PCR-RFLP法检测葡萄糖激酶基因启动子-30位点变异的实验条件研究

目的确定用Alw21I限制性内切酶切割PCR(聚合酶链反应)扩增葡萄糖激酶基因启动子区-30位点的最适实验条件。方法按一定梯度设定酶切所用扩增产物量、内切酶的浓度、酶切时间,用2g/dl低熔点琼脂糖凝胶(含0.5μg/ml的溴乙锭)电泳,透射式紫外灯下观察酶切结果。结果20μl的酶切体系中,最适酶切产物为5μl,最适内切酶量为5U,酶切时间应超过9h。结论参数偏离最适条件将会导致实验失败。

PCR-RFLP法检测葡萄糖激酶基因启动子-30位点变异的实验条件研究

目的 :确定PCR扩增葡萄糖激酶基因启动子区以及用Alw2 1I内切酶切割 -3 0位点的最佳实验条件 .方法 :对影响PCR反应以及酶切的实验因素进行系统研究 .结果 :最佳引物浓度为 0 3 μmol/L ;以 1U酶量效果最满意 ;最适dNTP浓度为 1 67μmol/L ;最适镁离子浓度为 1 5mmol/L . 2 0 μL的酶切体系中 ,最佳酶切产物为 5 μL,最佳内切酶量为 5U ,酶切时间应超过 9h .以上参数偏离最适条件将会导致实验失败 .

实验方法与改进

060354PCR-RFLP法检测葡萄糖激酶基因启动子-30位点变异的实验条件研究；060355不同环境存放的待检样品蒸发浓缩对结果的影响；060356同步多色荧光原位杂交技术的建立及临床应用；060357绝对计数系统的临床应用评估。