微小RNA-3679与小鼠异种移植物肿瘤生长的关系研究

目的探讨微小RNA(miRNA)-3679对小鼠异种移植物(Hep3B)肿瘤生长影响的机制研究。方法将裸鼠随机分为3组,空白对照组(NC组),抑制miRNA-3679组(CT1组)及同时转染miRNA-3679 inhibitor与si-ZADH2组(CT2组);裸鼠成瘤实验检测各组瘤体质量及体积;实时荧光定量PCR(qPCR)检测相关基因表达;蛋白质免疫印迹检测瘤组织中靶蛋白及相关凋亡蛋白;免疫组化染色测定Caspase-3的表达;Ki-67免疫组织化学染色分析细胞增殖情况。结果28 d,CT1组肿瘤体积及质量均小于NC组(P<0.01);CT1组及CT2组中miRNA-3679的表达低于NC组(P<0.01),CT1组中的ZADH2表达高于NC组及CT2组(P<0.001);蛋白质免疫印迹检测提示,CT1组中的ZADH2蛋白表达升高(P<0.001),CT2组ZADH2蛋白表达低于CT1组(P<0.001);CT1组Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达高于NC组和CT2组(P<0.05),但CT1组Bcl-2蛋白表达低于NC组和CT2组(P<0.05);免疫组织化学染色显示,CT1组Caspase-3的表达高于NC组和CT2组(P<0.05);Ki-67免疫组织化学染色提示,CT1组肿瘤细胞数量少于NC组和CT2组(P<0.01)。结论miRNA-3679可促进小鼠异种移植物(Hep3B)肿瘤的发生与发展,且miRNA-3679可通过靶基因ZADH2发挥作用。

miRNA-3679抑制下游ZADH2-靶基因促进肝癌细胞增殖的机制研究

目的 寻找miRNA-3679与肝癌细胞系之间的关系,并验证其下游靶基因。方法 通过PCR检测miRNA-3679在肝癌细胞系中的表达,使用ENCORI、miRDB、TargetScan数据库预测miRNA-3679的下游靶基因;通过qPCR检测(空白对照组、转染组及转染阴性对照组)转染靶基因表达水平确定靶基因为含锌结合醇脱氢酶结构域-2(ZADH2);Western blot检测转染miRNA-3679抑制剂后ZADH2蛋白表达;EdU染色检测转染miRNA-3679抑制剂及同时转染miRNA-3679、ZADH2抑制剂后对细胞增殖的影响;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 miRNA-3679在肝癌细胞系中的表达水平均高于正常人肝细胞株(P<0.05),数据库中共筛选出6个在肝癌中下调的基因:GLUD1、B3GAT1、SLC46A3、MAP2K3、ATF5、ZADH2;qPCR检测转染miRNA-3679抑制剂后ZADH2表达升高(P<0.01);转染miR-3679抑制剂后荧光素酶活性升高(P<0.01);Western blot检测miR-3679 inhibitor组中的ZADH2蛋白表达高于NC组(P<0.01);EdU分析检测miRNA-3679 inhibitor组阳性细胞数低于NC组及Inhibitor NC组(P<0.05);miR-3679inhibitor+si-ZADH2组克隆计数多于miR-3679 inhibitor组(P<0.01);流式细胞术检测提示miR-3679 inhibitor+si-ZADH2组细胞凋亡数目低于miR-3679 inhibitor组(P<0.01)。结论 miRNA-3679在肝癌细胞中显著高表达,可直接作用于ZADH2基因并影响其表达,且通过抑制ZADH2发挥促进HCC细胞的增殖及抑制其凋亡。