含CpG基序的寡聚脱氧核糖核苷酸辅助乙肝疫苗对孕鼠和仔鼠的免疫效果

目的 观察不同剂量CpG 182 6联合乙肝疫苗注射孕鼠后 ,对孕鼠本身及其仔鼠的特异性免疫效果。方法 分别用不同剂量 (10、2 0、4 0 μg/只 )CpG 182 6作为乙肝疫苗佐剂辅助免疫孕鼠 ,ELISA方法检测孕鼠和仔鼠血清乙肝表面抗体 (HBsAb)水平 ,并观察仔鼠存活数量和生长发育指标 (体质量、身长、胎脑和胎仔体质量系数 )变化。结果 给孕鼠注射CpG 182 6 +乙肝疫苗或单纯乙肝疫苗后 ,孕鼠血清HBsAb水平总是高于仔鼠水平 (P <0 .0 1) ,但孕鼠与仔鼠血清HBsAb水平间无相关性存在 (r =0 .379 P >0 .0 5 ) ;CpG 182 6 +乙肝疫苗免疫孕鼠后 ,2 0 μg/只剂量组孕鼠和仔鼠血清HBsAb含量均高于 10、4 0 μg/只剂量组 ,单纯乙肝疫苗组及空白对照组 (P <0 .0 5 ) ,但仔鼠存活数量及体质量、身长、胎脑和胎仔体质量系数等生长发育指标间均无显著差异 (P均>0 .0 5 )。结论 CpG 182 6 (2 0 μg/只 )联合乙肝疫苗免疫孕鼠时 ,既能显著提高孕鼠及其仔鼠血清特异性免疫抗体水平 ,又不对仔鼠生长发育造成不良影响 ,是一种在妊娠期即可刺激免疫系统不成熟个体免疫活性的理想免疫佐剂。

含CpG基序的寡聚脱氧核苷酸佐剂对乙型肝炎疫苗免疫效果的影响

为提高乙型肝炎疫苗的免疫原性和机体对疫苗的免疫反应性,开发新型疫苗佐剂已成为国内外学者研究的热点。大量的研究表明,CpC基序的寡聚脱氧核苷酸佐剂(CpC ODN)是很有前途的细胞免疫和体液免疫增强剂,与铝佐剂有协同作用,并可克服铝佐剂对细胞免疫的抑制;CpC ODN作为佐剂稳定性较好,对人体安全,尤其是与Al(OH)_3联合作为HBsAg疫苗佐剂时,双剂接种就可以获得很理想的免疫效果,并且价廉,有利于提高发展中国家的乙型肝炎疫苗接种率。本文着重对含有一个或数个非甲基化CpC ODN的研究进展作了综述。

应用含CpG基序的寡脱氧核苷酸增强HBsAg诱导健康小鼠抗-HBs产生的实验研究

目的探讨人工合成的含CpG基序的寡脱氧核酸(ODN)作为佐剂,对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)诱导普通小鼠产生体液免疫应答的影响。方法以血源HBsAg为接种疫苗,人工合成含CpG基序的硫代磷酸寡脱氧核苷酸作为佐剂,以BALB/e小鼠作为实验动物进行免疫接种;采用ELISA方法检测抗HBs,判断免疫小鼠的体液免疫功能。结果联合CpG ODA组在抗HBs转化率、出现时间、滴度峰值方面优于单用HBsAg组,CpG ODN的佐剂效果接近完全弗氏佐剂,而单用CpG,ODN则不能诱导抗HBs的产生。结论 CpG ODN作为佐剂可增强HBsAg诱导BALB/C小鼠产生体液免疫应答。

含有CpG基序的寡聚脱氧核苷酸2395对鼠巨细胞病毒肝炎新生小鼠的治疗作用

目的 研究含有CpG基序的寡聚脱氧核苷酸2395（CpG ODN2395）对鼠巨细胞病毒（MCMV）肝炎新生小鼠的治疗作用及相关机制.方法 SPF级BALB/c新生小鼠,按窝随机分为对照组、病毒组和治疗组.对照组：腹腔注射9 g/L盐水20×10-6L隔日1次;病毒组：腹腔注射MCMV（病毒致半数细胞感染量TCID50=108.31/L）20×10-6L1次,从接种MCMV当日起隔日腹腔注射9 g/L盐水20×10-6L;CpG治疗组：腹腔注射MCMV（TCID50=108.31/L） 20×10-6L1次,从接种MCMV当日起隔日腹腔注射CpG ODN2395 20 mg/kg.观测小鼠的生长发育情况.HE染色观察肝脏病理,酶联免疫吸附试验检测小鼠血清ALT、IFN-α,PCR法检测肝脏MCMV DNA,反转录（RT）-PCR法检测肝脏IFN-α mRNA,Wester blot法检测肝脏的Toll样受体9（TLR9）和衔接蛋白-髓样分化标志物88 （MyD88）的表达水平.应用SPSS 16.0软件进行分析.结果 1.病毒组小鼠生长发育落后,体质量低于对照组和治疗组,7d、14 d时差异有统计学意义（F=18.919、25.543,P均＜0.05）;治疗组发育介于对照组和病毒组之间,体质量均低于对照组,在7d时差异有统计学意义（t=3.187,P ＜0.05）.2.病毒组小鼠血清ALT高于对照组和治疗组,治疗组血清ALT高于对照组,差异均有统计学意义（F=11.407、11.791、154.565,P均＜0.05）.3.肝组织病理改变：病毒组肝组织病变活动性积分（HAI）值在第3天达高峰,以后逐渐下降;治疗组肝组织HAI均值也在第3天达高峰,但肝损害明显轻于病毒组,以后肝病变逐渐减轻,在第7天和第14天时HAI均值都显著低于病毒组.4.病毒组和治疗组小鼠3d、7d和14 d时肝脏MCMV DNAPCR检测阳性,3个时间点治疗组MCMV DNA负荷量均低于病毒组.5.病毒组和治疗组的3d时血清IFN-α达高峰,7d、14 d时渐下降;治疗组的血清IFN-α高于病毒组和对照组.6.病毒组和治疗组肝脏IFN-α mRNA表达水平在3d时增加,7d时达高峰,14 d时下降,3个时间点表达水平差异有统计学意义.治疗组IFN-αmRNA表达水平高于病毒组和对照组,病毒组高于对照组.7.治疗组肝脏TLR9表达水平高于病毒组和对照组,病毒组高于对照组.治疗组肝脏MyD88表达水平高于病毒组和对照组,病毒组高于对照组.结论 CpGODN2395可能提高TLR9的表达水平,通过MyD88依赖途径激活IFN-α的分泌,抑制MCMV的复制,减轻新生小鼠MCMV肝炎肝功能损害,改善肝脏病变和降低肝脏病毒负荷量具有抗MCMV的活性作用.

CpG 684-乙肝疫苗食蟹猴重复免疫安全性评价

目的对食蟹猴重复给予含CpG基序寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)佐剂的乙型肝炎病毒疫苗,考察该疫苗的非临床安全性,为临床设计人用剂量及监测临床不良反应提供参考依据。方法 30只食蟹猴随机分为3组:溶媒对照组、CpG 684-乙肝疫苗50μg和500μg[含50μg或500μg CpG 684+10μg乙型肝炎表面抗原(HBsAg)]组,每组雌雄各半。在第0,2,4和6周各im免疫1次,试验期间观察食蟹猴的症状和注射部位刺激性,测定体质量、摄食量、体温和心电图,进行血液学、血清生化检测、血清中白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、抗核抗体、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)水平检测;末次免疫后3 d和4周分别对每组部分食蟹猴进行剖检,脏器称重,并采集组织样本进行组织病理学检查。结果各组食蟹猴未见异常症状、注射部位肉眼观察未见异常,CpG 500μg组雌性食蟹猴外周血单核细胞数量增加(P<0.01)。各疫苗组均可诱导食蟹猴产生一定水平的HBsAb。食蟹猴大体病理学检查未见与疫苗相关的异常变化。组织病理学检查发现,注射部位肌束间发生轻至中度炎症反应,免疫结束4周有部分恢复,未见其他与给予疫苗相关的组织病理学改变。其他检测指标均未见异常。结论 CpG 684-乙肝疫苗在给定剂量下多次免疫食蟹猴具有较好的安全性。

增强CpG免疫刺激作用途径的研究进展

CpG基序（CpG motifs）是指含有非甲基化的胞嘧啶（C）和鸟嘌呤（G）核苷酸核心的寡聚脱氧核苷酸（ODN）序列，又称为免疫刺激序列，一般为6个寡聚核苷酸。

Toll样受体9及其配体研究进展

哺乳动物的免疫系统通过模式识别受体来识别病原微生物,Toll样受体(TLR)9是主要的先天性免疫模式识别受体之一。TLR9的天然配体是病毒和细菌基因组中的非甲基化胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸序列(CpG),实验研究中多采用人工合成的具有抗核酶降解作用的类似物——含有CpG基序的寡聚脱氧核苷酸。TLR9被其配体激动后可使机体产生强烈的Th1型优势免疫应答,在变态反应性疾病、感染性疾病和癌症方面的治疗中有广泛的应用前景。

TLR9诱导产生的Ⅰ型IFN对实验性大肠炎的抑制作用

细菌DNA及其来源的具有免疫刺激效应的寡聚核苷酸(ISS-ODN)(含有非甲基化CpG基序)是TLR9的配体.ISS-ODN能够刺激Th1型细胞因子的产生,上调抗原提呈细胞表达共刺激分子,增强宿主对入侵病原微生物的防御功能.ISS-ODN能够防止或明显减轻CD4+T细胞依赖和CD4+T细胞非依赖实验性大肠炎的发生或炎症程度,但这种保护作用是短暂的,不具有免疫记忆效应,表明ISS-ODN介导的抗实验性大肠炎效应是天然免疫应答.通过T细胞和B细胞缺陷的SCID和RAG-/-小鼠,发现ISS-ODN对RAG-/-小鼠发生实验性大肠炎具有保护机制,而这种效应主要是通过ISS-ODN活化TLR9信号通路产生的Ⅰ型IFN来发挥作用.