CD14基因启动子区-159C/T多态性在H型高血压患者中的分布

目的:调查H型高血压患者中CD14基因启动子区-159C/T基因多态性分布情况。方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术对H型高血压组、普通高血压组和对照组的CD14基因启动子区-159C/T多态性分布进行研究,同时检测血清同型半胱氨酸(HCY)及其他生化指标。结果:H型高血压组CC型、CT型、TT型分布频率分别为10%、43%、47%,C和T等位基因频率分别为31.5%、68.5%;普通高血压组CC型、CT型、TT型分布频率分别为10%、50%、40%,C和T等位基因频率分别为35%、65%;对照组CC型、CT型、TT型分布频率分别为13%、53%、34%,C和T等位基因频率分别为39.5%、60.5%,三组基因分型和等位基因频率均无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,H型高血压组、普通高血压组高密度脂蛋白(HDL-C)水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:H型高血压患者CD14基因启动子区-159C/T多态性分布无明显差异。

水稻OsPLATZ14基因启动子的克隆及表达分析

【目的】研究pOsPLATZ14的结构及时空表达模式,对深入研究OsPLATZ14基因功能、了解PLATZ转录因子在水稻生长发育进程的作用具有重要意义。【方法】利用BDGP、FPROM及Cister预测分析pOsPLATZ14大小,以水稻日本晴基因DNA为模板扩增pOsPLATZ14;应用PlantCARE分析序列中的顺序作用元件,构建pOsPLATZ14::GUS载体,转化水稻获得转基因植株;通过GUS组织化学染色法分析pOsPLATZ14在水稻中的时空表达特征。【结果】经PCR扩增获得pOsPLATZ14长度为1 899 bp,该区域含有光信号、逆境响应及激素应答等多种顺式作用元件。pOsPLATZ14驱动的GUS报告基因在水稻种子萌发期,苗期根、茎、叶,抽穗期的根、茎、叶、花穗、小花、叶夹角、茎结合部位、根茎过渡区及成熟期种子均有明显表达。【结论】pOsPLATZ14为组成型启动子,其下游调控基因OsPLATZ14可能在水稻生长发育过程中起重要作用。

PolⅡ型启动子K14实现组织特异RNAi

RNAi(RNA interference,RNAi)是继基因打靶技术后的一种高效的研究基因功能的方法。细胞学实验和小鼠模型的研究结果表明,PolⅡ型启动子可以实现组织特异的RNA干扰,从而为鉴定基因在特定组织中的功能及作用机理提供了一个强有力的研究方法。为了能将这种方法用于转基因绵羊生产,探讨基因与绵羊毛囊发育的关系及其作用机制等,文章利用PolⅡ型CMV启动子和毛囊组织特异表达的人角蛋白14(K14)基因的启动子驱动eGFP-shRNA融合转录本的生成,从而实现敲低目的基因的表达。体外基因表达沉默效率分析(pEGFP-C1-shRNA和psiCHECK-BMP4双质粒共转染Hela细胞)结果表明,6个干扰序列均能有效地抑制BMP4基因的表达,抑制效率达到60%以上;体内表达沉默分析(只转染pEGFP-K14-shRNA质粒转染小鼠皮肤细胞系JB6-C41)的实验结果与体外分析结果相似,除3#序列外,其余干扰序列对BMP4基因的抑制效率都在60%以上,其中5#序列的效率达到80%以上。siRNA诱导的目标基因沉默中mRNA和蛋白水平的下降显著正相关。结果表明,设计构建的由PolⅡ型启动子K14驱动eGFP-shRNA融合转录本的形成,从而实现RNAi的研究方法是可行的,利用这种方法可以实现在特定细胞中敲低目的基因的表达水平。为在大家畜特别是绵羊中应用RNAi的方法分析目的基因在毛囊发育、对不同类型毛囊生长发育的诱导和调节等作用机理的研究提供一个参考方法。

肝癌组织中14-3-3σ启动子异常甲基化及基因转录水平检测

目的探讨肝癌14-3-3σ基因启动子异常甲基化状况及其与转录水平的关系。方法14-3-3σ启动子甲基化用甲基化特异性PCR检测;14-3-3σ mRNA的表达水平用实时定量PCR检测。结果14-3-3σ启动子甲基化在肝癌患者癌旁组织、肝硬化组织和癌组织中的阳性率分别为6.8%(3/44)、56.1%(23/44)和93.2%(41/44)。不同性别、分化程度和乙型肝炎病毒状态的组织中14-3-3σ甲基化频率无显著差异(P>0.05);发生甲基化的组织标本中90.6%(58/64)转录缺失,10.4%转录水平下降,而未发生甲基化的标本14-3-3σ mRNA表达水平基本正常。14-3-3σ甲基化与其mRNA水平明显负相关(P<0.05)。14-3-3σ甲基化与其mRNA表达水平下降密切相关(P<0.05)。结论从癌旁组织、肝硬化组织到癌组织,14-3-3σ基因启动子甲基化频率逐步升高,且与其mRNA表达相关,提示14-3-3σ启动子甲基化可能在肝癌形成过程中是一个早期事件,与肝癌发生有一定关系。

白桦BpGT14基因启动子克隆及表达活性分析

本文利用Site Finding-PCR方法克隆了白桦BpGT14基因起始密码子ATG上游2 169 bp序列,并通过PLACE启动子预测工具对其进行元件分析。结果表明,该启动子片段含有启动子核心元件及多种逆境及激素响应元件,同时具有植物苯丙烷及木质素生物合成的MYB类转录因子的重要结合基序。研究选取了其中含有启动子核心元件的1 156 bp片段构建了pBpGT14∷GUS植物表达载体,利用农杆菌侵染的方法将pBpGT14∷GUS报告基因瞬时转化烟草植株,鉴定该启动子在烟草中的表达活性及对非生物胁迫和激素的响应模式。对转基因烟草植株进行GUS染色,结果表明该启动子具有启动活性,且在茎段处活性较高;进一步分析非生物胁迫对烟草中GUS酶活性的影响,表明该启动子对ABA、NaCl、PEG及高温处理均有明显响应,且对于NaCl及PEG处理响应迅速。为了更好的鉴定白桦BpGT14基因启动子在白桦细胞中的启动活性及响应模式,本文构建了pBpGT14∷GFP载体并瞬时转化白桦茎段悬浮细胞,进行研究。GFP转录水平分析结果与GUS酶活性结果基本一致,但其中部分时间点仍存在差异。选取PEG处理3、6、12及24 h的转GFP基因白桦茎段悬浮细胞,在显微镜下观察其绿色荧光蛋白,以此揭示该启动子对干旱的响应模式。结果表明,该启动子在白桦茎段悬浮细胞中启动了GFP的表达,在处理初期(3 h),荧光效果明显;随着处理时间的增加,细胞脱水明显,且在细胞壁表现高亮度荧光。

K14和CMV启动子驱动裸鼠体内HPV16 E6/E7基因表达的差异

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种无包膜的环状闭合双链DNA病毒,具有严格的嗜人组织的特性.为探讨不同启动子驱动HPVE6/E7癌蛋白在裸鼠体内不同组织的表达效率,构建了带有角蛋白(K14)启动子和带有巨细胞病毒(CMV)启动子的E6/E7腺病毒载体(pAd-K14-E6/E7和pAd-CMV-E6/E7),pAd-K14-E6/E7和pAd-CMV-E6/E7、以及作为对照的重组腺病毒空载体pAdtrack-K14和pAd-CMV同源重组后,分别在293细胞中包装,收集重组病毒Ad-K14-E6/E7、Ad-CMV-E6/E7、Adtrack-K14和Ad-CMV,通过尾缘静脉注射到随机分组的裸鼠体内,并每d向裸鼠腹腔注射0.05 mg雌激素.采用RT-PCR和Western免疫印迹检测不同实验组E6/E7 mRNA和蛋白表达水平,免疫组化法检测P53和Bcl-2蛋白表达.结果显示,注射病毒Ad-K14-E6/E7(实验组1)裸鼠子宫体中E6/E7 mRNA、E6蛋白质、P53和Bcl-2蛋白高表达,而其它组织中低表达;注射病毒Ad-CMV-E6/E7(实验组2)裸鼠各组织E6/E7 mRNA、E6蛋白质、P53和Bcl-2蛋白均低表达.研究表明,在裸鼠体内角蛋白K14启动子可以调控E6/E7在子宫体中表达,CMV启动子未能诱导E6/E7在子宫体中表达.

新疆地区维汉民族CD14基因启动子区C(-260)→T多态性的分布特点及其与冠心病、血脂的关系

目的:研究新疆地区维、汉民族患者CD14基因启动子C(-260)→T位点多态性的分布特点及其与冠心病、血脂的相关关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术的分析方法,检测390例新疆地区维、汉患者CD14基因启动子C(-260)→T多态性,同时检测其血脂水平;以冠状动脉造影为"金标准",区分冠心病组及对照组。结果:新疆地区维吾尔族与汉族患者中CD14基因启动子-260位点CC,CT和TT基因型频率在CHD组和对照组分别为20.33%、52.70%,26.97%和37.58%、43.63%、18.79%,等位基因C、T频率分别为46.68%、53.32%和59.40%、40.60%。该基因多态性的分布在维、汉民族间差异均无统计学意义;与国外不同种族相比,仅与捷克人群存在统计学差异(P<0.05)。同时该位点多态性与血脂水平间不存在相关关系(P>0.05)。结论:CD14基因C(-260)→T位点多态性与新疆地区维、汉人群CHD发病具有相关性,T等位基因可能是CHD的遗传易感基因;该位点多态性在维吾尔族与汉族间无种族差异;与其他不同种族相比,该位点多态性仅与捷克人群存在差异。该多态性致CHD机制可能与血脂代谢无关。

CD14启动子区多态性介导幽门螺杆菌参与胃癌中上皮-间质转化路径的机制研究

胃癌起源于胃壁最表层的黏膜上皮细胞,是世界上最常见的恶性肿瘤之一,严重危害着人类的健康。胃癌的发病机制极其复杂,与环境、遗传以及致病菌感染等因素密切相关,其中幽门螺杆菌（Hp）引发的胃癌备受关注。Hp为微需氧革兰染色阴性菌,被认为是胃癌及胃黏膜相关淋巴癌的第一类致癌原。机体内免疫因子的表达能够影响Hp感染后的炎性反应过程及其严重程度,最终决定细菌感染的结局。

甜菜BvM14-MADS box基因启动子的组织特异性表达

MADS-box基因在植物的花器官和各种营养器官中均有不同形式的时空表达模式,行使不同功能。实验室前期获得了甜菜M14品系BvM14-MADS box基因的特异启动子Pbm,并对其进行了瞬时表达。本试验利用含有重组载体pBI121-Pbm-GUS的农杆菌转化烟草,对报告基因GUS在转基因烟草各组织表达特性进行研究,探讨BvM14-MADS box基因特异启动子Pbm是否具有组织特异性表达活性。试验结果表明,GUS基因只在花的萼片中有表达,在根、茎、叶中均无表达,可见此启动子Pbm在花组织的萼片中具有表达特异性。

CD14启动子-159位点基因多态性与糖尿病肾病患者肾动脉血流动力学研究

目的用彩色多普勒超声(CDUS)监测糖尿病肾病患者左肾动脉(LRA)血流动力学改变。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术对156例糖尿病肾病患者的CD14基因启动子-159位点进行基因型分析,将他们分为CC基因型和CT+TT基因型2组,应用CDUS测量其LRA大血流速度(Vmax)、舒张小血流速度(Vmin)、平均血流速度(Vmean)、搏动指数(PI)、阻力指数(RI)等血流动力学有关参数。结果 CC基因型糖尿病肾病患者LRA Vmax、Vmin、Vmean血流速度积分(VTI)减低、Pl、RI增加,与CT+TT基因型糖尿病肾病患者比较存在显著性差异(P<0.05,P<0.001)。结论 CD14启动子-159(C-T)基因多态性与糖尿病肾病患者肾脏血流动力学改变存在相关性。CDUS通过监测糖尿病肾病患者肾脏血流动力学改变,为其诊断和预后评估提供了种无创监测的方法。

CD14启动子-159位点基因多态性与幼年特发性关节炎的相关性研究

目的研究广东地区汉族幼年特发性关节炎(JIA)患儿CD14基因启动子-159位点基因多态性和等位基因频率的分布情况,探讨其多态性与JIA的关系。方法对104例JIA病例和281名健康体检儿童,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法进行基因型分析。结果JIA全身型CD14(-159)多态性CC、CT和TT基因型频率分别为10.87%、41.30%、47.83%;JIA多关节型分别为12.50%、50.00%、37.50%;JIA少关节型分别为10.00%、65.00%、25.00%;JIA其他类型分别为7.14%、71.43%、21.43%;对照组分别为37.01%、46.98%、16.01%,其中JIA全身型及多关节型组的基因型频率、等位基因频率与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05),JIA少关节型的等位基因频率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论CD14基因启动子C-159T多态性与广东地区汉族JIA全身型及多关节型患儿有明显相关性;CD14启动子C-159T基因多态性中的T等位基因可能是JIA的遗传学风险因素。

受SnpR激活的snpA启动子调控的柔红霉素C-14羟化酶基因的克隆、表达和应用研究

尝试将柔红霉素经微生物转化法合成多柔比星,从Streptomyces sp.C5中通过PCR的方法扩增了含核糖体结合位点、大小为1.3kb的编码C-14柔红霉素羟化酶的doxA基因及受SnpR调控的snpA启动子。最终构建的重组质粒pYG908,能表达一大小为46.6ku的蛋白条带,CO结合差光谱分析表明所表达的酶在450nm有吸收峰。重组质粒转化Streptomyces lividans TK24后,工程菌能转化柔红霉素生成和多柔比星保留时间一样的产物。

CD14启动子-159位点基因多态性与广州汉族儿童脓毒症的相关性研究

目的研究广州地区汉族儿童脓毒症患儿CD14启动子-159位点基因多态性分布特征，探讨该位点多态性与脓毒症的关系。方法对224名汉族儿童健儿童体检及135例脓毒症患儿，采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应法进行基因型分析。结果健康体检儿童CD14（-159）多态性有3种基因型：TT、CT、CC，基因频率分别为17．85％、40．63％和41．52％，T等位基因频率61．8oA，C等位基因频率38．2％与我国健康汉族成年比较，CD14基因多态性差异存在显著性（P〈0．05）；脓毒症组基因频率分别为：17．77％、55．56％、26．67％，T等位基因频率45．6％，C等位基因频率54．4％），脓毒症组的基因型频率、等位基因频率与对照组比较差异有统计学意义（P均〈0．05）。结论CD14基因启动子-159位点基因多态性与广州地区汉族儿童脓毒症患儿有相关性，T等位基因可能是其遗传危险因素。

CD14启动子-159位点基因多态性与糖尿病视网膜病变视网膜中央动脉血流动力学变化关系

目的:用彩色多普勒超声(CDUS)监测糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)患者视网膜中央动脉(central retinal artery,CRA)血流动力学的改变。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术对106例DR患者的CD14基因启动子-159位点进行基因型分析,其中54例为增殖期(PR),52例为非增殖期(NPR),将他们分别分为CC基因型和CT+TT基因型2组,应用CDUS测量其CRA最大血流速度(Vmax)、舒张最小血流速度(Vmin)、平均血流速度(Vmean)、搏动指数(PI)、阻力指数(RI)等血流动力学有关参数。结果:CC基因型DR患者CRA Vmax、Vmin、Vmean、血流速度积分(VTI)减低,PI、RI增加,与CT+TT基因型DR患者比较差异存在显著性(P<0.05,P<0.001)。结论 :CD14启动子-159(C-T)基因多态性与DR患者在PR期及NPR期CRA血流动力学改变均存在相关性。CDUS通过监测DR患者CRA血流动力学改变,为其诊断和预后评估提供了一种无创监测的方法。

肺癌患者14-3-3σ基因启动子甲基化与其mRNA表达水平的关系

目的:探讨肺癌患者14-3-3σ基因启动子CpG岛甲基化状况与其mRNA表达水平的关系。方法:用实时定量PCR检测14-3-3σ基因mRNA在肺癌组织、正常肺组织及肺癌细胞株A549中的表达;用甲基化特异性PCR检测这些组织、细胞中14-3-3σ启动子区CpG岛甲基化状态。结果:14-3-3σ基因启动子在肺癌组织和正常肺组织中发生甲基化的频率分别为51.11%(23/45)和17.39%(4/23)(2χ=7.229,P=0.007)。14-3-3σmRNA在正常组织中全部表达,在肺癌组织中表达缺失率为15.56%(7/45),且表达量低于正常肺组织(t=10.309,P<0.001),不同肿瘤病理分型(SCLC、NSCLC)之间14-3-3σmRNA有显著差异(t=5.256,P<0.023),不同年龄、性别、肿瘤大小之间无显著差异(P>0.05)。14-3-3σ启动子甲基化与其表达量下降密切相关(r=0.48,P=0.04).结论:在肺癌中14-3-3σ启动子甲基化与其mRNA表达下调或缺失有密切关系,在肺癌发生中14-3-3σ异常甲基化起一定作用。

湖北地区汉族人群CD14启动子T-260C位点多态性研究

目的 探讨湖北地区汉族健康人群脂多糖受体(CD14)启动子T 260C位点多态性的分布。方法 采用聚合酶 链反应和限制性片段长度多态性方法检测152名湖北地区汉族健康人群CD14启动子( 260)位点多态性,并结合文献进行不 同种族间的比较分析。结果 湖北地区汉族健康人群基因型频率依次为TC44.7%、TT28.3%、CC27.0%;其等位基因T和 C的频率分布相近。与捷克、德国、日本、美国人群相比,该多态性位点分布与捷克人群间存在极显著性差异(P<0.01)。结 论 湖北地区汉族人群CD14启动子 260位点存在T/C多态性,其在不同种族间的分布可能存在显著性差异。

CD14启动子-260位点基因多态性对糖尿病肾病的影响

目的探讨CD14启动子-260位点基因多态性对糖尿病肾病(DN)的影响。方法应用PCR直接测序法对437例2型糖尿病(T2DM)患者(T2DM组)及145例正常者(对照组)的CD14启动子C-260T基因多态性进行分析。结果两组CD14启动子-260位点基因型分布及等位基因频率均无统计学差异(P>0.05);非DN与DN患者比较,其CD14启动子-260位点CC基因与CT+TT基因有统计学差异(P<0.05)。结论CD14启动子-260C/T基因多态性与糖尿病发病无相关性,但其CC基因是T2DM患者进展为DN的遗传学风险因素。

延边地区朝鲜族糖尿病肾病患者CD14启动子-159位点基因多态性的相关性研究

目的研究延边地区朝鲜族糖尿病肾病(DN)患者CD14启动子-159(C-T)基因的多态性分布,探讨延边地区朝鲜族DN患者该基因的多态性与DN发病的相关情况。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术对延边地区人群中152例朝鲜族DN患者及139名朝鲜族正常对照组者的CD14基因启动子-159位点进行基因型分析,并将在该院住院治疗的152例朝鲜族DN患者分为男性和女性两组,分析两者基因型频率和等位基因频率的差别。同时对152例朝鲜族DN患者的临床资料及生化指标进行回顾性分析。结果①CD14启动子-159位点基因多态性在朝鲜族正常对照组和朝鲜族DN患者中的分布差异无显著性(χ2=1.776,P>0.05);②在男性和女性DN的患者中,CD14启动子-159位点纯合子CC的基因频率与杂合子CT及纯合子TT的基因频率相比,差异存在显著性(χ2=3.903,P<0.05);③正常对照组与DN患者相比,DN的发生与高血压、病程、空腹高血糖、C反应蛋白及低密度脂蛋白密切相关(P<0.05或P<0.01),与年龄、餐后血糖、糖化血红蛋白、肌酐、胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白及体重指数无关(均P>0.05)。结论①CD14启动子-159(C-T)基因的多态性与延边朝鲜族DN患者的发病无关。②CC纯合子基因可能是男性朝鲜族DN患者的易感基因。③高血压、长期病程、空腹高血糖、低密度脂蛋白水平升高及炎症反应是DN发病的重要风险因素。

CD14启动子-159位点基因多态性与中国延边地区原发性高血压左心室肥厚的关系

目的探讨CD14启动子-159位点基因多态性与中国延边地区朝鲜族及汉族人群中原发性高血压左心室肥厚的相关性。方法选取中国延边地区朝鲜族原发性高血压左心室肥厚116例,朝鲜族原发性高血压非左心室肥厚107例及朝鲜族正常对照组108例;汉族原发性高血压左心室肥厚103例,汉族原发性高血压非左心室肥厚100例及汉族正常对照者108例。应用聚合酶链反应多态性技术对正常对照者及所有患者的CD14启动子-159位点基因进行基因型分析。多普勒超声心动图评估并计算其左心室质量指数,并记录体重指数、血压、血糖、血脂、低密度脂蛋白及肌酐等指标。结果在朝鲜族及汉族受试人群中,原发性高血压左心室肥厚组与原发性高血压非左心室肥厚组相比,各基因型分布频率在两组间差异有统计学意义(P<0.05);在原发性高血压左心室肥厚组中,CD14-159位点CC纯合子基因型频率高于原发性高血压非左心室肥厚组及正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CD14启动子-159(C-T)基因多态性与延边地区朝鲜族及汉族人群原发性高血压左心室肥厚的形成相关,CC基因型是延边地区人群发生原发性高血压左心室肥厚的风险因素。