降低有关。

解整合素金属蛋白酶10基因慢病毒载体的构建及鉴定

目的:构建解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)基因RNA干扰(RNAi)重组慢病毒载体,为进一步体内外实验研究提供基础。方法:筛选确定ADAM10基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,与LentiLox3.7载体连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用重组慢病毒转导传代心肌细胞(H9C2),通过Western blotting检测心肌细胞ADAM10的蛋白表达。结果:获得的载体插入ADAM10的shRNA核苷酸链序列正确,包装的慢病毒颗粒转导心肌细胞,与对照组比较ADAM10 shRNA转染成功抑制ADAM10蛋白表达。结论:成功构建AD-AM10 shRNA慢病毒载体,为其在扩张型心肌病(DCM)中的生物学功能研究奠定基础。

ADAM10在冠心病中的研究进展

解整合素金属蛋白酶(ADAM)在动脉粥样硬化的发生、发展中起着重要作用。ADAM10作为ADAM的亚型之一,是当前动脉粥样硬化领域的研究热点,对于ADAM10的研究不仅有助于理解ADAM10在动脉粥样硬化中的作用机制,并可能得到新的心血管疾病诊断的生物标志物或潜在的治疗靶点。本文综述ADAM10在冠心病中的研究进展。

高血压合并动脉粥样硬化患者血清ADAM-10、suPAR水平与病情严重程度的关系

[目的]探讨高血压合并动脉粥样硬化患者血清中解整合素-金属蛋白酶10(ADAM-10)、可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(suPAR)的水平及其与病情严重程度的关系。[方法]选取2021年2月—2023年2月期间于本院就诊的125例高血压合并动脉粥样硬化患者作为研究组,另选取同期体检健康者76例作为对照组。根据研究组患者动脉粥样硬化程度将其分为轻度组(n=40)、中度组(n=42)和重度组(n=43),治疗60天后,根据患者的预后情况将其分为预后良好组(n=74)与预后不良组(n=51)。采用ELISA法测定血清ADAM-10、suPAR水平;比较不同预后患者的临床资料;采用Pearson法分析高血压合并动脉粥样硬化患者血清ADAM-10、suPAR水平与颈动脉内膜中膜厚度(IMT)的关系;采用多因素Logistic回归分析高血压合并动脉粥样硬化患者预后不良的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估ADAM-10、suPAR单独及联合检测对高血压合并动脉粥样硬化预后不良的预测价值。[结果]研究组血清ADAM-10、suPAR水平均明显高于对照组(P<0.05);中度、重度组患者血清ADAM-10、suPAR水平明显高于轻度组(P<0.05),重度组患者血清ADAM-10、suPAR水平明显高于中度组(P<0.05);预后不良组患者血清ADAM-10和suPAR水平、左右侧IMT、收缩压、舒张压明显高于预后良好组(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,高血压合并动脉粥样硬化患者血清ADAM-10和suPAR水平与收缩压、舒张压和IMT均呈正相关(P<0.001);Logistic回归分析结果显示,收缩压、舒张压和ADAM-10、suPAR水平升高及IMT增加是影响高血压合并动脉粥样硬化患者预后不良的危险因素(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血清ADAM-10、suPAR水平单独及联合预测高血压合并动脉粥样硬化预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.819、0.830、0.900,二者联合优于各自单独预测(Z_(二者联合-ADAM-10)=2.766,P=0.006;Z_(二者联合-suPAR)=2.602,P=0.009)。[结论]高血压合并动脉粥样硬化患者血清ADAM-10、suPAR水平明显升高,且与动脉粥样硬化严重程度呈正相关,两者对评估高血压合并动脉粥样硬化患者预后有较高的预测价值。

血清ADAM10和DPP-4水平对糖尿病视网膜病变的诊断价值

目的:初步分析2型糖尿病(T2DM)患者血清解整合素样金属蛋白酶10(ADAM10)、二肽基肽酶-4(DPP-4)水平对T2DM视网膜病变(DR)的诊断价值。方法:2020-07-2022-07于本院住院治疗的120例T2DM患者,根据眼底检查和临床表现分为无明显视网膜病变组(NDR组,n=70)及DR组(n=50)。收集两组患者一般资料,检测外周血ADAM10、DPP-4水平、C反应蛋白、血清肌酐等指标水平;Logistic回归分析DR影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ADAM10、DPP-4水平对DR的诊断价值。结果:与NDR组相比,DR组血清ADAM10、DPP-4水平、血清肌酐水平、C反应蛋白显著升高(均P<0.01);Logistic回归分析显示血清ADAM10、DPP-4、C反应蛋白、血清肌酐升高均为DR的独立危险因素(P<0.05或P<0.01)。ROC曲线分析显示血清ADAM10、DPP-4对T2DM发生DR有一定诊断价值,敏感度和特异度均较高,两者联检效果更好。结论:T2DM患者血清ADAM10、DPP-4水平升高,或可对DR临床预测和靶向治疗有一定意义。

血清MMP9、ADAM10联合对类风湿关节炎患者颈动脉粥样硬化的诊断价值

目的 探究血清基质金属蛋白酶9(MMP9)、解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)联合检测对类风湿关节炎(RA)患者颈动脉粥样硬化(CAS)的诊断价值。方法 纳入2021年2月至2022年7月在我院就诊治疗的89例RA患者为研究对象,将RA患者分为合并CAS组(RA-CAS组)和非CAS组(RA-nonCAS组),同期选择50例在我院进行体检健康者为对照组。使用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清MMP9、ADAM10水平;Pearson相关性分析患者血清MMP9、ADAM10水平与颈动脉内膜中层厚度(IMT)之间的关系;受试者工作特征曲线(ROC)评估MMP9、ADAM10对RA患者并发CAS的诊断价值;Logistic回归分析RA患者发生CAS的影响因素。结果 3组研究对象在性别、年龄、吸烟史、BMI、TC、TG、HDL、LDL上差异无统计学意义(P>0.05);RA-CAS组和RA-nonCAS组在病程上差异有统计学意义,RA-CAS组患者病程显著长于RA-nonCAS组(P<0.05);与对照组相比,RA-CAS组和RA-nonCAS组IMT值、血清MMP9、ADAM10水平均显著升高(P<0.05),且RA-CAS组显著高于RA-nonCAS组(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,RA患者并发CAS血清MMP9、ADAM10水平与IMT值均呈显著正相关(r1=0.568,r2=0.571,P<0.05);ROC曲线显示,MMP9、ADAM10单独诊断RA患者并发CAS的AUC分别为0.879、0.865,灵敏度分别为83.3%、77.1%,特异性分别为66.8%、63.9%,两者联合诊断RA患者并发CAS的AUC为0.963,灵敏度、特异性分别为95.8%、87.0%;多因素Logistic回归分析表明,MMP9、ADAM10是影响RA患者并发CAS的危险因素(P<0.05)。结论 RA并发CAS患者血清MMP9、ADAM10水平显著升高,血清MMP9、ADAM10水平与IMT呈正相关,并且血清MMP9、ADAM10可作为诊断RA患者并发CAS的血清标志物。

ADAM10在骨髓间充质干细胞成骨分化及胫骨骨折愈合中的作用及可能机制

目的 探索解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)在骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化及胫骨骨折愈合中的作用及可能机制。方法 培养SD大鼠BMSCs,建立稳定转染阴性对照(NC)shRNA pGFP-V-RS载体的BMSCs并分为sh-NC组和sh-NC+DMSO组,建立稳定转染ADAM10 shRNA pGFP-V-RS载体的BMSCs并分为sh-ADAM10组、sh-ADAM10+DMSO组、sh-ADAM10+丙戊酸(VPA)组。成骨诱导14 d后进行茜素红染色并检测405 nm波长吸光值、ALP活性及ADAM10、成骨标志物基因(骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(Runx2)、胶原蛋白-I(Col-I))、Notch1信号通路分子(Notch细胞内片段(NICD)、Hes1)的表达水平。建立SD大鼠的胫骨骨折模型,局部注射NC shRNA、ADAM10 shRNA的pCMV5.0载体,4周后观察骨折愈合的情况以及基因表达水平。结果 sh-ADAM10组BMSCs中ADAM10的表达水平低于sh-NC组,成骨诱导后茜素红染色的405 nm波长吸光值、ALP活性及OCN、Runx2、Col-I、NICD、Hes1的表达水平均高于sh-NC组(P<0.05);sh-ADAM10+VPA组BMSCs成骨诱导后茜素红染色的405 nm波长吸光值、ALP活性及OCN、Runx2、Col-I的表达水平均低于sh-ADAM10+DMSO组(P<0.05);sh-ADAM10组胫骨骨折大鼠的骨折愈合情况优于sh-NC组,骨折部位OCN、Runx2、Col-I、NICD、Hes1的表达水平均高于sh-NC组(P<0.05)。结论 敲低ADAM10表达促进BMSCs的成骨分化及胫骨骨折愈合,这一作用与抑制Notch1通路有关。

血清Hcy、ADAM10、Gal⁃3与2型糖尿病患者颈动脉粥样硬化的相关性

目的探究血清同型半胱氨酸(Hcy)、解整合素⁃金属蛋白酶10(ADAM10)、半乳糖凝集素3(Gal⁃3)与2型糖尿病(T2DM)患者颈动脉粥样硬化(CAS)的相关性。方法选取云南大学附属医院2021年10月至2022年10月收治的98例T2DM患者为观察组,另根据性别、年龄匹配选取同期体检健康者40名为对照组。检验所有研究对象血清Hcy、ADAM10、Gal⁃3水平,对比2组指标差异,分析各项指标与CAS的关系。结果观察组共45例患者纳入T2DM组,53例纳入T2DM+CAS组,三组研究对象的BMI、FBG、2 h FBG、HbA1c、TC、TG、HDL⁃C、LDL⁃C、Hcy、ADAM10、Gal⁃3及左右侧颈动脉内膜中层厚度(intimal media thickness,IMT)水平比较,差异有统计学意义(F=61.934、67.925、65.751、24.465、305.08、24.638、24.789、133.902、43.027、183.94、305.08、265.287,P<0.05)。T2DM+CAS组患者的TC、LDL⁃C、Hcy、ADAM10、Gal⁃3及左右侧IMT水平均高于T2DM组,差异有统计学意义(t=3.064、12.111、8.168、7.575、8.568、12.111、12.089,P<0.05)。观察组患者左侧IMT与ADAM10存在中等程度相关,与Hcy、Gal⁃3存在强相关(r=0.524、0638、0.609,P<0.05);右侧IMT与Hcy、ADAM10、Gal⁃3存在强相关(r=0.699、0.609、0.693,P<0.05)。回归模型中,Hcy、ADAM10、Gal⁃3均为T2DM患者CAS的危险因素(P<0.05)。结论T2DM患者CAS的发生发展受多方面因素,其中血清Hcy、ADAM10、Gal⁃3水平升高均会加重CAS病情,临床上需要加以重视。

截短型金属蛋白酶ADAM 10对Aβ42的水解作用

目的:解整合素样金属蛋白酶10(disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10,ADAM 10)是一种重要的膜锚定金属蛋白酶,参与多个重要生理过程,同某些癌症和神经退行性疾病有重要联系。拟通过毕赤酵母表达系统表达ADAM 10的金属蛋白酶结构域,探究ADAM 10对β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ42)的作用。方法:首先通过数据库检索的方式获得所需序列,将密码子进行酵母偏好性优化后,插入至pPIC9k分泌表达载体上。通过电转化、阳性筛选、多拷贝子筛选等过程后,用蛋白印迹(Western Blot)的检测方式筛选出能够表达重组蛋白并将其有效分泌至培养基中的阳性菌株。分别用Tricine-SDSPAGE电泳结合Western Blot和高效液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)的方法检验截短型ADAM 10(s ADAM10)对Aβ42的水解作用,并用硫黄素T(thioflavin T,ThT)荧光实验检验s ADAM 10对Aβ42聚集的影响。结果:通过毕赤酵母表达系统成功分泌表达了s ADAM 10,其分子量在35 kD左右,为已成功切除了前导肽的并在金属蛋白酶结构域中的糖基化位点上进行糖基化的成熟蛋白酶;重组蛋白能水解Aβ42,在一定程度上抑制Aβ42聚集,其被检测到的水解位点位于Aβ42多肽的中段。结论:s ADAM 10具有作为阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)治疗药物的可能性。

妊娠期高血压疾病患者血清ANGPTL2、ADAM10水平与病情严重程度及预后关系

目的:探讨血清血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)、解整合素-金属蛋白酶10(ADAM10)在妊娠期高血压疾病(HDCP)患者血清中的表达,以及与病情严重程度、预后的关系。方法:收集本院2019年11月-2021年11月收治的106例HDCP患者为HDCP组,其中重度子痫前期28例(重度组)、子痫前期34例(中度组)、妊娠期高血压44例(轻度组),同期产前检查健康孕妇100例为对照组。采用酶联免疫吸附法测定血清ANGPTL2、ADAM10的水平,Spearman分析HDCP病情严重程度与血清ANGPTL2、ADAM10及血压的相关性,根据羊水污染程度、新生儿Apgar评分将HDCP患者分为预后不良组(56例)和预后良好组(50例),多因素logistic回归分析影响HDCP患者预后的因素。受试者工作特征曲线(ROC)分析血清ANGPTL2、ADAM10对HDCP患者预后的预测价值。结果:HDCP组ANGPTL2(8.54±2.13 ng/ml)、ADAM10(1700.54±300.35 pg/ml)高于对照组(6.46±1.21 ng/ml、1348.65±280.32 pg/ml)(均P<0.05)。HDCP患者中,轻度组、中度组、重度组血清ANGPTL2、ADAM10、收缩压、舒张压依次升高,且与患者病情严重程度呈正相关;预后不良组24 h尿蛋白(PRO)、ANGPTL2、ADAM10水平均高于预后良好组(均P<0.05)。24 h PRO、ANGPTL2、ADAM10异常高表达是影响HDCP患者不良预后的因素(均P<0.05)。血清ANGPTL2预测HDCP患者预后的曲线下面积(AUC)为0.838,最佳临界值为8.14 ng/ml;血清ADAM10预测HDCP患者预后的AUC为0.834,最佳临界值为1627.11 pg/ml,两者联合的AUC为0.921,预测效能高于单一指标(均P<0.05)。结论:血清ANGPTL2、ADAM10在HDCP患者中表达上调,二者与其病情严重程度、预后密切相关,并可预测患者预后。

敲低阿霉素心肌病大鼠心肌细胞ADAM10后大鼠心功能的改善及机制

目的建立阿霉素心肌病动物模型,观察解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)小干涉RNA(siRNA)重组慢病毒对神经钙黏素(N-cadherin)加工水解途径的调控。方法 SD大鼠腹腔注射阿霉素,建立阿霉素心肌病大鼠模型。将ADAM10 siRNA重组慢病毒进行心内注射,分为模型组、重组慢病毒治疗组、空白载体组及正常对照组。分离原代心肌细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,确定感染效率。超声检测各组大鼠心功能,HE染色观察心肌组织病变情况,Western blot法检测心肌细胞N-cadherin在ADAM10水解后产生的C末端片段1(CTF1)的蛋白水平,免疫组织化学染色检测心肌组织N-cadherin的表达和分布。结果原代培养的感染后心肌细胞可见大量GFP表达,说明慢病毒成功感染心肌细胞;与阿霉素心肌病组相比,ADAM10 siRNA重组慢病毒治疗组死亡率下降,心功能及心肌组织形态明显改善,心肌细胞N-cadherin蛋白水平增加并主要定位于细胞表面、CTF1蛋白水平降低。结论敲低ADAM10水平,增加阿霉素心肌病大鼠心肌细胞N-cadherin的表达、降低CTF1的表达,改善心功能。

siRNA沉默ADAM10基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)沉默解整合素金属蛋白酶(ADAM10)基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响。方法将ADAM10特异性siRNA转染人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A细胞,实验分为3组,ADAM10-siRNA组转染ADAM10特异性siRNA,NC-siRNA组转染ADAM10非特异性siRNA,对照组为未经转染处理的MH7A细胞。转染48 h后采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中ADAM10表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平,ELISA测定细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)含量。结果 ADAM10-siRNA组细胞中ADAM10 mRNA和蛋白表达水平较NC-siRNA组和对照组低(P <0.05)。沉默ADAM10基因后,ADAM10-siRNA组细胞凋亡率显著高于NC-siRNA组和对照组(P <0.05)。ADAM10-siRNA组细胞中Bax基因表达水平明显高于NC-siRNA组和对照组(P <0.05),Bcl-2基因表达水平明显低于NC-siRNA组和对照组(P <0.05)。ADAM10-siRNA组细胞分泌的TNF-α、IL-6和IL-8显著低于NC-siRNA组和对照组(P<0.05)。而NC-siRNA组和对照组以上各指标相比较,差异不明显(P> 0.05)。结论沉默ADAM10基因可明显促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡,并进一步减少TNF-α、IL-6和IL-8等炎症因子的分泌,提示通过沉默ADAM10基因使减轻/控制类风湿关节炎炎症成为可能。

过表达ADAM10通过Notch/Akt信号通路抑制急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡

目的探讨过表达解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡及Notch/Akt信号通路的影响。方法将40只SD大鼠随机均分为假手术组(sham)、急性心肌梗死组(AMI)、空载腺病毒组(Ad-NC)和ADAM10腺病毒组(Ad-ADAM10)。除sham组外,其他各组均采用冠状动脉左前降支结扎术构建AMI大鼠模型,于心肌梗死区原位注射腺病毒进行干预。干预72 h后,超声心动图评估大鼠心功能;取心肌组织,TCC染色评估心肌梗死面积,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况,RT-PCR检测心肌组织中ADAM10 mRNA表达水平,Western blot检测心肌组织中ADAM10、凋亡相关蛋白以及Notch/Akt信号通路相关蛋白表达水平。结果与sham组比较,AMI组大鼠心功能下降,心肌梗死面积和心肌凋亡率均增加,并且心肌组织中ADMA10 mRNA和蛋白水平以及Bcl-2、Notch1、Hes1、p-Akt等蛋白表达水平均降低,而Cleaved-caspase-3和Bax蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与AMI组比较,Ad-ADAM10组大鼠心功能得到改善,心肌梗死面积和心肌细胞凋亡率均降低,心肌组织中ADMA10 mRNA和蛋白水平以及Bcl-2、Notch1、Hes1、p-Akt等蛋白表达水平均升高,而Cleaved-caspase-3和Bax蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。而Ad-NC组以上指标与AMI组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ADAM10过表达可改善AMI大鼠心功能,并抑制心肌细胞凋亡,其机制可能与Notch/Akt信号通路激活有关。