尘螨变应性鼻炎与T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-3(Tim-3)启动子区-882T>C基因多态性的研究

目的探讨T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-3启动子区-882T>C基因多态性与尘螨变应性鼻炎的关系。方法运用多聚酶链反应技术检测88例尘螨变应性鼻炎及102例正常人Tim-3启动子区-882T>C基因多态性。结果尘螨变应性鼻炎组Tim-3启动子区-882T>CC/C、C/T、T/T表型频率分别为:0.9773、0.0227、0,对照组分别为,0.9804、0.0196、0;尘螨变应性鼻炎组Tim-3启动子区-882T>C、Tim-3启动子区-882T>C基因频率分别为:0.9886、0.0114。对照组分别为:0.9902、0.0098,Tim-3启动子区-882T>C各种基因型频率在患者组与正常对照组之间的差异无显著性(P>0.05)。结论广东汉族人群Tim-3启动子区-882T>C存在单核苷酸多态性变异,Tim-3启动子区-882T>C基因多态性与尘螨变应性鼻炎无明显相关。

广东汉族人群Tim-3启动子区-1541C〉T单核苷酸多态性分析

目的了解广东汉族人群Tim-3启动子区-1541C〉T单核苷酸多态性的分布特点。方法应用聚合酶链反应技术对广东汉族健康人群外周血单个核细胞DNA的Tim-3启动子区-1541C〉T基因进行扩增，以BSAJ Ⅰ进行限制性内切酶酶切图谱分析，计算其C／C、C／T和T/T基因型频率和C、T等位基因频率，并结合文献和湖北汉族人群进行地区间的分析比较。结果对169例广东汉族健康人群进行了检测，其Tim-3启动子区-1541C〉T位C／C、C／T和T/T基因型频率分别是0．935、0．053和0．012；Tim-3启动子区-1541C〉T位C，T基因频率分别为：0．962、0．038。结论广东汉族人群Tim-3启动子区-1541C〉T位存在单核苷酸多态性变异，广东汉族人Tim-3启动子-1541C〉T基因的分布与湖北汉族人群的分布无明显差异。

含有Rubisco小亚基启动子和转运肽序列的通路克隆入门载体的构建和应用(英文)

Gateway(通路克隆)技术是最近开发出来的一种分子克隆技术,其特点是操作简单、省时高效,已经成功应用于很多基因表达载体的构建.然而,现有的通路克隆植物表达载体不包含任何将表达蛋白定位到叶绿体中的序列.将通路克隆入门质粒载体pENTR-2B的XmnⅠ位点改造成HindⅢ位点,产生入门载体pENTR*-2B,然后将番茄1,5二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)小亚基3C的启动子(PrbcS)及其转运肽序列(*T)和绿色荧光蛋白(GFP)报告基因亚克隆到pENTR*-2B中,构建通路克隆入门载体pENTR*-PrbcS-*T-GFP.实验结果证实,用pENTR*-PrbcS-*T-GFP和通路克隆的植物表达载体进行LR反应,构建GFP的光诱导型植物表达载体,可以成功地将表达的GFP定位到转基因植物的叶绿体中.利用β-葡糖苷酸酶(GUS)报告基因替代该入门载体中的GFP基因做试验也得到相似的结果.这说明用目的基因替换该入门载体中的GFP可以构建目的基因的入门载体,然后用通路克隆技术可以快速构建其光诱导型植物表达载体,将表达的目的蛋白定位到转基因植物或组织细胞的叶绿体中.

C3SP1-PGL3重组质粒的构建及其在PC12细胞中的表达

目的:构建含有SP1结合位点的C3启动子的荧光素酶重组质粒。通过瞬时转染证明导入载体的目的基因具有高效的启动子活性。方法:以SF级雄性大鼠的大脑总DNA为模板,根据Genbank中含有SP1结合位点的C3启动子的核苷酸序列设计引物,对大鼠C3基因的启动子进行特异性扩增。以原始质粒p GL3为载体,利用Gibson Assembly连接目的片段和酶切质粒进行分子重组,通过PCR鉴定、酶切鉴定以及测序鉴定后,将该重组质粒通过脂质体介导,转染PC12细胞。活体成像检测和双荧光素酶活性检测得重组质粒的萤火虫荧光素酶活性。结果:PCR鉴定、酶切鉴定表明表达载体p GL-3中插入了含有SP1结合位点的C3启动子基因片断,测序结果表明编码框正确。在PC12细胞中表达出高效的启动子活性。结论:获得能够在PC12细胞内高效表达萤火虫荧光素酶的重组质粒C3SP1-p GL3。