含胞嘧啶脱氨酶基因的靶向腺病毒载体的构建及应用

目的 建立癌胚抗原 (CEA )启动子驱动的含胞嘧啶脱氨酶基因 (CD )自杀基因的腺病毒载体AdCEACD ,使CD基因只能在CEA阳性的细胞中表达。方法 采用同源重组法在人胚肾细胞株 2 93细胞中重组腺病毒 ,用点杂交、PCR法进行鉴定 ,并进行纯化和滴度测定 ,分别感染CEA阳性和CEA阴性的细胞 ,采用MTT法检测感染细胞对 5 Fc的敏感性。结果 重组腺病毒中含有CEA基因及CD基因 ,纯化后滴度可以达到 5 .0× 10 11pfu/ml ,CEA阴性的Hela细胞感染AdCMVCD后对 5 Fc很敏感 ,而感染AdCEACD后不能被 5 Fc杀伤 ,与之相反 ,CEA阳性的Lovo细胞感染AdCMVCD和AdCEACD后有相似的表达活性 ,均对5 Fc敏感。AdCEACD/ 5 Fc系统有明显的“旁观者”效应。结论 本实验建立的CEA启动子驱动的含CD自杀基因的腺病毒载体AdCEACD ,能使CD基因专一性地在CEA阳性细胞中表达 ,有助于对CEA阳性的肿瘤细胞靶向性自杀基因治疗。

含胞嘧啶脱氨酶基因重组腺病毒体内抑瘤作用的研究

目的 :构建含胞嘧啶脱氨酶基因 (CD基因 )重组腺病毒AdE1CMVCD ,用自杀基因治疗系统AdE1CMVCD/5_氟胞嘧啶 (5_FC)对小鼠肺腺癌进行体内抑瘤作用的实验研究。方法 :建立T739小鼠肺腺癌荷瘤模型 ,瘤体内导入AdE1CMVCD ,腹腔注射5_FC ,观察各组小鼠瘤体和生存期差异以及瘤体组织切片病理变化。结果 :从实验中观察到AdE1CMVCD/5_FC系统对小鼠肺腺癌有明显的抑制生长作用 ,与对照组荷瘤小鼠相比 ,治疗组荷瘤小鼠生存期明显延长。结论 :AdE1CMVCD与5_FC联合在体内对肺癌有明显的抑制作用 。