金不换水提取物与抗菌药联合对含NDM-1不动杆菌的体外作用研究

本试验旨在探讨金不换水提取物与抗菌药联合对含新德里金属β-内酰胺酶-1(New Delhi metallo-β-lactamase-1,NDM-1)基因不动杆菌传代的体外抑菌活性,为金不换的综合利用提供参考依据。试验采用二倍微量稀释法体外分别检测金不换水提取物与抗菌药对受试菌的最小抑菌浓度(MIC),并以亚抑菌浓度(即1/2 MIC)的金不换水提取物与抗菌药联合作用对含NDM-1不动杆菌进行传代。结果显示,金不换水提取物的MIC为0.25g/mL,以0.125g/mL的金不换水提取物与头孢曲松钠、阿莫西林、头孢噻肟、痢菌净、磺胺间甲氧嘧啶、头孢他啶、头孢噻呋钠、美罗培南8种抗菌药联合作用传代后MIC明显降低。综上所述,金不换水提取物部分联合抗菌药诱导耐药细菌体外抗菌活性明显增强,对含NDM-1的不动杆菌具有一定的抑菌作用。

鲍曼不动杆菌bla_(NDM-1)基因序列分析及表达

目的研究NDM-1鲍曼不动杆菌厦门分离株耐药性产生的分子机制。方法 Vitek32测定耐药谱。根据Gen-Bank发表blaNDM-1基因序列设计合成引物,利用PCR技术扩增NDM-1鲍曼不动杆菌的blaNDM-1结构基因及其上下游调控序列片段,连接T载体,转化至大肠杆菌E.coli DH5α,序列测定并进行BLAST分析比对。测定始发菌株与重组菌株对美洛培南的最小抑菌浓度。结果药敏试验结果显示,该菌株对碳青霉烯类及β-内酰胺类抗生素耐药。NDM-1鲍曼不动杆菌厦门分离株blaNDM-1基因与HK-01同源性为100%;与KP-05-506相比,在blaNDM-1和trpF之间有24bp的插入。美洛培南最小抑菌浓度测定结果表明,重组菌株E.coli DH5α(pMD18-T::blaNDM-1)MIC值比始发菌株E.coli DH5α升高256倍。结论获得blaNDM-1基因的大肠杆菌能够表达碳青霉烯酶,该基因是碳青霉烯类抗生素耐药性产生的分子基础,该基因具有跨种水平传播的可能。

NDM-1基因在不动杆菌属菌株中的分布调查

目的调查NDM-1基因在不动杆菌属菌株中的分布情况。方法收集亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌25株、非鲍曼不动杆菌5株(分别为洛菲不动杆菌3株和琼氏不动杆菌2株)。采用改良Hodge试验及双纸片协同试验进行碳青霉烯酶表型筛选;PCR和DNA测序方法检测碳青霉烯酶基因;接合试验探讨耐药基因的可传递性;PFGE调查菌株的同源性。结果25株鲍曼不动杆菌改良Hodge试验阳性10株,金属酶表型试验均阴性,均检出OXA-23-like基因,未检出NDM-1基因;5株非鲍曼不动杆菌金属酶表型试验均阳性,均携带NDM-1基因,改良Hodge试验均阴性;PFGE显示鲍曼不动杆菌同源性较高,主要为A克隆株,而NDM-1阳性菌株不具同源性。NDM-1阳性菌株接合试验未获成功。结论本院碳青霉烯类耐药不动杆菌属菌株中NDM-1基因分布在非鲍曼不动杆菌中,且为散发。

北京地区医院污水中产NDM-1不动杆菌检测和抗生素敏感性分析

目的调查北京地区医院污水中含有NDM-1阳性的不动杆菌及耐药性情况。方法从北京多家医院采集污水标本,通过生化鉴定和16S rRNA测序进行病原分离鉴定;利用PCR技术对分离的病原进行bla NDM-1基因的鉴定;利用Sensititre药敏鉴定仪对NDM-1阳性菌进行抗生素敏感性分析。结果从医院污水中检出20株NDM-1阳性不动杆菌;所有菌对头孢类抗菌素、头孢西丁以及替卡西林和氨苄西林耐药率达到100%,有85%的菌对亚胺培南耐药。结论北京地区污水中产NDM-1阳性菌分离率较高,且主要为不动杆菌,其表现出多重耐药的特点,医院污水可能是NDM-1阳性菌存在的主要场所之一。

浙江省首次发现ST20型NDM-1鲍曼不动杆菌

目的对浙江省不同地区上送的分离株进行NDM-1基因筛检,以了解NDM-1基因携带菌存在现状。方法应用定量PCR及PCR分别对菌株进行NDM-1基因筛检、MLST分型及其他耐药基因检测;使用VITEK 2仪器测试MIC耐药表型;运用改良Hodge实验及EDTA-增强协同确认试验检测碳青霉烯酶表型。结果经对1 617株菌筛检,仅从1株ST20型鲍曼不动杆菌中检出NDM-1基因。该菌对Amikaci、Gentamicin、Tobramycin、Trimethoprim/Sulfa敏感,而对其他15种药物均显示耐药,另携带OXA-23、SPM,CARB,TEM,aadA1,AmpC,aphA1,OXA-51耐药基因。结论浙江省首次检出NDM-1鲍曼不动杆菌,提示应加强该类菌株的监测检测力度。

2012年鲍氏不动杆菌的多药耐药性与NDM-1基因分析

目的检测2012年1—9月淄博市中心医院鲍氏不动杆菌耐药性及多药耐药菌株携带ND肛1基因，并与全国耐药性水平比较，评价医院严格控制抗菌药物使用的效果。方法选择2012年1—9月医院住院患者的痰液、脓液及血液等临床标本中分离出的251株鲍氏不动杆菌，采用VITEK-2Compact自动微生物鉴定系统检测鲍氏不动杆菌对抗菌药物的耐药性，并检测多药耐药菌是否携带NDM-1基因。结果251株鲍氏不动杆菌主要来自患者痰液和咽拭子，分别占53．78和19．52％；其对氨苄西林、头孢类抗菌药物耐药率达100．00％，对氨曲南、头孢曲松、环丙沙星、庆大霉素、头孢吡肟、氨苄西林／舒巴坦、磺胺甲嗯唑／甲氧苄啶、亚胺培南、妥布霉素、哌拉西林／他唑巴坦的耐药率为50．。0％～60．OO％，对头孢他啶、左氧氟沙星、阿米卡星耐药率为20．00％～40．00％；2012年医院严格按照《抗菌药物临床应用指导原则》和药敏试验结果用药，各季度鲍氏不动杆菌耐药率对氨苄西林、头孢替坦、头孢唑林、呋喃妥因一直保持100．00％高耐药率，其他抗菌药物在二季度略有降低，而到三季度降低明显，差异有统计学意义（x2=6．731，P〈0．05）；鲍氏不动杆菌多耐药菌均不携带NDM-1基因。结论淄博市中心医院严格按照《抗菌药物临床应用指导原则》和药敏试验结果用药，取得较好的治疗效果，鲍氏不动杆菌耐药率逐渐下降。

鲍曼不动杆菌临床分布及NDM-1阳性菌的耐药性

目的分析厦门市某医院2014—2016年检出的鲍曼不动杆菌的分布特征和耐药性,筛选新德里·梅塔洛1号(NDM-1)阳性鲍曼不动杆菌,并对其进行耐药性检测。方法回顾性收集该院2014年1月—2016年6月检出的全部鲍曼不动杆菌资料,对其分布特征及耐药情况等进行汇总分析。用PCR法筛选NDM-1阳性鲍曼不动杆菌,探讨其耐药性现状。结果该院培养出鲍曼不动杆菌的标本来源主要为痰液、分泌物、尿液;鲍曼不动杆菌分离率在G-菌中所占比例较高,仅次于大肠埃希菌、肺炎克雷伯杆菌和铜绿假单胞菌,且2014—2016各年细菌分离率所占比例无较大变化;分离出鲍曼不动杆菌较多的科室主要为神经医学中心、呼吸内科、骨科等,在2014—2016年内变迁较小;19种抗菌药物2014—2016年耐药性变迁较大的有头孢曲松、亚胺培南、复方新诺明和四环素;实验中共筛出4株NDM-1阳性鲍曼不动杆菌,对选取的16种抗菌药物耐药情况显示对替加环素耐药性较低,而对头孢类抗生素、氨苄西林、呋喃妥因等耐药性较高。结论 2014—2016年该院鲍曼不动杆菌感染现状仍较为严峻,已成为医院感染的主要致病菌之一,且对不同抗菌药物耐药率在2014—2016年内有所差异。经检测该院鲍曼不动杆菌中存在NDM-1阳性菌,其耐药形势更为严峻。

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌OXA和NDM-1耐药基因的研究

目的检测江苏盛泽医院耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的OXA和NDM-1耐药基因,分析耐碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制。方法采用改良Hodge试验检测30株耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌产酶情况;用PCR的方法检测OXA-23、OXA-24、VIM、IMP和NDM-1碳青霉烯酶耐药基因。结果 30株分离菌中25株菌改良Hodge试验阳性,22株携带OXA-23型碳青霉烯酶耐药基因,未扩增出NDM-1碳青霉烯酶耐药基因。结论本院耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的耐药机制主要是携带OXA-23型碳青霉烯酶基因。

染色体上同时携带bla_(NDM-1)和bla_(OXA-23)的鲍曼不动杆菌研究

目的探讨染色体上同时携带碳青霉烯酶基因bla_(NDM-1)和bla_(OXA-23)的鲍曼不动杆菌的分布特点,深入分析位于染色体上的bla_(NDM-1)和bla_(OXA-23)所在的遗传学环境。方法,通过NCBI库检索世界范围内所有染色体上同时携带bla_(NDM-1)和bla_(OXA-23)的鲍曼不动杆菌,通过生物信息学分析染色体中携带bla_(NDM-1)和bla_(OXA-23)的移动元件的遗传学特征。结果共收集到18例染色体上同时携带bla_(NDM-1)和bla_(OXA-23)的鲍曼不动杆菌,所有菌株都分离自人体,分离年份集中在近几年,主要分布在印度(83.3%,15/18),标本来源主要为呼吸道和血液标本,bla_(NDM-1)主要位于完整的Tn125结构中,bla_(OXA-23)3全部位于完整的Tn2006结构中,Tn2006可形成多个拷贝位于染色体中。结论近几年临床分离的位于染色体上同时携带bla_(NDM-1)和bla_(OXA-23)3的鲍曼不动杆菌数量明显增加,且都位于复合转座子中,bla_(OXA-23)3可形成多个拷贝,其未来的传播风险应引起临床重视。

利用蛋白质组学研究新德里金属β-内酰胺酶1对鲍曼不动杆菌的影响

【目的】比较临床分离的亲缘关系近的多药耐药鲍曼不动杆菌MDR-ZJ06(blaNDM-1–)和ABC3229(blaNDM-1+)的差异蛋白质组,以期发现新德里金属?-内酰胺酶1(New Delhimetallo-β-lactamase-1,NDM-1)对鲍曼不动杆菌生长代谢的影响。【方法】利用2-DE联合MALDI-TOF MS/MS技术鉴定差异表达蛋白,并在GO注析的基础上,对差异蛋白进行通路分析、功能分类和富集分析,并作出蛋白与蛋白相互作用网络。【结果】发现ABC3299相对于MDR-ZJ06有51个差异表达蛋白,其中11个蛋白表达上调,40个蛋白表达下调,并且这些差异蛋白主要涉及降低碳代谢、氨基酸代谢、脂肪酸代谢和细胞壁合成,增加铁离子转运系统形成。【结论】这个结果揭示了NDM-1可能是通过减缓细菌自身的代谢,增加自身铁的摄取使细菌机体系统地抵抗抗生素从而达到耐药。

NDM-1基因的克隆表达及生物信息学分析

目的克隆鲍曼不动杆菌blaNDM-1基因,对NDM-1进行生物信息学分析,表达并纯化重组NDM-1蛋白。方法 PCR扩增鲍曼不动杆菌NDM-1的blaNDM-1基因,克隆至pMAL-p2X质粒,构建重组原核表达质粒pMAL-p2X∶∶NDM-1,对NDM-1进行生物信息学分析。将重组表达质粒转化大肠杆菌Tb1,IPTG诱导表达,经亲和层析纯化重组蛋白MBP-NDM-1。结果重组表达质粒pMAL-p2X∶∶NDM-1经双酶切和测序证实构建正确;生物信息学分析表明,NDM-1的相对分子质量为28 487.86,等电点为5.89,1～28氨基酸为NDM-1的信号肽序列,与其他亚型金属β-内酰胺酶同源性很低;表达的重组蛋白相对分子质量约73 000,主要以可溶形式表达;纯化后的重组蛋白浓度为1.72 mg/ml。结论表达并纯化了可溶性重组蛋白MBP-NDM-1,为后续NDM-1活性功能及其抑制剂的研究奠定了基础。

产Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶耐药鲍曼不动杆菌对消毒剂的抗力研究

目的研究临床分离的产Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)耐药鲍曼不动杆菌对医院常用消毒剂的抗力。方法采用悬液定量杀菌试验方法,对临床分离产NDM-1耐药鲍曼不动杆菌抗消毒剂能力进行研究,同时与消毒试验标准菌株作平行比较。结果以浓度为5 500 mg/L邻苯二甲醛、2 000 mg/L苄索氯铵、体积分数75%乙醇、20 g/L葡萄糖酸氯己定醇对临床分离产NDM-1耐药鲍曼不动杆菌作用15 s,杀灭对数值均>5.00,结果与四种标准菌株完全一致。以有效碘5 178 mg/L聚维酮碘对产NDM-1耐药鲍曼不动杆菌和三种标准菌株作用15 s和对金黄色葡萄球菌作用60 s,杀灭对数值均>5.00。浓度为1 000 mg/L的十一酰胺丙基甜菜碱和聚六亚甲基胍作用60 s,对临床分离的产NDM-1耐药鲍曼不动杆菌和金黄色葡萄球菌杀灭对数值均>5.0,对大肠杆菌和铜绿假单胞菌的杀灭对数值均<5.0。结论临床分离的产NDM-1耐药鲍曼不动杆菌对上述消毒剂抗力与其标准菌株相当,且与其他标准菌株相比抗力持平或略低。

鲍曼不动杆菌产NDM酶的基因研究进展

NDM-1是一种新型金属β-内酰胺酶,自2008年被首次发现,便吸引了公众及研究者的目光.随之NDM的不同亚型也相继被报道.该文章主要对NDM-1及NDM-2分子特点及结构、基因序列及不同亚型的研究进展作一综述.