血管内皮生长因子及其激酶插入区受体在卵巢子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其激酶插入区受体(kinase insert domain receptor,KDR)在卵巢子宫内膜异位症(ovarian endometriosis,OEM)在位内膜和卵巢异位内膜及其周围卵巢组织中的表达及在OEM发病机制中的作用。方法:应用免疫组织化学S-P法测定VEGF和KDR在51例Ⅱ～Ⅲ期OEM患者的44份卵巢子宫内膜异位囊肿及其邻近卵巢组织、20份子宫内膜组织及18份非子宫内膜异位症(非内异症)患者增生期子宫内膜组织中的表达,并对表达结果进行分析。结果:VEGF和KDR主要分布于子宫内膜及异位内膜的腺上皮细胞质中。VEGF和KDR在卵巢异位上皮的阳性率分别为63.6%、54.6%,而在异位上皮邻近卵巢组织的阳性率分别为6.8%、15.9%,VEGF和KDR在异位内膜的阳性率均高于卵巢异位内膜邻近卵巢组织(P=0.000 1和P=0.008 4),且两者在异位内膜的表达呈正相关关系(P=0.000)。VEGF和KDR在OEM子宫内膜中的阳性率分别为80.0%、75.0%,而在非内异症子宫内膜中的阳性率分别为16.7%、27.8%,VEGF和KDR在在位内膜中的阳性率同对照组子宫内膜上阳性率的差异均有统计学意义(P<0.01)。两者在OEM卵巢异位内膜和在位内膜上的阳性率相似,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:VEGF与KDR在卵巢异位内膜中的阳性率明显高于邻近卵巢组织,提示VEGF与受体KDR协同表达可能与OEM血管生成有密切关系。VEGF、KDR在OEM在位内膜的阳性率高于非内异症组子宫内膜,且两者在OEM卵巢异位内膜和在位内膜上的阳性率相似,支持在位内膜决定论学说。

血管内皮生长因子激酶功能区受体基因沉默抑制肺癌A549细胞增殖并增强其对多西他赛的敏感性

目的研究沉默血管内皮生长因子激酶功能区受体(kinase.domain insert containing receptor,KDR)基因对人肺癌A549细胞增殖以及对化疗药物多西他赛敏感性的影响。方法设计合成:KDR的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列,Lipofectamine^(TM)2000转染入A549细胞。通过反转录-聚合酶链反应和Western Blot检测KDR基因沉默后KDR mRNA及蛋白的表达情况,利用流式细胞仪检测A549细胞的周期变化。采用四甲基偶氮唑盐比色法及细胞克隆形成实验观察,沉默KDR基因后A549细胞对多西他赛的敏感性。结果KDR基因经48 h沉默后,A549细胞的KDR基因和蛋白的表达出现较明显的下降(P<0.05)。A549细胞的周期在G0/G1期阻滞,S期细胞数目减低(P<0.05)。在KDR基因沉默组,A549细胞对多西他赛的敏感性有明显的增强(P<0.05)。结论KDR-siRNA能够明显沉默A549细胞KDR基因和蛋白的表达,并能抑制A549细胞的增殖,增强其对多西他赛的敏感性。

血管内皮生长因子和激酶功能区受体在乳腺癌组织中的表达水平及其与局部血管生成的相关性分析

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)及激酶功能区受体(KDR)在乳腺癌组织中的表达水平及其与局部血管生成的相关性。方法:采用免疫组织化学法检测40例乳腺癌患者乳腺癌组织和正常乳腺组织中VEGF和KDR的表达水平,并用CD34标记,检测其微血管密度(MVD)。结果:乳腺癌组织中VEGF和KDR阳性表达率均显著高于正常乳腺组织(P<0.01),且MVD亦明显高于正常乳腺组织(P<0.01)。乳腺癌组织中VEGF与KDR表达水平呈正相关关系(P<0.01),且两者均与MVD呈正相关关系(P<0.01)。VEGF和KDR阳性组织中,MVD显著高于两者均阴性的组织(P<0.01)。结论:VEGF和KDR在乳腺癌组织中阳性表达率升高且参与了肿瘤血管的生成。

血管内皮生长因子及其激酶插入区受体、血管内皮生长因子可溶性受体与子宫内膜异位症发病机制的相关性研究

目的探究血管内皮生长因子(VEGF)及其激酶插入区受体(KDR)、血管内皮生长因子可溶性受体1(sflt-1)与子宫内膜异位症(EMS)发病机制的相关性。方法选择20例EMS患者作为实验组,另选同期实施腹腔镜手术治疗的20例非EMS患者作为对照组,比较两组腹腔积液及血清中VEGF、KDR、sflt-1含量及VEGF活性指数。结果对照组腹腔积液中的sflt-1为(1.12±0.21)ng/ml、VEGF为(10.08±1.53)ng/ml、VEGF活性指数为(12.41±1.38)、KDR为(2.34±0.28)ng/ml,均显著低于实验组的(1.63±0.45)ng/ml、(19.35±2.42)ng/ml、(29.44±2.59)、(3.14±0.35)ng/ml,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组血清中的VEGF、sflt-1、KDR及VEGF活性指数水平均高于对照组,差异具有统计学意义(t=9.980、4.385、10.909、9.404,P<0.05)。结论 VEGF及其KDR、sflt-1与EMS的发病密切相关,临床可将三者作为诊断EMS的重要指标,后期仍需进一步研究不同临床分期的EMS的差异。

AR、SKP2、SOX10、PD-L1及TIL表达在三阴性乳腺癌中的意义

目的:探索雄激素受体(androgen receptor,AR)、S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,SKP2)、性别决定区Y相关的HMG盒含因子10(sry-related HMG box-containing factor 10,SOX10)、程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)及肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)表达与临床病理特征和预后的关系。方法:根据苏木精-伊红染色(hematoxylineosin, HE)染色切片评判109例TNBC瘤巢内TIL的比例,采用Leica Bond-Max全自动免疫组化仪检测TNBC组织中AR、SKP2、SOX10、PD-L1的表达。分析以上各生物指标与临床病理特征间的关系,并采用kaplan-Meier、Log-rank进行生存分析。结果:95例患者获得随访,中位随访时间为48个月,中位无病生存时间(disease-free survival, DFS)为42个月,中位总生存时间(overall survival, OS)48个月。在TNBC中,AR阳性表达与淋巴结转移阴性(P=0.009)、肿瘤最大径<2 cm(P=0.008)相关,TIL高表达与低级别TNBC相关(P=0.007),SKP2阳性表达与神经/脉管侵犯阳性(P=0.011)、高级别TNBC相关(P=0.002),SOX10阳性表达与淋巴结转移阳性(P=0.022)、高级别TNBC(P=0.005)相关,PD-L1阳性表达与淋巴结转移阳性(P=0.020)、神经/脉管侵犯阳性(P=0.006)、高级别TNBC(P=0.042)相关。生存分析显示,SKP2、SOX10阳性表达与更差的DFS(P=0.007、P<0.001)和OS(P=0.013、P<0.001)相关,TIL高表达与更好的DFS(P=0.016)及OS(P=0.004)相关。在生物表志物的联合表达中,AR+/SKP2-、AR+/SOX10-与更好的DFS(P=0.004、P<0.001)及OS(P=0.007、P=0.001)相关,SOX10+/低TIL、PD-L1+/低TIL与更差的DFS(P<0.001、P=0.008)及OS(P=0.001、P=0.002)相关,AR-/低TIL者具有更差的OS(P=0.014)。SKP2(HR=4.143,95%CI为1.578~10.875)、SOX10(HR=7.578,95%CI为2.067~27.782)的阳性表达是影响TNBC患者DFS的独立预后因子,SKP2(HR=3.758,95%CI为1.400~10.084)、SOX10(HR=5.131,95%CI为1.316~20.000)及TIL(HR=0.375,95%CI为0.154~0.917)的阳性表达是TNBC患者OS的独立预后因子(P均<0.05)。结论:在TNBC中,AR阳性、TIL高表达与具有更好预后的临床病理特征相关,SKP2、SOX10和PD-L1与具侵袭性的临床病理特征相关。SKP2、SOX10及TIL表达与TNBC预后相关,提示这些生物指标可能成为TNBC新的预后因子,同时它们也有可能成为潜在的治疗靶点。

VEGF及其受体KDR在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:通过检测血管内皮生长因子(VEGF)、激酶插入区受体(KDR)在子宫内膜异位症(EMs)患者异位内膜、在位内膜及血清和腹腔液中的表达,探讨VEGF及KDR在EMs发病机制中的作用。方法:应用免疫组化SP法检测并比较EMs异位内膜、在位内膜及对照组子宫内膜组织中VEGF及KDR的表达水平。应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测并比较EMs组及对照组血清和腹腔液中VEGF及KDR的含量。结果:VEGF和KDR在EMs组异位内膜的表达明显高于在位内膜和正常内膜组(P<0.05),VEGF和KDR在在位内膜的表达明显高于正常对照组(P<0.05),且两者在EMs异位内膜的表达呈正相关(r=0.971,P<0.05)。EMs患者血清和腹腔液中VEGF及KDR含量明显高于对照组(P<0.01),临床分期较早(Ⅰ～Ⅱ)的EMs患者的血清和腹腔液中VEGF及KDR水平明显高于临床分期较晚(Ⅲ～Ⅳ)的患者(P<0.05)。EMs组腹腔液中VEGF及KDR浓度显著高于其血清中浓度(P<0.05)。结论:VEGF及KDR可能在EMs发生、发展过程中发挥了重要的作用,检测血清VEGF及KDR水平为EMs的早期诊断提供了一种新的可能方法,也为通过VEGF-VEGFR双靶向阻断血管来治疗EMs奠定了理论基础。

脑信号蛋白6D和激酶插入区受体2在大肠腺癌组织的表达及其临床意义

目的探讨脑信号蛋白6D（Sema6D）和激酶插入区受体2（KDR）在大肠腺癌中的表达及其与大肠腺癌发生发展的关系。方法利用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法和反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测Sema6D和KDR蛋白和mRNA在大肠腺癌和癌旁正常组织中的表达及其与临床病理之间的关系，分析两者之间的相关性。结果Sema6D和KDR在大肠腺癌中的表达明显高于正常组织（70.3%比45.3%，P＝0.004、76.6%比48.4%，P＝0.002），且与大肠腺癌淋巴结转移、Duke’s分期、分化程度呈正相关，两者在大肠腺癌中的表达具有正相关。结论Sema6D、KDR可能在大肠腺癌的发生发展中具有重要作用。

抗KDR胞内区(KDR-CD)单克隆抗体的制备和鉴定

目的:研制特异性针对肿瘤新生血管内皮细胞生长因子受体(或含激酶插入区受体)胞内区(KDR-CD)的特异性单克隆抗体(mAb)。方法:以谷胱甘肽转硫酶耦联的KDR-CD(GST-KDR-CD)可溶性融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备分泌抗KDR-CD mAb的杂交瘤细胞;用间接ELISA法测定其亲和力、亚类,Western blot检测其特异性。结果:获得1株稳定分泌抗KDR-CD mAb的杂交瘤细胞株,命名为2B8H2A5;它分泌的抗体亚类为IgG1,к型轻链,而且亲和力强、特异性高。结论:成功获得能分泌抗KDR-CD mAb杂交瘤细胞,为以后将该mAb改造成小分子酪氨酸激酶抑制剂,使其能进入细胞内与受体KDR-CD特异性结合并阻断血管内皮细胞生长因子强大的生物学功能奠定了重要的基础。

灵芝酸A对乳腺癌MCF-7细胞迁移和对激酶插入区受体基因表达的影响

目的研究灵芝酸A对乳腺癌MCF-7细胞迁移及激酶插入区受体(KDR)基因表达的影响。方法将对数生长期乳腺癌MCF-7细胞分为空白组、对照组和低、高2个剂量实验组。空白组用改良杜氏伊格尔培养基100μL处置;对照组用0. 25 mg·L^(-1)的表柔比星溶液100μL处置;低、高2个剂量实验组用0. 1,0. 5 mmol·L^(-1)的灵芝酸A溶液100μL处置。用噻唑蓝比色法检测各组乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制率,用细胞划痕实验检测乳腺癌MCF-7细胞迁移能力,用逆转录-聚合酶链反应检测各组乳腺癌MCF-7细胞KDR mRNA表达水平,用免疫印迹法检测各组乳腺癌MCF-7细胞KDR蛋白表达水平。结果处置24 h后,空白组、低剂量实验组、高剂量实验组和对照组的MCF-7细胞增殖抑制率分别是(0. 00)%,(39. 57±5. 29)%,(71. 37±7. 35)%和(72. 03±7. 64)%;这4组的细胞愈合率分别是(73. 27±8. 66)%,(52. 48±6. 54)%,(18. 73±2. 31)%和(18. 35±2. 48)%;这4组的KDR mRNA相对表达量分别是0. 95±0. 12,0. 65±0. 07,0. 21±0. 02和0. 20±0. 01;这4组的KDR蛋白相对表达量分别是1. 05±0. 13,0. 81±0. 10,0. 43±0. 05和0. 41±0. 05,3个给药组与空白组比较或高剂量实验组和对照组与低剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论灵芝酸A能剂量依赖性地抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,有效降低细胞迁移能力,其作用可能与下调KDR mRNA及KDR蛋白表达有关。

血管内皮生长因子及其受体在DR患者玻璃体中的表达

目的:观察血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)及其受体在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)患者玻璃体中的表达,探讨其在DR发生发展中的作用。方法:对13例16眼DR患者和15例15眼健康人,采用免疫组织化学法检测其玻璃体新生血管膜的VEGF及其受体(fms-样酪氨酸激酶,Flt-1和含激酶插入区受体,KDR)表达情况,同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测DR患者玻璃体中VEGF、Flt-1和KDR的浓度。结果:免疫组织化学染色显示,DR患者玻璃体血管膜中VEGF、Flt-1和KDR高度表达,玻璃体中VEGF、Flt-1和KDR浓度明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:VEGF及其受体Flt-1、KDR在DR患者玻璃体中高度表达,与DR患者的微血管生成关系密切,提示VEGF及其受体在DR的发生发展中起重要作用。

VEGF及KDR在大肠腺瘤和腺癌中的表达及意义

目的:探讨VEGF和KDR在大肠腺瘤和大肠腺癌中的表达及临床病理特征的关系。方法:大肠腺瘤和大肠腺癌组织标本各100例,采用免疫组织化学染色法检测VEGF和KDR在标本中的表达情况。结果:VEGF和KDR在大肠腺癌组中的阳性表达明显高于大肠腺瘤组(P<0.05);在正常大肠黏膜均未见VEGF和KDR表达的阳性染色;VEGF阳性表达组中KDR的阳性表达率为70%,显著高于VEGF阴性表达组中KDR的阳性表达率16%,两组比较有统计学意义(P<0.01)。结论:大肠腺癌组织中KDR的表达与肿瘤大小、转移情况、浸润深度密切相关;VEGF和KDR在大肠腺瘤中的表达与患者的年龄、性别及分型均无相关性,而与增生程度相关(P<0.05)。在大肠腺癌患者中VEGF及KDR表达更高,二者具有协同效应。

KDR基因遗传变异与接受5-FU辅助化疗的结直肠癌患者预后的关系

目的:探讨激酶插入区受体(kinase insert domain receptor,KDR)基因遗传变异与接受5-FU为基础辅助化疗的结直肠癌(colorectal cancer, CRC)患者预后的关系。方法:回顾性分析2012年1月至2017年12月在郑州人民医院肛肠外科接受手术切除治疗的CRC患者共176例的临床资料,并收集93例术后癌组织标本。采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCRRFLP)技术检测KDR基因多态性位点基因型,采用qPCR检测癌组织中KDR基因mRNA的表达水平。通过logistic回归模型分析多态性位点的基因型与其他变量的相关性,非参数检验分析KDR不同基因型的表达,采用Kaplan-Meier生存分析单变量KDR基因型与患者预后的关系,并通过Cox风险比例模型对其他变量进行校正。结果:在KDR的多态性位点中,仅发现了rs2071559位点具有临床意义。该位点在176例CRC患者中的分布频率:TT基因型95例(53.98%),TC基因型70例(39.77%),CC基因型11例(6.25%);最小等位基因频率为0.26;3种基因型分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P=0.690)。携带C等位基因的TC/CC基因型患者与野生型TT基因型患者的中位无复发生存期(mDFS)分别为4.4和3.2年(P<0.05);TC/CC基因型和TT基因型患者的中位总生存期(mOS)分别为5.2和4.0年(P<0.05)。对OS构建多变量的Cox模型校正后,TC/CC基因型对mOS具有明显影响(OR=0.55,P<0.05)。rs2071559位点TC/CC基因型患者相对于野生型TT基因型患者KDR m RNA表达水平显著降低(P<0.01)。结论:KDR基因rs2071559位点多态性与CRC患者临床治疗效果相关,其机制是可能通过影响KDR mRNA表达水平进而影响CRC患者的预后。

EGFR和KDR在胃癌组织中的表达及临床意义

探讨表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和含激酶插入区受体(kinase-insert domain-containing receptor,KDR)的表达与胃癌临床病理特征的关系及其临床意义.应用免疫组织化学PV法,检测60例胃癌组织中EGFR和KDR的表达情况,并且分析其与临床病理特征的关系.胃癌组织中EGFR和KDR阳性表达率分别为48.3%(29/60)、63.3%(38/60),二者的阳性表达与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期相关(P<0.05),并且存在共表达现象,表达强度呈正相关(rs=0.664,P<0.05).EGFR和KDR在胃癌的进展中起协同作用,为靶向EGFR和KDR生物治疗制剂在胃癌生物治疗中的应用及联合应用提供了一定的理论依据.

KDR基因遗传变异对贝伐珠单抗一线治疗晚期非小细胞肺癌患者临床疗效的影响

目的:本研究旨在探讨激酶插入区受体(KDR)基因遗传变异对贝伐珠单抗联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者疗效的影响。方法:本研究纳入135例一线接受贝伐珠单抗治疗的NSCLC患者,收集外周血及活检癌组织标本分别用来进行基因分型及表达测定。多态性位点的基因型和其他变量的相关性通过logistic回归模型进行分析。基因型和预后的单变量分析用KaplanMeier生存分析方法,并通过Cox风险比例模型对其他变量进行校正。结果:在KDR的标记多态性位点中,只发现了V297I位点的临床意义。V297I位点位于该基因的编码区,在研究人群的基因分布频率为:CC型99例(73.33%),CT型33例(24.44%),TT型3例(2.23%),最小等位基因频率为0.14,三种基因型分布频率符合哈迪温伯格平衡(P=0.898)。后期比较将TT型和CT型患者合并,对不同基因型患者进行疗效分析发现:CT/TT基因型患者和野生型CC型患者的客观缓解率(ORR)分别为41.67%和47.47%(P=0.549)。CT/TT和CC基因型患者的中位无进展生存期(m PFS)分别为6.2和8.6个月,差异具有统计学意义(P=0.003)。在总生存期(OS)方面,两种基因型患者的中位总生存期(m OS)分别为18.9和21.5个月,差异具有统计学意义(P=0.017)。对无进展生存期(PFS)构建多变量的Cox模型校正之后发现CT/TT基因型对PFS的影响仍然具有统计学意义(OR=1.95,P=0.019)。另外,进一步在68例癌组织标本的表达分析中发现,CT/TT基因型患者相对于野生型的CC型患者,癌组织中KDR的表达明显较高,且差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:在接受贝伐珠单抗治疗的非小细胞肺癌患者中,KDR基因V297I位点可能通过影响KDR基因的表达从而影响贝伐珠单抗一线治疗非小细胞肺癌患者的疗效。

VEGF反义寡核苷酸对胆囊癌细胞VEGF，Flt-1及KDR mRNA表达和VEGF蛋白分泌的影响

目的:体外研究Oligofectamine介导的VEGF反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)转染对人胆囊癌GBC-SD细胞VEGF,Flt-1及KDR mRNA表达和VEGF蛋白分泌的影响.方法:运用Oligofectamine介导的VEGF反义寡核苷酸(ASODN)和错义寡核苷酸(Scrambled Oligodeoxynucleotide,SODN)转染人胆囊癌细胞GBC-SD,半定量RT-PCR检测转染后各组细胞不同时间的VEGF,Flt-1及KDR mRNA表达变化,ELISA测定转染后各组细胞培养上清液VEGF蛋白浓度.结果:半定量RT-PCR发现ASODN组及ASODN+Oligofectamine组24,48,72,96 h VEGF(ASODN组VEGF165:0.686±0.033,0.569±0.049,0.489±0.036,0.716±0.017;ASODN组VEGF121:0.462±0.046,0.338±0.034,0.219±0.022,0.471±0.038;ASODN+Oligofectamine组VEGF165:0.601±0.021,0.465±0.042,0.416±0.023,0.662±0.035:ASODN+Oligofectamine组VEGF121:0.408±0.014,0.286±0.019,0.157±0.021,0.418±0.037)、Flt-1(ASODN组:0.694±0.019,0.562±0.045,0.435±0.042,0.724±0.026;ASODN+Oligofectamine组:0.609±0.018,0.442±0.049,0.314±0.015,0.614±0.029)及KDR(ASODN组:0.667±0.063,0.490±0.033,0.301±0.029,0.665±0.068;ASODN+Oligofectamine组:0.523±0.048,0.432±0.027,0.218±0.036,0.524±0.037) mRNA的表达显著低于Control组(P<0.05),且ASODN+Oligofectamine的抑制作用比ASODN强(P>0.05).ELISA测定结果显示ASODN组(281.26±18.62,526.44±34.95,791.13±20.99)及ASODN+Oligofectamine组(250.7±14.57,506.09±19.14,711.79±19.91)24,48,72 h VEGF蛋白的分泌浓度均显著低于Control组(394.23±16.26,711.6±26.21,933.85±28.65)(P<0.05),且ASODN+Oligofectamine的抑制作用比ASODN强(P>0.05).结论:Oligofectamine介导的VEGF ASODN能抑制GBC-SD细胞VEGF,Flt-1及KDR mRNA表达和VEGF蛋白分泌.

KDR、MC2R和PCNA在产醛固酮腺瘤与肾上腺皮质增生病变中的表达和意义

目的：探讨激酶插入区受体（KDR）、促肾上腺皮质激素受体2（MC2R）和增殖细胞核抗原（PCNA）在产醛固酮腺瘤（APA）与肾上腺皮质增生（IHA）中的表达和意义。方法：应用免疫组织化学技术检测KDR、MC2R和PCNA在APA和IHA病变组织中（各40例）的表达情况。结果：APA组织中KDR、MC2R和PCNA的阳性表达率分别为40.0%、32.5%和85.0%;IHA组织中KDR、MC2R和PCNA的阳性表达率分别为65.0%、62.5%和77.5%;2种病变组织中,KDR、MC2R和PCNA的表达强度差异均有统计学意义（P〈0.05-P〈0.01）。结论：KDR、MC2R和PCNA在IHA病变的发生、发展中起重要作用,对于鉴别APA和IHA病变具有重要的参考意义。

肺腺癌A549细胞KDR基因沉默后对厄罗替尼敏感性的影响

目的研究激酶功能区受体(KDR)基因沉默对人肺腺癌A549细胞增殖和对化疗药物厄罗替尼敏感性的影响。方法设计合成KDR的si RNA序列,LipofectamineTM2000转染人A549细胞。RT-PCR和Western印迹检测KDR在干扰后m RNA和蛋白的表达情况,通过流式细胞仪检测细胞周期。MTT法和细胞克隆形成试验观察KDR基因沉默后A549细胞对厄罗替尼的敏感性。结果 KDR基因沉默48 h后,A549细胞的KDR基因和蛋白表达明显降低(P<0.05)。细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞数明显减少(P<0.05)。KDR基因沉默组细胞对厄罗替尼的敏感性显著性增强。结论 KDR特异性si RNA能显著沉默A549细胞KDR基因,抑制细胞增殖,并增强A549细胞对厄罗替尼的敏感性。

sEPCR、VEGF、MVD、KDR在早发型子痫前期胎盘中的表达

目的研究s EPCR、VEGF、MVD、KDR在早发型子痫前期胎盘中的表达情况。方法选取2016年3月至2017年4月我院收治的早发型子痫前期患者50例为研究对象,以同期入院体检的50例健康产妇为对照组,测定入组对象胎盘组织中可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(s EPCR)、血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘微血管密度(MVD)、含有激酶插入区的受体(KDR)及可溶性血管内皮生长因子受体(s Flt-1)水平,同时比较子痫前期病情轻度、中重度患者上述指标,分析PE患者s EPCR、VEGF、MVD、KDR及s Flt-1的相关性,评价上述指标联合诊断PE的效能。结果早发型组胎盘组织VEGF(30.25±1.87)%、MVD(37.11±1.54)条低于对照组(P<0.05),而其s EPCR(156.34±1.25)ng/m L、KDR(70.34±1.38)%、s Flt-1(80.32±1.67)%较对照组升高(P<0.05);重度子痫前期患者VEGF(30.18±1.30)%、MVD(36.20±1.31)条与轻度组比较明显降低,而s EPCR(154.22±1.05)%、KDR(71.20±1.66)%、s Flt-1(81.11±1.56)升高(P<0.05);s EPCR、VEGF、MVD、KDR联合诊断早发型PE患者灵敏度为98.05%,特异性为93.11%,准确度为96.20%,均高于上述指标单项诊断;相关分析显示子痫前期患者胎盘组织中VEGF、MVD与s Flt-1呈负相关(P<0.05)。结论s EPCR、VEGF、MVD、KDR在早发型子痫前期胎盘中呈异常表达,随病情加重VEGF、MVD表达降低,s EPCR、KDR表达增多,其中VEGF、MVD表达水平与s Flt-1高表达有关。

抗KDR单克隆抗体的制备

目的:研制针对肿瘤新生血管内皮细胞生长因子受体(KDR)的特异性单克隆抗体(mAb)。方法:以谷胱甘肽转硫酶耦联的KDR(GST-KDR)可溶性融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备分泌抗KDR mAb的杂交瘤细胞。结果:获得1株稳定分泌抗KDR mAb的杂交瘤细胞株,命名为3E9B2G11。结论:成功获得能分泌抗KDR mAb杂交瘤细胞,为以后将该mAb改造成小分子酪氨酸激酶抑制剂,使其能进入细胞内与受体KDR特异性结合并阻断血管内皮细胞生长因子的强大生物学功能奠定了重要基础。

VEGF及其受体KDR在老年宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其激酶插入区受体(KDR)在老年宫颈癌组织中的表达情况及其对该疾病诊断的临床意义。方法采用免疫组化SP法检测并比较宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasm,CIN)组织、早期宫颈癌(invasive carcinoma of cervix,ICC)组织及正常宫颈上皮(normal cervical epithelium,NCE)组织的VEGF和KDR的表达水平;同时采用CD34进行标记,检测组织的微血管密度(microvessel density,MVD),观察其与VEGF、KDR的关系。结果 (1)从NCE到CIN再到ICC,VEGF及KDR的表达阳性率逐渐升高,组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05);(2)与NCE组比较,采用CD34标记的ICC组和CIN组的MVD值均明显升高(P<0.05);(3)在CIN和ICC 2组中,MVD随着VEGF、KDR表达强度的增加而升高(P<0.05)。结论 VEGF及其受体KDR在老年宫颈癌组织中均有高表达,同时与组织的MVD呈正相关,为宫颈癌靶向治疗药物的筛查及临床辅助诊断与治疗提供了参考。