微小RNA-506-3p调控UHRF1抑制大肠癌细胞转移的机制

目的探讨微小RNA-506-3p(miR-506-3p)通过调控含PHD及指环结构域的类泛素蛋白1(UHRF1)的表达,进而影响大肠癌细胞转移能力的机制。方法利用生物信息学的方法预测并筛选UHRF1上游可能发挥调控作用的miRNA-506-3p;在大肠癌细胞及组织中分别检测miR-506-3p及UHRF1的表达水平并分析其相关性;运用荧光素酶报告基因技术检测miR-506-3p与UHRF1 3′非翻译区(3′UTR)特异性结合的情况;荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot检测大肠癌细胞转染miR-506-3p类似物(mimics)后对UHRF1表达水平的影响;构建UHRF1过表达的大肠癌稳转细胞株,分别转染miR-506-3p mimics及其对照序列(mimics control)后,利用Transwell实验检测处理前后大肠癌细胞转移能力的变化。结果相对于正常大肠上皮细胞及癌旁组织而言,miR-506-3p在大肠癌细胞及组织中的表达均下调(均 P <0.05),且与UHRF1的表达水平呈负相关( r =-0.456, P =0.044);miR-506-3p通过其“种子序列”与UHRF1 3′UTR特异性结合( P <0.01),并减少了UHRF1的mRNA及蛋白表达(均 P <0.01);转染miR-506-3p mimics抑制了大肠癌LoVo细胞的转移能力( P <0.01),而在此基础上增加UHRF1的表达则逆转了miR-506-3p的抑制作用( P <0.01)。结论 miR-506-3p通过调控UHRF1抑制了大肠癌细胞的转移能力,在大肠癌中发挥抑癌基因的作用。

针灸对子宫内膜异位症大鼠异位内膜组织UHRF1和DNMT1的影响

目的:观察针灸对子宫内膜异位症(EMS)泛素样PHD和含环指结构域蛋白1(UHRF1)和DNA甲基转移酶1(DNMT1)的影响。方法:将40只Sprague-Dawley大鼠按体质量随机分为假手术组10只和造模组30只。造模组大鼠复制EMS模型后随机分为模型组、针灸组和孕酮组,每组10只。固定器固定各组大鼠。假手术组和模型组予以生理盐水灌胃;针灸组予以针刺血海和三阴交,艾灸关元和生理盐水灌胃;孕酮组给予地屈孕酮生理盐水混悬液灌胃。治疗28 d后,测量大鼠异位囊肿三径(长、宽及厚度)并计算体积,减掉干预前异位囊肿体积,取差值评估异位囊肿生长情况;实时荧光定量聚合酶链反应和免疫组织化学法检测正常子宫内膜、在位及异位内膜组织UHRF1、DNMT1 mRNA和蛋白水平。结果:针灸组和孕酮组异位囊肿体积差值无统计学差异(P>0.05),但均小于模型组异位囊肿体积差值(P<0.05)。模型组异位内膜组织UHRF1、DNMT1 mRNA和蛋白水平低于正常子宫内膜组织(P<0.05);模型组在位内膜组织DNMT1 mRNA以及UHRF1蛋白水平低于正常子宫内膜组织(P<0.05);针灸组异位内膜组织UHRF1 mRNA及蛋白水平、DNMT1蛋白水平高于模型组异位内膜组织(P<0.05),其中UHRF1 mRNA水平高于孕酮组(P<0.05);针灸组在位内膜组织DNMT1 mRNA水平高于模型组在位内膜组织(P<0.05);针灸组异位内膜组织UHRF1、DNMT1 mRNA和蛋白水平与正常子宫内膜比较无统计学差异(P>0.05)。结论:针灸可能通过上调异位内膜组织中UHRF1 mRNA和UHRF1、DNMT1蛋白水平,使其趋于正常子宫内膜水平,从而达到缩小异位囊肿体积,治疗大鼠子宫内膜异位症的效应。

UHRF1、UHRF2蛋白表达与结直肠癌关系的研究

目的探讨类泛素样含PHD和环指域蛋白(UHRF) 1、UHRF2蛋白在结直肠癌组织中的表达,并分析其对结直肠癌患者预后的判断价值。方法采用组织芯片联合免疫组化染色技术,检测2009年1月至2014年9月手术治疗患者294例结直肠癌组织及其中254例配对癌旁正常组织中UHRF1及UHRF2蛋白的表达情况,分析两者与结直肠癌发生发展的相关性及其与结直肠癌患者临床病理指标和预后的关系。结果免疫组织化学结果显示,UHRF1、UHRF2阳性表达定位于细胞核,UHRF1、UHRF2蛋白阳性表达率在结直肠癌组织中均显著高于癌旁正常组织(49. 6%vs 3. 5%,P=0. 000;60. 2%vs 3. 1%,P=0. 000),且两者呈正相关(r=0. 358,P=0. 008);两种蛋白的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移及临床分期密切相关(P <0. 05,P <0. 01),而与患者年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤类型、肿瘤大小无关(P均> 0. 05);Kaplan-Meier生存分析显示,UHRF1、UHRF2阳性表达患者术后生存率低于阴性表达患者,两者均阳性表达患者术后生存率更低;Cox回归分析表明,UHRF1及UHRF2均为结直肠癌患者术后预后的独立影响因素(RR=3. 436,P=0. 016;RR=3. 499,P=0. 033)。结论 UHRF1、UHRF2与结直肠癌的发生发展密切相关,二者的表达可做为患者预后判断的重要依据。