听源性癫痫动物模型研究进展

听源性癫痫(audiogenic seizures,AGS)是由于强声刺激引起的癫痫,发作时伴全身性肌肉痉挛,其动物模型在研究癫痫发生机制、寻找致病基因及调控通道、筛选新的抗癫痫药物(antiepileptic drugs,AEDs)等方面具有重要意义。本文从发病特点、发病机制及致病基因等方面总结了目前常见AGS动物模型研究进展,以期为AEDs研发提供新的研究方向和靶点。

听源性惊厥易感大鼠惊厥和点燃后前脑结构内的c-fos表达

为探讨听源性惊厥点燃和前脑结构的关系，用免疫细胞化学方法结合体视学分析，研究了Ｗｉｓｔａｒ种系的听源性惊厥易感大鼠（Ｐ７７ＰＭＣ）惊厥和点燃后，前脑结构内ｃ－ｆｏｓ表达的差异。结果显示，（１）正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠接受一次强音刺激后，海马、齿状回、杏仁核、内嗅皮质、嗅周皮质和额－顶皮质内未见Ｆｏｓ阳性神经元；（２）Ｐ７７ＰＭＣ大鼠一次惊厥后，除海马、齿状回外，上述被检各区内可见广泛的Ｆｏｓ阳性神经元，其分布具有区域差异；（３）Ｐ７７ＰＭＣ大鼠点燃后，海马、齿状回内有大量Ｆｏｓ阳性神经元，其他的被检各区内，Ｆｏｓ阳性神经元数量更多，阳性神经元的光密度更大，与一次惊厥后相比较，具有显著差异（Ｐ＜０．０１）。在点燃大鼠海马结构中，齿状回内的Ｆｏｓ免疫反应最强，海马ＣＡ１、ＣＡ２区次之，ＣＡ３区较弱。结果表明，听源性惊厥点燃可以导致海马结构参与到惊厥活动之中。

听源性惊厥点燃诱导新皮质内c-fos和BDNF变化的研究

为探讨前脑结构参与听源性惊厥点燃过程的神经化学机制 ,本研究以 c-fos基因表达作为神经元功能活动的标志 ,采用免疫细胞化学方法 ,对新皮质内参与听源性惊厥点燃过程的神经元的分布状况进行了观察 ,并对相关区域内脑源性神经营养因子表达水平的变化进行了分析。结果显示 ,单次听源性惊厥发作后 ,新皮质内仅有少量散在的 c-fos阳性神经元存在 ;听源性惊厥点燃后 ,额、顶、枕及颞叶皮质内出现大量 c-fos阳性神经元。点燃后额叶及顶叶皮质内脑源性神经营养因子免疫阳性产物的校正光密度值显著增高。结果表明 ,新皮质内大量神经元参与听源性惊厥点燃过程 ,脑源性神经营养因子表达增强很可能是其中的机制之一。

听源性惊厥易感大鼠惊厥和点燃后听觉核团内的c-fos表达

为探讨听源性惊厥点燃和听觉核团的关系，用免疫细胞化学方法结合体视学分析，研究了Ｗｉｓｔａｒ种系的听源性惊厥易感大鼠（Ｐ７７ＰＭＣ）惊厥和点燃后听觉核团内ｃ－ｆｏｓ表达的差异。结果显示：１．正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠接受１次铃声刺激后，蜗神经核、外侧丘系背核、下丘和内侧膝状体内没有Ｆｏｓ标记细胞；２．Ｐ７７ＰＭＣ大鼠１次听源性惊厥后，上述听觉核团内可见广泛的Ｆｏｓ标记细胞，其分布具有区域差异；３．Ｐ７７ＰＭＣ大鼠被点燃后，听觉核团内的Ｆｏｓ标记细胞更多，标记强度更大，特别是在外侧丘系背核和下丘，Ｆｏｓ标记细胞的密度和强度均显著高于１次惊厥后（Ｐ＜０．０１）。在内侧膝状体腹侧核，点燃后Ｆｏｓ标记细胞密度显著增加（Ｐ＜０．０５）。在内侧膝状体背侧核和蜗神经背核，Ｆｏｓ标记细胞无显著变化（Ｐ＞０．０５）。本研究结果表明，听源性惊厥诱导的ｃ－ｆｏｓ表达反映了听觉核团内神经元的异常活动，这种异常的神经元活动可能是听源性惊厥点燃的基础。

听源性遗传癫痫易感大鼠大脑皮层胆囊收缩素mRNA的原位杂交检测(英文)

本实验用原位杂交法 ,对听源性遗传癫痫易感大鼠 (P77PMC)癫痫发作前、单次癫痫发作和多次发作时大脑颞皮层CCKmRNA阳性信号进行了检测。结果显示 :(1)单次和多次癫痫发作后颞皮层CCKmRNA阳性神经元数量明显增加 (P <0 .0 1) ;(2 )多次癫痫发作者上述脑区CCKmRNA阳性神经元数量较单次癫痫发作有明显的下降 (P <0 .0 1)。大脑颞皮层CCKmRNA增高表明 ,CCKmRNA在癫痫发作过程中起了某种作用 ;多次癫痫发作大鼠CCKmRNA表达降低提示 ,单次和多次癫痫发作时大脑皮层对CCKmRNA转录的调控可能存在不同的机制。

听源性惊厥易感性大鼠上丘神经元构筑的研究

用石蜡切片Nissl染色方法，光镜下计数、结合计算机图象分析系统观察、测量惊厥鼠与正常鼠土丘神经元的一些指标．结果显示：（1）在吻例段和中段上丘第Ⅱ层和吻侧段上丘第Ⅲ层的神经元胞体平均直径惊厥鼠显著小于正常鼠，说明惊厥鼠上丘上述部位神经元较小；（2）在吻侧段上丘第Ⅵ层，中段上丘第Ⅰ、Ⅱ层和屋倒段上丘第Ⅴ层，神经元剖面椭圆率惊厥鼠显著地小于正常鼠，说明惊厥鼠土丘上述部位神经元胞体较细长；（3）除第Ⅲ层外，土丘各板层神经元剖面面数密度惊厥鼠都大于正常鼠．本研究结果表明，惊厥鼠的土丘有神经元的形态学变化。这种变化与惊厥鼠惊厥易感性的形成之间是否存在着某种关系，有待深入研究．

Fmr1基因敲除小鼠的听源性惊厥行为的观察

目的对不同年龄Fmr1基因敲除小鼠的听源性惊厥行为观察。方法使用PCR技术对Fmr1基因敲除小鼠鉴定后对不同周龄的Fmr1基因敲除小鼠和野生型小鼠进行听源性惊厥的观察,数据采用多因素方差分析处理。结果经PCR技术证实脆性X综合征小鼠模型是Fmr1基因敲除小鼠。Fmr1基因敲除小鼠在中央区的惊厥阈值较野生型小鼠显著短。Fmr1基因敲除小鼠鼠受声音刺激后表现为惊恐、奔跑明显的AGS前驱表现,最后发生跌倒、惊厥,呈角弓反张状,最后恢复活动能力或者反复发作,或者导致死亡。结论 Fmr1基因敲除小鼠的行为异常,其兴奋性较野生型小鼠增高。

听源性癫痫发作对大鼠学习记忆的影响及机制探讨

目的探讨癫痫发作对大鼠学习记忆的影响及机制。方法以100dB铃声刺激60s诱发遗传性听源性癫痫大鼠癫痫发作,采用光辨别学习和放射免疫分析相结合的方法,研究大鼠癫痫发作对光辨别学习的影响及脑组织中生长抑素含量的改变。结果癫痫发作后,大鼠光辨别学习能力明显减弱,表现为达到学会标准所需的时间明显延长(6.20±0.97vs3.90±0.57,P<0.01);癫痫发作后,大鼠下丘脑、海马、颞叶皮层组织中生长抑素含量明显增高(下丘脑:551.28±68.21vs273.41±53.51,P<0.05;海马:246.71±43.26vs135.74±36.60,P<0.01;颞叶皮层:235.88±42.14vs150.01±37.71,P<0.01)。结论癫痫发作对大鼠光辨别学习有明显的抑制作用,该作用可能与下丘脑、海马及颞叶皮层组织中生长抑素含量的改变有关。

c－fos基因在听源性惊厥易感大鼠脑的表达──原位杂交组织化学法研究

运用原位杂交技术，以遗传性听源性惊厥易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ为对象，发现听源性惊厥可诱导大鼠脑内ｃ－ｆｏｓ基因快速、大量、短暂性表达。ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ分布于大脑皮层、梨状皮层、杏仁复合体、海马齿状回、上丘脑、背侧丘脑、下丘脑部分核团、下丘、蜗神经核、蓝斑及小脑等处。惊厥后皮层下结构中ｃ－ｆｏｓ基因表达变化程度超过皮层的变化，尤其是下丘、蜗神经核与惊厥时程有明显关系。推测皮层下结构对听源性惊厥的发生有重要意义。Ｐ＜０．０１讨论本文结果说明听源性惊厥同其它因素诱导的惊厥一样［３］，可诱导大鼠脑内ｃ－ｆｏｓ基因的表达，表达涉及到大脑皮层、海马齿状回、丘脑、下丘、蜗神经核等结构，其中以皮层下结构如丘脑、下丘、蜗神经核表达变化最显著。原位杂交显示的ｃ－ｆｏｓ基因表达特征类似于Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果即快速、大量和短暂性。由于不同部位在惊厥活动中的作用差别，因此用原位杂交可以显示每一结构内ｃ－ｆｏｓ基因表达特点。如在惊厥后３０ｍｉｎ，海马齿状回中７０％以上的神经元单位胞质面积上银粒计数超过２０个，而梨状皮层及运动皮层仅占５～１３．８％。有报告指出海马齿状回为钙离子通道和ＮＭＤＡ受体高密度区域［４］，推测Ｃａ２＋和ＮＭＤＡ?

惊厥易感大鼠听源性惊厥后脑内c-fos蛋白表达

目的：探讨遗传性癫痫易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ听源性惊厥的神经回路。方法：Ｐ７７ＰＭＣ大鼠以标准化听刺激（１２０ｄＢ，持续６０ｓ）诱发Ⅴ级听源性惊厥，分别在惊厥后０．５、１、２、４、２４ｈ断头、取脑切片，行Ｆｏｓ免疫组化染色观察。结果：惊厥后脑内Ｆｏｓ样免疫染色强度呈明显的时间依赖和区域特点。多数核团在惊厥后０．５～１ｈ开始出现Ｆｏｓ表达，２～４ｈ达高峰，２４ｈ明显回落，不同核团其时程也存在差异，Ｆｏｓ表达最先出现在下丘平面尾侧听通道核团、中央灰质、前庭神经核，继而出现在下丘、脑桥网状结构、皮层下结构、边缘系统、额顶新皮层区、梨状皮质。脑干听通道核团及脑桥网状结构、额顶新皮层区、梨状皮质Ｆｏｓ样免疫染色最强。结论：Ｐ７７ＰＭＣ大鼠听源性惊厥可引起脑内Ｆｏｓ区域性、快速、一过性表达升高。脑干听通道、脑桥网状结构、额顶新皮层区。

听源性惊厥点燃诱导一氧化氮合酶表达增加

为探讨一氧化氮（ＮＯ）在听源性惊厥点燃中的可能作用，用ＮＡＤＰＨ－黄递酶组织化学方法和Ｆｏｓ免疫细胞化学方法，研究了听源性惊厥易感大鼠惊厥和点燃后听觉核团和前脑结构内ＮＯＳ－Ｆｏｓ双重阳性神经元的分布及差异。结果显示：一次惊厥后，下丘内双重阳性神经元较多，近７０％～８０％的ＮＯＳ阳性神经元呈Ｆｏｓ阳性，其他听觉核团和前脑结构内仅见少量ＮＯＳ－Ｆｏｓ双重阳性神经元。点燃后，听觉核团和前脑结构内ＮＯＳ－Ｆｏｓ双重阳性神经元明显增加，而且嗅周皮质第Ⅱ层浅部多数ＮＯＳ弱阳性神经元呈Ｆｏｓ阳性，第Ⅲ层出现大量ＮＯＳ－Ｆｏｓ双重阳性神经元。上述结果表明，听源性惊厥点燃诱导ＮＯＳ表达增加。

听源性惊厥刺激使P77PMC大鼠脑内NR2A/2B基因表达下调

目的 :研究遗传性癫疒间 易感大鼠P77PMC惊厥后脑内N 甲基 D 门冬氨酸 (N methl D aspartate ,NMDA)NMDA受体亚基NR2A及NR2BmRNA表达情况。方法 :以原位杂交技术研究P77PMC大鼠在听源性惊厥刺激后不同时间脑内不同脑区NR2A及NR2BmRNA表达。结果 :惊厥后NR2AmRNA表达在P77PMC大鼠大脑运动、感觉皮层 ,海马CA1、CA2、CA3区和齿状回均呈时间依赖性下调。惊厥后 30minNR2AmRNA表达即出现下降 ,惊厥后 2hmRNA水平降至最低 ,4～ 8h后恢复到基础水平 ,2 4h再次低于基础水平。惊厥后 8h内上述脑区NR2BmRNA表达规律与NR2A基本相同。结论 :P77PMC大鼠在发生听源性惊厥后脑内NR2A及NR2BmRNA表达出现下调 ,这可能影响随后的NR2A、NR2B的蛋白表达 ,从而导致惊厥后脑内NMDA受体的亚基组成发生改变 。

听源性惊厥易感大鼠上丘突触素P38表达的研究

目的 探讨听源性惊厥易感大鼠上丘突触密度的变化情况。 方法 免疫细胞化学方法和计算机图像分析技术。 结果 P77PMC听源性惊厥易感大鼠上丘浅层和深层的 P38免疫反应产物校正光密度值均显著高于正常 Wistar大鼠。 结论 P77PMC大鼠上丘突触密度的改变可能与听源性惊厥易感性密切相关。

甲状腺素水平改变对听源性惊厥鼠惊厥阈值的影响

目的 研究甲状腺素水平改变对听源性惊厥鼠惊厥阈值的影响及苯巴比妥抗癫 治疗疗效的影响。方法 对听源性使厥鼠分别予苯巴比妥、苯巴比妥加甲状腺素、本巴比妥加丙基硫氧嘧啶等处理，在处理前、处理１周及处理４周分别测定惊厥阈值，并在第３次测定惊厥阈值后取血测定甲状腺激素指标。结果 苯巴比妥组和苯巴比妥＋丙基硫氧嘧啶组总甲状腺素、游离甲状腺素较对照组较低，促甲状腺激素增高。苯巴比妥组治疗１周后惊厥阈值提高，４周后反而有所降低；而加用甲状腺素组在第４周惊厥阈值提高更显著；加用丙基硫氧嘧啶组的惊厥阈值处理前后无显著性改变。结论 甲状腺素可使听源性惊厥鼠的惊厥阈值提高，苯巴比要有降低甲状腺素水平的作用，而甲状腺素水平降低可能减低苯巴比妥抗癫 的效果。

听源性惊厥易感性大鼠上丘一氧化氮合酶阳性神经成分的分布

用还原性烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸黄递酶，简称黄递酶（ｒｅｄｕｃｅｄｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅｄｉｎｕ－ｃｌｅｏｔｉｄｅｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｉａｐｈｏｒａｓｅ，ＮＡＤＰＨ－ｄ）组织化学的方法，在光镜下对ＮＡＤＰＨ－ｄ反应阳性细胞进行计数和计算机图像分析测定反应产物的光密度（ｏｐｔｉｃａｌｄｅｎｓｉｔｙ，ＯＤ）值，观察一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性神经元及纤维在惊厥鼠上丘分布的情况。实验动物为听源性惊厥易感性大鼠，简称惊厥鼠（Ｐ７７ＰＭＣ）和正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠，简称正常鼠。实验结果如下：（１）在大鼠上丘第Ⅰ层ＮＯＳ阳性神经元呈密集均匀分布，在第Ⅳ层其分布也是均匀的但较稀疏，第Ⅶ层只有少量ＮＯＳ阳性神经元散在分布于中部。第Ⅰ、Ⅳ、Ⅶ层ＮＯＳ阳性神经元的大小和形态是一致的。在第Ⅰ、Ⅶ层ＮＯＳ阳性神经元呈上丘的背腹方向排列。在第Ⅳ、Ⅵ层有密集的ＮＯＳ阳性纤维。（２）上丘ＮＯＳ阳性神经元的数目以在急性发作的惊厥鼠最多，其次为非急性发作的惊厥鼠和电铃刺激的正常鼠，而在无电铃刺激的正常鼠最少。（３）ＮＯＳ阳性反应的ＯＤ值在各组大鼠间无显著性差异。本研究结果显示，上丘ＮＯＳ阳性神经成分的分布有特异性；ＮＯＳ酶的活性在惊厥鼠是增高?

P77PMC大鼠听源性惊厥神经回路──核团损毁研究

采用立体定位直流电损毁法，分别损毁双侧下丘、脑桥吻侧网状核、内侧膝状体、黑质，观察核团损毁对大鼠听源性惊厥行为的影响，以寻找与P77PMC大鼠听源性惊厥有关的神经核团。结果表明：双侧下丘损毁后能完全阻断强直阵挛性惊厥，脑桥吻侧网状核损毁能明显减少惊厥发生（P＜0．05），而双侧内侧膝状体及黑质损毁对惊厥无明显影响（P＜0．05）。提示下丘是P77PMC大鼠听源性惊厥的关键核团，而脑桥吻侧网状核可能参与了惊厥回路，内侧膝状体可能并未参与惊厥回路，黑质在此惊厥中的作用尚不明确。

听源性惊厥点燃诱导海马结构神经细胞死亡

目的 检测听源性惊厥单次发作及惊厥点燃发作后 ,易感大鼠海马结构内是否出现神经细胞死亡现象 ,并对细胞死亡的相关机制进行初步分析。 方法 建立听源性惊厥点燃模型 ,以HE染色和免疫细胞化学染色方法 ,检测单次发作大鼠和点燃发作大鼠海马结构内死亡细胞的分布 ,以及凋亡相关蛋白Bcl 2和Bax的表达情况。 结果 听源性惊厥单次发作后 ,海马内未见明显细胞死亡现象 ;点燃后 ,海马CA1 、CA2 、CA4 区锥体细胞层及齿状回颗粒细胞层出现大量核固缩、胞浆嗜酸性变的死亡神经元 ;点燃组海马CA2 区及CA4 区内Bax免疫阳性产物校正光密度 (CA)值较对照组显著增高。 结论 听源性惊厥点燃可诱导海马结构大量神经元死亡 。

听源性惊厥点燃后听觉核团和前脑结构内一氧化氮合酶阳性神经元的形态学观察

为探讨一氧化氮在听源性惊厥点燃中的作用．用NADPH-d组织比学方法和体视学分析，研究厂Wistar种系的听源性惊厥易感大鼠（P77PMC）惊厥和点燃后听觉核团内NOS阳性神经元的分布及差异。结果显示：（1）P77PMC大鼠一次惊厥后，听觉核团和前脑结构内可见广泛的NOS阳性神经元，其分布类似于正常大鼠；（2）点燃后，听觉核团和前脑结构内NOS染色增深，NOS阳性神经元增加。特别是在下丘和嗅周皮质．除NOS阳性神经元明显增多外．其分布亦发生改变。本研究提示，听源性惊厥可诱导NOS表达增加，这种增加可能对于保持神经元增高的易感性有关。

听源性惊厥易感性大鼠在惊厥发作后上丘神经元内c-fos的表达

目的观察听源性惊厥易感性大鼠惊厥发作时上丘内ＦＯＳ免疫阳性神经元的分布。方法实验动物分４组。ＰＳ组：电铃（１０６ｄＢ，１０～２０ｋＨｚ，６０ｓ）刺激下呈急性惊厥发作的惊厥鼠；ＰＮ组：非急性惊厥发作的惊厥鼠；ＷＳ组：电铃刺激的正常鼠；ＷＮ组：无电铃刺激的正常鼠。每组各５只。ＰＳ和ＷＳ组电铃刺激后存活２ｈ。结果①只有在ＰＳ大鼠的上丘可见有典型的ＦＯＳ样免疫阳性神经元，且其只分布在第Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ层。②在ＰＳ大鼠上丘第Ⅳ层、第Ⅵ和Ⅶ层，ＦＯＳ样免疫阳性神经元多数位于尾侧段。结论本研究结果表明，听源性惊厥发作导致惊厥鼠上丘特定部位神经元内ＦＯＳ表达增加，说明这些神经元在惊厥发作时是兴奋的。本文讨论了这些神经元在惊厥发作状态下可能起的作用。

群体隔离对大白鼠听源性癫痫的影响及其与脑内单胺类神经介质含量变化的关系

使群体隔离大白鼠接受急性和慢性铃声刺激,以观察隔离对大白鼠听源性癫痫的发生和适应过程的影响,同时观察其与脑内单胺类神经介质含量变化的关系。 结果表明急性声音应激时群体隔离动物癫痫发生率高。在铃声应激后隔离鼠端脑内NE含量显著减少。在连续6天的慢性声音应激时隔离大白鼠的适应过程稍慢。在6天中发生癫痫和狂跑的总次数隔离鼠也明显高于群居鼠。在第六天测定时发现隔离鼠脑干内NE含量明显低于群居鼠。群居鼠端脑和脑干内5-HT含量及隔离鼠端脑内5-HT含量明显增高。第七天测定时群居鼠端脑内NE含量明显增高,隔离鼠端脑与脑干内5-HIAA含量明显增高。上述结果表明隔离动物对铃声刺激的应付能力减弱,适应过程减慢。这种现象可能与隔离动物脑内NE和5-HT的生物合成受限有关。