依达拉奉对抗化学性缺氧诱导的HEI-OC1听细胞内质网应激性凋亡

目的探讨依达拉奉(edaravone,EDA)能否保护HEI-OC1(House Ear Institute-organ of Corti 1)听细胞对抗氯化钴(CoCl2)诱导的内质网应激性凋亡。方法用CoCl2处理HEI-OC1听细胞,建立化学性缺氧损伤HEI-OC1听细胞的体外模型。EDA在CoCl2处理细胞前1h加入培养基中作为预处理。细胞计数试剂盒-8(cell count kit 8,CCK-8)比色法检测细胞存活率;试剂盒法检测细胞内丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量;Western blot法(蛋白印迹法)检测葡萄糖调节蛋白78(glucose regulating protein 78,GRP78;或称内质网应激蛋白)及裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(cleaved caspase-12,活化形式)的表达。结果 CoCl2在100～400μmol/L浓度范围内处理HEI-OC1听细胞24h,可浓度依赖性地降低细胞活力;300μmol/LCoCl2处理HEI-OC1听细胞,可以上调内质网应激蛋白GRP78的表达、增加细胞内MDA的含量及活化caspase-12。在300μmol/LCoCl2作用HEI-OC1听细胞前,用10～40μmol/LEDA预处理1h可以浓度依赖性地抑制CoCl2诱导的毒性损伤作用,40μmol/LEDA预处理1h可抑制CoCl2对GRP78表达的上调和对caspase-12的活化作用,以及CoCl2引起的MDA含量增加。结论 EDA可通过抗氧化及抗内质网应激引起的凋亡以保护HEI-OC1听细胞对抗CoCl2诱导的细胞损伤。

血红素加氧酶-1在硫化氢对抗顺铂诱导的听细胞毒性损伤中的作用

目的探讨血红素加氧酶-1（HO-1）在硫化氢（H2S）对抗顺铂（Cisplatin）诱导的听细胞损伤中的作用。方法应用顺铂处理听细胞，建立化疗药物耳毒性的体外模型。硫化氢的供体硫氢化钠（NaHS）及HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ（ZnPPIX）先于顺铂加入培养基中，作为预处理。检测细胞存活率、胞内丙二醛（MDA）的含量、HO-1的表达。结果顺铂在10～80gmol／L浓度范围内处理听细胞24h可浓度依赖性地降低细胞存活率。40μmol／L顺铂处理24h可增加听细胞内MDA的含量。NaHS处理可上调HO-1的表达，抑制顺铂引起的胞内MDA含量增加及细胞存活率降低。HO-1的抑制剂秦ZnPPIX可明显减弱H2S对顺铂诱导的胞内MDA含量的增加及细胞存活率降低的抑制作用。结论HO-1可通过抗氧化的机制介导H2S对顺铂诱导的听细胞毒性的改善作用。

纳米麦克风能听细胞声音

美国加州Pasadena市的喷气飞机推进器实验室目前在研制一种被称为“纳米麦克风”的微型扩音器。科学家用这种新产品,探测其它星球上是否存在生命,这种仪器非常灵敏,甚至可以探测到生物体内单个细胞生长发育时所发出的声音。这种纳米传感器以人的内耳与大脑之间起声音传输作用的毛绒状联系物为设计基础。

双重荧光染色监测听毛细胞游离钙

豚鼠耳蜗分离外毛细胞经fluo-3和fura-red染色后,用激光扫描共聚焦显微镜监测其胞内游离钙的空间分布和动态变化,以fluo-3/fura-red荧光比值大小指示游离钙浓度的高低。外毛细胞胞内游离钙呈不均匀分布,荧光比值分别为细胞质1.71±0.85,质膜1.61±0.75,表皮板1.47±0.65及胞核1.39±0.66,显示细胞质游离钙浓度最高而胞核游离钙浓度最低。静息状态下连续扫描时荧光比值变化小于0.1,而在受到机械刺激后荧光比值增加幅度达0.3—1.2。实验结果表明,fluo-3和fura-red双发射比例法能更准确反映听毛细胞胞内钙的空间分布和动态变化,第二信使钙可能参与了听毛细胞的机械-电换能过程,研究了换能过程中听毛细胞钙信号的时空模式。

补肾聪耳片对卡那霉素致聋豚鼠听毛细胞修复研究

目的 :探讨补肾聪耳片对卡那霉素致豚鼠感音性神经性耳聋的修复和保护作用。方法 :卡那霉素致聋制作动物实验模型 ,用中药制剂补肾聪耳片进行干预 ,通过听力和耳蜗病理实验观察其改善听力和对耳蜗毛细胞的修复作用。结果 :正常对照组和实验组相比各项观察指标 (耳廓听域反射、听性脑干诱发电位、外毛细胞听毛缺失率差别均有统计学意义 (P<0 01) ,超微结构检查发现中药制剂对耳蜗结构有明显的改善。结论 :补肾聪耳片能恢复神经反射的功能 ,改善耳听力 ,促进毛细胞修复。

Otoferlin蛋白与听毛细胞突触传导

在哺乳动物中，耳蜗基底膜突触囊泡是听觉感知的重要部分，它通过纤毛细胞机械传导，调节Ca2＋通道的Ca2＋内流从而刺激递质释放传入感觉中枢。为了维持适当的Ca2＋浓度，体内系统会产生多种多样的功能蛋白：比如感觉神经系统中的Ca2＋“传感器”一海马钙蛋白（hippocalcin）、视锥蛋白（visinin）和恢复蛋白（recoverin）。近年来，

胎鼠听囊细胞体外培养研究

目的:了解哺乳动物听觉细胞的来源,探索听觉细胞前体细胞体外增殖和分化.方法:取孕鼠胚胎听囊细胞进行体外培养,用免疫细胞化学方法,分别对培养的细胞进行细胞角蛋白、F肌动蛋白和calretinin染色观察细胞特征;BrdU染色观察细胞增殖.结果:培养的细胞在体外进行分化和增殖,细胞形态主要有上皮细胞形态、成纤维细胞形态和神经细胞形态3种.对细胞角蛋白和F肌动蛋白这两种上皮细胞的标志染色呈阳性.在原代培养就出现calretinin染色明显阳性的细胞.传代后结果仍为阳性着染,但强度减弱.BrdU染色显示培养细胞具有明显的增殖活性.本研究共传8代,历时4mo,细胞形态维持稳定.结论:胎鼠听囊细胞在体外自然培养条件下可以分化或者增殖为未成熟毛细胞.本研究为探索刺激听觉毛细胞再生的治疗方法提供研究思路和方法.

小鸡再生听毛细胞及其突触连接的放射自显影

目的 采用光镜放射自显影 (Lightmicroscopicautoradiography ,LM ARG)及电镜放射自显影 (Electronmicroscopicautoradiography ,EM ARG)技术 ,观察小鸡再生听毛细胞及其突触连接的特征。方法 7d龄纯种伊莎鸡 2 0只 ,实验组 (n =14) ,连续皮下注射庆大霉素 10d ;对照组 (n =6 )。皮下注射生理盐水 ,用药第 4d开始注射氚标记胸腺嘧啶核苷 ,分别于停药当天及第 7d取标本作LM ARG和EM ARG。结果 停药当天组光镜下标记细胞多为支持细胞 ,位于损伤区基底膜上至表层之间 ;电镜下有标记的毛细胞位于腔面 ,银颗粒呈卷丝状 ,准确定位于细胞核上 ,毛细胞下可见尚未成熟的神经突触 ,内含较多囊泡及线粒体 ,突触特殊结构尚不明显。停药第 7d时光镜发现受损区有标记的成熟毛细胞 ;电镜下再生毛细胞及突触特征与当天组相似。对照组未见标记的毛细胞和支持细胞。结论 :庆大霉素中毒后鸡基底乳头中细胞增殖活跃 ,基底乳头中某些支持细胞作为前体细胞 ,通过有丝分裂增殖分化为毛细胞。再生毛细胞及其突触结构尚待进一步发育成熟。

鸟纲蜗管听毛细胞突触的透射电镜观察

目的：了解鸟纲蜗管听毛细胞突触的超微结构。方法：应用透射电镜对成年鸡蜗管听毛细胞的突触进行观察。结果：发现高毛细胞与传入神经末梢有着更频繁的联系，高毛细胞底部可见突触前小体；矮毛细胞与传出神经末梢有着更频繁的联系，矮毛细胞底部可见突触下池。结论：鸟纲蜗管高、矮听毛细胞可能分别相当于哺乳纲耳蜗的内。

透析听毛细胞动作电位的形成原理——从2020年山东卷一道题谈起

本文通过对山东省2020年普通高中学业水平等级考试的一道疑似“错题”进行“拨乱反正”,解答部分师生对该题涉及的听毛细胞动作电位形成原理的疑惑。

听神经细胞变性修复再生的临床及实验研究

本文以补肾活血中药为主结合电磁波、激光等方法综合治疗神经性耳聋654例，治愈24例，显效77例，有效355例，总有效率为63．61％。并在此基础上对其机理进行了动物实验研究。

听神经细胞变性修复再生的临床实验研究

本文就我院654例神经性耳聋进行临床疗效分析,并就其机理进行了动物实验研究,现报道如下: 1 治疗方法 以中药为主,辅以理疗,标本兼治相结合。 1·1 中药(复聪汤)分为1号、2号,1号药为改善微循环,2号药为促进神经细胞修复再生。此药具有滋润解毒,清血化瘀,通经活络,扶正固本,补肾纳气,填精益髓之功效。

HSP70在化学性缺氧诱导毛细胞损伤中的作用

目的：探讨热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）在氯化钴（cobalt chloride,CoCl2）诱导听细胞损伤中的作用。方法：应用CoCl2处理HEI-OC1听细胞,建立化学性缺氧诱导耳蜗外毛细胞损伤的体外模型。细胞计数试剂盒-8（cell count kit 8,CCK-8）比色法检测细胞存活率,免疫印迹法（Western blot）检测HSP70的蛋白表达。结果：在150-750μmol/L浓度范围内,不同浓度的CoCl2处理听细胞24 h可引起明显的细胞毒性,使细胞存活率呈剂量依赖性地降低。300μmol/L CoCl2作用听细胞30-240 min可时间依赖性地上调HSP70的蛋白表达。HSP70抑制剂槲皮素（quercetin,Quer）可在蛋白水平下调CoCl2引起的听细胞内HSP70表达增加。Quer通过抑制HSP70的表达可加重CoCl2诱导的听细胞缺氧性损伤。结论：适应性HSP70表达增加可保护听细胞对抗缺氧诱导的损伤。

顺铂对离体C57小鼠耳蜗毛细胞的损害作用

目的探讨离体培养条件下顺铂致C57小鼠耳蜗毛细胞损伤的特点。方法出生后3～4天的C57小鼠耳蜗基底膜离体培养6～8小时后,加入不同浓度的顺铂(0、10、50、100、400、1000μmol/L)无血清培养液继续培养48小时,其中0μmol/L为正常对照组,10～1000μmol/L组为实验组,0～100μmol/L4组,每组各7只耳蜗,400和1000μmol/L两组各6只耳蜗。采用TRITC-Phalloidin和DAPI染色,荧光显微镜下观察耳蜗毛细胞生长情况并拍照计数、绘制毛细胞缺失图,运用SARS8.0软件进行直线回归分析比较各组的毛细胞缺失率。结果对照组耳蜗基底膜毛细胞在离体培养条件下生长良好,偶见缺失。实验组中顺铂引起毛细胞的缺失程度从底回至顶回大致均匀。随着顺铂浓度从10μmol/L增加到100μmol/L,毛细胞的缺失率从14.5%上升到78.4%;顺铂浓度升高至400μmol/L及1000μmol/L时,毛细胞缺失率下降至48.8%和8.77%。细胞缺失区域可见DAPI着色的浓缩核。结论离体培养条件下,顺铂对耳蜗毛细胞的损伤在一定浓度范围内呈剂量依赖性,超过一定剂量后顺铂所致毛细胞损伤又逐渐减少;内外毛细胞的损伤从底回至顶回呈现均一性。

miR-34 a/Bcl-2在听神经皮层的表达及调控

目的 验证B淋巴细胞瘤(Bcl)-2在不同年龄C57BL/6小鼠中的表达情况,通过调控微小核糖核酸(miR)-34a观察Bcl-2在蛋白水平上的差异.方法 采用小鼠大脑相关图谱对不同年龄段C57BL/6小鼠及1 d内的乳鼠听皮层精确定位,动物模型即小鼠听皮层取材,观察神经元特异性核蛋白(NeuN)、Bcl-2的蛋白表达差异;细胞部分即乳鼠取材进行原代培养,用NeuN进行细胞鉴定,质粒瞬时转染过表达miR-34a,观察在蛋白水平上Bcl-2表达的差异,从而研究Bcl-2、miR-34a在听皮层神经元细胞机制.结果 NeuN在小鼠大脑皮层4周龄组比12月龄组表达多;在蛋白水平上,Bcl-2在小鼠听皮层组织年轻组比老年组表达多.进一步在听皮层细胞中调控促进miR-34a,能减少Bcl-2的表达,反之,则Bcl-2表达提高.结论 Bcl-2在小鼠年轻组比老年组表达多,调控miR-34a在听皮层细胞上的表达能改变Bcl-2的表达量,且呈负相关关系.

细胞再生打破耳聋禁区

济南市医科所耳聋治疗研究中心是人才汇集,医术高超,医德高尚,设备先进的医疗研究单位。自1996年9月成立以来,他们本着瞄准国际先进水平进行群体攻关。他们想病人之所想,急病人之所急,把病人放在首位,他们赁着踏实、赤诚。

细胞再生打破耳聋禁区

济南市医科所耳聋治疗研究中心是人才汇集,医术高超,医德高尚,设备先进的医疗研究单位。自1996年9月成立以来,他们本着瞄准国际先进水平进行群体攻关。他们想病人之所想,急病人之所急,把病人放在首位,他们赁者踏实、赤诚、顽强的奉献精神和高超精湛的技术,创造出了一个又一个奇迹,铸造了一个又一个的辉煌,使无声的世界里飞进了歌声,使聋哑人从涓涓的话语中感受到了人间的真情。 该研究中心根据谢玉堂市长关于卫生工作改革的指示精神。

高压氧治疗在临床的应用近况

高压氧（HBO）于本世纪30年代由英国人开始应用于临床,获得较好治疗效果,此后在荷兰、美国、日本、加拿大、苏联和澳大利亚等广泛利用.我国于50年代末至60年代初始对HBO研究与应用.HBO能短时间内提高机体的HbO2量,改善组织缺O状态.作为临床治疗方法之一,兹将近年来有关HBO治疗概况作一综述.

不同缺铁期大鼠畸变产物耳声发射的改变

目的 观察不同饲养期铁缺乏大鼠畸变产物耳声发射 (DPOAE)的改变 ,探讨铁缺乏引起听毛细胞损伤的可能机制。方法 幼龄Wistar大鼠 ,随机分组 ,缺铁饮食饲养法复制铁缺乏动物模型 33只 ,标准饮食饲养 33只作对照。每组分别于喂养第 4、8、12周各随机取 11只测双耳DPOAE幅值。结果 铁缺组第 4周平均DPOAE幅值中、高频率段下移 ,在 2、4kHz两点下移具有显著性意义 (P <0 .0 5 )。第 8周比第 4周中高频率段下移明显 ,在 1.4、2、3、4、6、8kHz各点差异具有显著性意义 (P <0 .0 5 )。第 12周与第 8周对比 ,DPOAE幅值各点相近 (P >0 .0 5 )。