微RNA-454-3p、FERM结构域蛋白6在乳腺癌组织中的表达水平及临床意义

目的探讨微RNA(miR)-454-3p、FERM结构域蛋白6(FRMD6)在乳腺癌组织中的表达水平以及临床意义。方法选取唐山市人民医院2016年12月至2018年12月住院手术的150例乳腺癌病人术中切除的乳腺癌组织标本及癌旁组织标本;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-454-3p、FRMD6在组织中的水平;采用Kaplan-Meier法分析miR-454-3p、FRMD6水平与乳腺癌病人预后的关系,并用log-rank法进行检验;Cox回归分析影响乳腺癌病人预后的因素。结果乳腺癌组织miR-454-3p水平(1.25±0.24)高于癌旁组织(0.99±0.22),FRMD6水平(0.79±0.19)低于癌旁组织(1.01±0.24),差异有统计学意义(P<0.05);癌组织中miR-454-3p、FRMD6水平与淋巴结转移、组织分化以及TNM分期有关(P<0.05);miR-454-3p高表达组和FRMD6低表达组病人3年累积生存率分别低于miR-454-3p低表达组和FRMD6高表达组病人(均P<0.05);miR-454-3p高表达、FRMD6低表达、TNM分期为Ⅲ/Ⅳ期、淋巴结转移是影响乳腺癌病人预后的危险因素(P<0.05)。结论miR-454-3p在乳腺癌组织中表达上调,FRMD6在乳腺癌组织中表达降低,二者与乳腺癌病人预后密切相关,有望成为临床上预测乳腺癌病人预后的生物性标志物。

N^(6)-甲基腺苷结合蛋白YTHDC2在肿瘤中的研究进展

N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)是真核生物RNA上最常见的可逆甲基化修饰,可影响相应RNA的加工和降解过程,进而调控细胞的生长、发育、分化和死亡等多种病理生理过程[1]。研究已明确,m^(6)A修饰是由甲基转移酶、去甲基转移酶和甲基结合蛋白(又称“redear”)共同调控的可逆修饰,其中甲基结合蛋白是m^(6)A修饰发挥生物学功能最重要的介导者[2]。

C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)介导庆大霉素所致大鼠急性肾损伤

目的探讨抗炎细胞因子C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)在庆大霉素所致急性肾损伤(AKI)中的作用。方法SD大鼠分为5组,对照组、模型组和3个实验组。模型组和实验组皮下注射庆大霉素400 mg/(kg·d),连续注射2 d,建立庆大霉素中毒性AKI动物模型;3个实验组大鼠在注射庆大霉素前2 d,分别给予(0.5、5、50)mg/kg的CTRP6腺病毒表达载体。苦味酸比色法检测肌酐(Cr)含量,紫外分光光度法检测血清尿素氮(BUN)含量,ELISA检测血清CTRP6的水平以及肾组织匀浆中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。Western blot法检测肾脏组织中CTRP6、NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)和caspase-1的表达。结果与对照组相比,模型组大鼠AKI指标血清BUN和Cr水平较对照组显著增高,炎症因子IL-1β和TNF-α的分泌量以及NLRP3和caspase-1蛋白表达水平也显著增加。与模型组相比,实验组大鼠血清BUN和Cr水平降低,IL-1β和TNF-α的分泌减少,NLRP3和caspase-1的表达水平下降。随着注射CTRP6腺病毒表达载体注射剂量的增加,抑制效果逐渐增强。结论 CTRP6以剂量依赖的方式减弱庆大霉素所致的大鼠急性肾功能损伤。

NLRP6在抗细菌感染免疫中的作用研究进展

含热蛋白结构域的核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白6(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 6,NLRP6)是宿主固有免疫重要的胞内模式识别受体之一,参与机体感染、炎症、肿瘤和代谢性疾病的调节。它可通过感知细菌、病毒、真菌和寄生虫等病原生物及其产物,如革兰氏阳性菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)和病毒双链RNA,调节机体抗感染免疫效应,减弱或增强宿主的抵抗力,从而影响感染的转归。本文就NLRP6的结构与功能及其在抗细菌感染免疫中的作用研究作综述。

多梳蛋白4与含FERM结构域蛋白4A在胃癌组织中的表达及与意义

目的:探讨胃癌组织中多梳蛋白4(Cbx4)和含FERM结构域蛋白4A(FRMD4A)表达及其与胃癌患者临床病理参数及预后的关系。方法:收集2010年2月-2013年11月收治的112例胃癌患者的手术标本(癌组织及癌旁组织)及临床病理资料,用qRT-PCR和免疫组化法中检测标本中Cbx4、FRMD4A mRNA与蛋白表达;分析胃癌组织Cbx4和FRMD4A蛋白表达水平与临床病理参数及生存率的关系,并分析影响胃癌预后的因素。结果:与癌旁正常组织比较,胃癌组织中Cbx4和FRMD4A mRNA与蛋白表达水平均明显升高(均P<0.05)。Cbx4及FRMD4A蛋白表达水平与胃癌患者T分期、N分期、分化程度及远处转移明显有关(均P<0.05);Cbx4、FRMD4A蛋白阳性表达组胃癌患者5年生存率均明显低于各自阴性表达组患者(χ^2=15.42,P=0.000;χ^2=21.55,P=0.000)。Cox多因素分析显示,Cbx4(HR=2.754,95%CI=1.827~4.151,P=0.000)和FRMD4A(HR=3.129,95%CI=2.282~4.290,P=0.000)蛋白表达水平以及T分期(HR=1.432,95%CI=1.241~1.652,P=0.005)、远处转移(HR=1.257,95%CI=1.208~1.308,P=0.032)是影响胃癌患者预后的独立危险因素。结论:Cbx4及FRMD4A在胃癌组织中高表达,且与患者的不良临床病理特征及预后密切相关,可能对胃癌病情评估及预后判断有一定意义。

敲低IL-33下调炎症因子和NLRP3表达抑制哮喘小鼠炎症反应

目的探讨白细胞介素33(IL-33)对哮喘小鼠炎症反应的调控机制。方法利用10μg/mL脂多糖(LPS)构建小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSC)的体外细胞炎症模型,根据是否转染IL-33的小干扰RNA(si-IL-33)质粒和过表达(IL-33-OE)质粒,将细胞分成si-IL-33组,IL-33-OE组和模型组。实时荧光定量PCR检测IL-33、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、IL-1β和IL-6的信使RNA(mRNA)表达水平。钙离子荧光探针检测试剂盒(Fluo-3 AM)检测钙离子含量,JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位变化。利用腹腔注射致敏剂和激发剂的方法建立小鼠哮喘模型,根据处理方案的不同,将哮喘小鼠分成si-IL-33组、IL-33-OE组和模型组,每组5只。ELISA试剂盒检测小鼠血清IL-1β、IL-6和NLRP3含量,HE染色和Masson染色检测肺组织的病变情况。结果与模型组相比,si-IL-33组的IL-33、NLRP3、IL-1β和IL-6的mRNA表达量均降低,IL-33-OE组的IL-33、NLRP3、IL-1β和IL-6的mRNA表达量增加。BMMSC中钙离子荧光降低,而IL-33-OE组中钙离子荧光升高。si-IL-33组细胞线粒体中JC-1以聚合物形式存在,呈明亮的红色荧光,细胞中的绿色荧光非常弱;说明si-IL-33组细胞线粒体稳定,线粒体功能尚在。使用IL-33-OE质粒处理使线粒体膜电位下降后,JC-1不能以聚合物形式存在于线粒体基质中,此时线粒体内红色荧光强度显著降低,而细胞质中的绿色荧光显著增强。si-IL-33组小鼠血清中IL-1β、IL-6、NLRP3的含量明显降低,而IL-33-OE组小鼠血清中IL-1β、IL-6、NLRP3的含量明显升高。si-IL-33组几乎未见炎细胞浸润,炎症缓解,上皮细胞正常。si-IL-33组肺组织的纤维增生部分趋于正常。与模型组相比,si-IL-33组的支气管壁总面积(WAt)/支气管基底膜周径(Pbm)和气管壁平滑肌面积(WAm)/Pbm降低,IL-33-OE组的WAt/Pbm和WAm/Pbm增加。结论敲低IL-33通过下调NLRP3、IL-1β、IL-6表达抑制哮喘小鼠的炎症反应。

下调miR-3613-5p通过靶向FRMD6调控肾癌细胞增殖和细胞周期

目的探讨下调miR-3613-5p通过靶向含FERM结构域蛋白6(FRMD6)调控肾癌细胞增殖和细胞周期的分子机制。方法以OncoLnc预后分析数据库分析miR-3613-5p表达水平与肾癌患者预后的关系。用qPCR检测肾癌细胞株(A498、Caki-1、OS-RC-2、ACHN)和正常肾小管上皮细胞HK-2中miR-3613-5p的表达水平。分别将miR-3613-5p抑制物和阴性对照质粒(si-miRCon)转染至Caki-1细胞,分为si-miR-3613-5p组和si-miR-Con组。用CCK-8法和PI染色流式细胞术分别检测miR-3613-5p抑制物对Caki-1细胞增殖和细胞周期的影响。qPCR和Western blotting检测Caki-1细胞中FRMD6 mRNA和蛋白的表达。Western blotting检测AKT/MAPK信号通路蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-3613-5p和FRMD6的靶向关系。结果与miR-3613-5p表达较高的肾癌患者相比,miR-3613-5p低表达肾癌患者的生存率较高(P<0.01)。与HK-2细胞相比,miR-3613-5p在肾癌细胞株中高表达(均P<0.05),Caki-1细胞中miR-3613-5p表达最高(P<0.01)。与si-miR-Con组相比,si-miR-3613-5p组Caki-1细胞增殖能力显著被抑制(P<0.05),细胞周期进展被明显抑制(P<0.01),FRMD6基因表达明显增加(P<0.01),AKT/MAPK信号通路蛋白p-AKT1、p-MAPK3、CCND1表达明显降低。双荧光素酶报告基因实验证实FRMD6是miR-3613-5p的靶基因。结论下调miR-3613-5p表达能够明显促进FRMD6基因表达,进而抑制肾癌细胞增殖和细胞周期进展。

HPVE2/E6、CDCP1、RASSF2A甲基化水平与局部免疫、HR-HPV持续感染的关系

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)E2/E6、含CUB结构域蛋白1(CDCP1)、RAS相关结构域蛋白2A基因(RASSF2A)甲基化水平与宫颈病变级别、局部免疫的关联性。方法选取2018年1月至2020年6月海口市妇幼保健院诊治的158例高危型HPV(HR-HPV)感染患者作为研究对象。比较不同宫颈病变级别患者HPVE2/E6、CDCP1、RASSF2A甲基化水平,并给予重组人干扰素治疗,根据治疗效果分为转阴组(n=132)、持续感染组(n=26),比较两组HPVE2/E6、CDCP1mRNA、RASSF2AmRNA、局部免疫功能水平及其相关性,探讨HR-HPV持续感染影响因素,评估上述指标预测HR-HPV持续感染的效能。结果高级别宫颈上皮内病变(HSIL)患者CDCP1阳性率、RASSF2AmRNA、CDCP1mRNA高于无宫颈上皮内病变(NSIL)、低级别宫颈上皮内病变(LSIL)患者,HPVE2/E6、RASSF2AmRNA低于NSIL、LSIL患者(P<0.05)。HPVE2/E6、RASSF2AmRNA与CD4^(+)呈正相关,与CD8^(+)呈负相关;CDCP1mRNA与CD4^(+)呈负相关,与CD8^(+)呈正相关(P<0.05);HPVE2/E6、CDCP1mRNA、RASSF2AmRNA是HR-HPV持续感染的重要影响因素(P<0.05);HPVE2/E6+CDCP1mRNA+RASSF2AmRNA预测HR-HPV持续感染的AUC最大,为0.887。结论HPVE2/E6、CDCP1、RASSF2A甲基化水平与宫颈病变级别、局部免疫密切相关,联合应用对临床预测HR-HPV持续感染、评估宫颈病变级别、预防宫颈癌变发生具有较高的临床应用价值。

青藤碱抑制NLRP3和下游致炎因子表达改善佐剂性关节炎大鼠关节炎症状

目的探讨青藤碱对佐剂性关节炎(AA)大鼠的抗炎作用及含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)的变化。方法Wistar大鼠随机分为对照组、AA模型组、(100、200、400)mg/kg青藤碱组和100 mg/kg雷公藤组,每组10只。除对照组外,其余均采用Freund完全佐剂建立AA模型。建模后12 d,对照组和模型组给予等量生理盐水,其余各组分别灌胃给予相应药物,每天1次,连续16 d。通过多发性关节炎和关节肿胀度评价AA大鼠关节情况,Western blot法检测滑膜组织NLRP3蛋白水平,免疫组织化学染色法检测滑膜组织NLRP3表达和分布;ELISA检测大鼠血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果与对照组比较,模型组多发性关节炎明显,关节肿胀度增加,青藤碱各治疗组和雷公藤组大鼠多发性关节炎和关节肿胀度明显降低;青藤碱各治疗组滑膜组织NLRP3蛋白表达减弱,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著下降。结论青藤碱通过抑制NLRP3和下游致炎因子表达改善AA大鼠关节炎症。

海蓬子皂苷甲调控SHP/STAT信号通路抗肝癌的研究

目的研究海蓬子皂苷甲(bigelovii A,BA)诱导细胞凋亡的作用及其机制。方法使用MTT实验检测BA对肿瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析BA对细胞凋亡的影响;Western blot分析p-STAT3、STAT3、p-STAT5、STAT5、SHP-1、SHP-2的表达。结果20和40μmol·L^-1 BA可诱导HepG2细胞发生凋亡,具有剂量依赖性。10、20和40μmol·L^-1 BA可抑制IL6诱导的STAT3和STAT5磷酸化,但酪氨酸磷酸酶抑制剂过钒酸钠可逆转该抑制作用,且20μmol·L^-1 BA能激活蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1和SHP-2。结论BA可能通过SHP-1/SHP-2和STAT3/STAT5通路诱导HepG2细胞凋亡。

柴芍六君颗粒配合经肠镜植入益生菌治疗溃疡性结肠炎临床观察

目的:基于NLRP-6探讨双歧杆菌三联活菌胶囊制剂经肠镜喷洒于右半结肠单次给药治疗溃疡性结肠炎的可行性及作用机理。方法:将36例溃疡性结肠炎患者随机分为两组各18例,治疗组口服柴芍六君颗粒配合经肠镜下植入益生菌,对照组给予口服美沙拉嗪颗粒剂,疗程为12周,观察肠镜下Baron评分、肠道菌群变化及NLRP-6表达变化。结果:两组总有效率相当,治疗组为83.3%,对照组为77.8%,无统计学差异(P﹥0.05);治疗前两组肠镜下Baron评分积分值分别为(5.30±1.46)、(5.15±1.51),治疗12周后为(3.35±1.37)、(3.73±1.71),差异有统计学意义(P﹤0.05),治疗后两组间比较无明显差异(P﹥0.05)。两组治疗12周后肠杆菌、肠球菌较治疗前减少,双歧杆菌、乳酸杆菌增多,有统计学差异;治疗后两组间比较有统计学差异(P﹤0.05)。治疗后两组NLRP-6基因及免疫组化阳性细胞表达数均降低,治疗后组内及组间比较有统计学差异(P﹤0.05)。结论:口服柴芍六君颗粒配合经肠镜下植入益生菌可增加优势菌群(双歧杆菌、乳酸杆菌),减少致病菌群(肠杆菌、肠球菌),调节NLRP-6基因表达,从而有效治疗溃疡性结肠炎。

猪CISH基因过表达对IL-6和TNF-α基因mRNA的表达调控研究

为了分析猪细胞因子诱导的含SH2结构域蛋白(CISH)基因对白细胞介素6(IL-6)和α肿瘤坏死因子(TNF-α)等基因表达的调控,深入研究CISH基因的生物学功能,试验采用猪CISH基因过表达质粒pcDNA-CISH瞬时转染PK-15细胞,利用Real-time PCR技术分析了CISH过表达对相关基因表达量的影响。结果表明:在PK-15细胞中,CISH基因过表达并没有引起TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α等基因相对表达量的显著改变;细菌脂多糖(LPS)刺激PK-15细胞后,IL-6、TNF-α和TLR4等基因的相对表达量极显著上调(P<0.01);LPS刺激CISH基因过表达的PK-15细胞后,IL-6基因的相对表达量显著上调(P<0.05)。说明在LPS的刺激下,CISH过表达可以上调IL-6基因的相对表达量。

参芪降糖胶囊联合地特胰岛素治疗妊娠糖尿病的临床研究

目的探讨参芪降糖胶囊联合地特胰岛素注射液治疗妊娠糖尿病的临床疗效。方法选取2022年2月—2024年1月在天津北大医疗海洋石油医院就诊的83例妊娠糖尿病患者,按随机数字表法将所有患者分为对照组(41例)和治疗组(42例)。对照组每日晚间皮下注射地特胰岛素注射液,1次/d,初始剂量10 UI/次,根据个体需要调整剂量。治疗组在对照组基础上口服参芪降糖胶囊,3粒/次,3次/d。两组患者持续治疗3个月。比较总有效率、血糖指标达标时间、血清炎症因子。结果治疗后,治疗组的总有效率为95.24%,对照组的总有效率为80.49%,组间比较差异显著(P<0.05)。治疗后,治疗组空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、糖化血红蛋白(HbA1c)达标时间均短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组的空腹胰岛素(FINS)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)明显升高,胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)明显降低(P<0.05),且治疗组的FINS、HOMA-β明显高于对照组,HOMA-IR明显低于对照组(P<0.05)。治疗后,治疗组的血清亮氨酸丰富α2-糖蛋白1(LRG1)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、生长停滞特异性蛋白6(GAS6)水平显著降低(P<0.05),且治疗组的血清LRG1、NLRP3、GAS6水平均显著低于对照组(P<0.05)。结论参芪降糖胶囊联合地特胰岛素注射液可提高妊娠糖尿病的临床疗效,改善血糖和胰岛素功能,降低炎症反应。

ZC3H13和m6a甲基转移酶WTAP在结肠癌中的表达水平及与预后的关系

目的探讨锌指含CCCH结构域蛋白13(ZC3H13)、N6-甲基腺苷(m6a)甲基转移酶肾母细胞瘤1相关蛋白(WTAP)在结肠癌患者组织中的表达情况及与患者预后的关系。方法选取2017年1月-2019年6月在芜湖市中医医院手术治疗的结肠癌患者80例为研究对象,并在术中收集患者癌组织标本及癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法观察结肠癌组织中ZC3H13、WTAP表达情况,Western blot法检测组织中ZC3H13、WTAP表达水平;收集患者临床病理参数并对患者进行3年随访,Pearson法分析ZC3H13与WTAP表达的相关性;利用Kaplan-Meier法绘制生存曲线;采用多因素Cox回归风险模型分析结肠癌患者的预后影响因素。结果结肠癌患者癌组织WTAP表达水平高于癌旁组织[(1.66±0.23)vs.(0.58±0.17)],ZC3H13表达水平低于癌旁组织[(0.45±0.09)vs.(1.04±0.22)],差异均有统计学意义(t=33.775、22.201,P均<0.05);结肠癌组织中ZC3H13和WTAP的表达水平成负相关(r=-0.615,P<0.05);结肠癌组织中ZC3H13、WTAP蛋白表达与远处转移、临床分期、分化程度、浸润深度有关(P<0.05);Kaplan-Meier分析结果显示,WTAP阳性表达患者3年累积生存率48.33%(29/60)显著低于阴性表达80.00%(16/20),差异有统计学意义(Log rankχ^(2)=6.219,P=0.013);ZC3H13阳性表达患者3年累积生存率83.33%(15/18)显著高于阴性表达患者48.39%(30/62),差异有统计学意义(Log rankχ^(2)=6.697,P=0.010);多因素Cox回归分析结果显示WTAP阳性、ZC3H13阴性、年龄(>60岁)、淋巴结转移(N2)、远处转移、临床分期(Ⅲ+Ⅳ)、浸润深度(T3+T4)均是影响患者预后的危险因素(P<0.05)。结论ZC3H13在结肠癌患者癌组织中表达降低,WTAP表达升高,二者表达水平与结肠癌患者临床特征及预后关系密切。