吲哚胺2,3-二氧化酶在人急性单核细胞白血病(M_5)和急性淋巴细胞白血病细胞中的表达及其抑制剂1-甲基色氨酸的治疗作用(英文)

本研究旨在探讨吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)在白血病细胞中的表达和作用。应用间接免疫荧光染色光法检测人急性单核细胞白血病(M5)和急性淋巴细胞白血病(ALL)的细胞内吲哚胺2,3-二氧化酶的表达情况,并以小鼠急性淋巴细胞白血病细胞系L1210建立白血病小鼠模型以观察吲哚胺2,3-二氧化酶抑制剂1-甲基色氨酸是否具有抑制白血病细胞生长的作用。结果表明:M5和ALL的白血病细胞中吲哚胺2,3-二氧化酶阳性细胞率分别为29.4±11.2%和24.7±7.96%,而对照组的外周血单个核细胞中吲哚胺2,3-二氧化酶阳性细胞率仅为3±1.2%;两个白血病组与正常对照组在吲哚胺2,3-二氧化酶阳性细胞率方面的差异均有显著的统计学意义(P<0.05),而M5与ALL组之间在吲哚胺2,3-二氧化酶阳性细胞率方面无显著性差异(P>0.05);1-甲基色氨酸(1-MT)治疗的白血病小鼠与对照组比较,肿瘤消退,生存期延长(P<0.05),部分治疗小鼠达到无病长期生存(注射肿瘤细胞后生存期超过3个月)。结论:人急性单核细胞白血病(M5)和急性淋巴细胞白血病(ALL)的细胞均表达吲哚胺2,3-二氧化酶,1-甲基色氨酸对白血病小鼠有一定的治疗作用。

吲哚胺2,3-二氧化酶转染供体可抑制大鼠肝移植的急性排斥反应

背景：吲哚胺2,3-二氧化酶（indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO）表达于免疫特赦器官中,能选择性诱导T细胞免疫耐受.目的：观察腺病毒相关质粒载体介导IDO转染供体对大鼠肝移植急性排斥反应的抑制作用.方法：构建携带IDO的重组腺病毒质粒pWCM-IDO,建立PVG/DA大鼠肝移植模型48对,随机分为3组,生理盐水组、pWAV2组、pWCM-IDO组分别腹腔注射生理盐水、pWCM悬液和pWCM-IDO悬液1 mL.结果与结论：pWCM-IDO可成功转染PVG供体肝脏,PWCM-IDO组生存期和IDO表达明显高于生理盐水组和pWAV2组（P 〈 0.05~0.01）;移植后第4天PWCM-IDO组急性排反应程度明显弱于其他2组.提示IDO的重组腺病毒质粒可成功转染大鼠肝脏,缓解急性排斥反应,但难以持续有效表达,对免疫排斥的抑制作用有限.

吲哚胺2，3-二氧化酶对乙肝患者T细胞的免疫抑制作用

目的观察吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)在慢性乙型肝炎(乙肝)病毒感染方面的免疫耐受作用,从而为重建人体主动免疫提供一种新方法。方法采集50例慢性乙肝患者外周静脉血作为乙肝组,检测其乙肝病毒复制水平,T细胞亚群功能,以及IDOmRNA,蛋白定量以及表达活性。统计分析乙肝病毒(HBV)复制水平、T细胞亚群功能以及IDO表达三者之间的关系。采集50例健康体检人群外周静脉血作为正常对照组,以同样方法处理之。结果乙肝患者IDOmRNA、IDO蛋白定量、IDO表达活性均明显高于健康体检人群[mRNA:(2.110±0.615)×103vs(0.143±0.026)×103;蛋白定量:0.22±0.06vs0.02±0.0017;表达活性:26.07±8.12vs4.98±1.65;P<0.05],IDOmRNA与HBV(r=0.502,P<0.001)和ALT(r=0.65,P<0.01)均呈正相关。另外,IDOmRNA、蛋白定量和表达活性均与CD4(+)T细胞(r=-0.622,-0.682,-0.549,P<0.05)、CD8(+)T细胞(r=-0.487,-367,-294,P<0.05)以及CD4/CD8比值(r=-0.426,-0.533,-0.397,P<0.05)呈负相关。结论IDO与HBV密切相关,并且参与HBV的免疫耐受,抑制IDO的功能可以为打破乙肝病毒的免疫耐受提供一个新方法。

补肾中药对蜕膜巨噬细胞吲哚胺2,3-二氧化酶的影响

目的:探讨补肾中药对人早孕蜕膜巨噬细胞吲哚胺2,3二氧化酶(Indoleamine2,3dioxygenase,IDO)的影响。方法:半定量RTPCR测蜕膜IDOmRNA表达;Westernblot检测蜕膜巨噬细胞IDO蛋白质表达;ELISA测蜕膜巨噬细胞和淋巴细胞共培养上清液中IL10、IFNγ含量,高效液相色谱法测上清色氨酸、犬尿氨酸含量,以二者比值表示IDO活性。结果:正常组蜕膜IDOmRNA表达高于难免流产组;IDO抑制剂使Th细胞因子平衡偏离Th2型;中药血清可提高IDO蛋白质表达及活性,恢复Th细胞因子平衡。结论:蜕膜巨噬细胞IDO正常表达和活性是维持妊娠所必需,补肾中药可提高IDO活性至正常水平。

吲哚胺2，3-二氧化酶基因修饰的DCs对小鼠移植物抗宿主病的抑制作用

目的：探讨小鼠树突状细胞（dendritic cells，DCs）转染吲哚胺2，3-二氧化酶（indolamine2，3-dioxygenase，IDO）基因后对移植物抗宿主病（graft versus host disease，GVHD）的抑制作用。方法：用携带IDO基因的重组腺病毒感染BALB／c小鼠来源的树突状细胞，后者与C57BL／6小鼠骨髓移植物共培养，将经过处理的骨髓移植给BALB／c小鼠（C57BL／6→BALB／c小鼠GVHD模型，H-2^b→H-2^d），观察、比较各组GVHD表现（包括GVHD评分、生存期、病理学改变），并行嵌合体检测及观察混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction，MLR）。结果：致死剂量照射的受体小鼠接受经IDO处理的骨髓移植（bone marrow transplantation，BMT）后，未出现明显的GVHD反应，生存期显著延长，3个月时生存率大于80％；对照组均在移植后2周左右出现明显的GVHD表现，生存期未超过1个月。IDO—DC治疗组未出现明显的组织病理学损害；3个月时IDO-DC治疗组仍然保持比较高的嵌合；IDO-DC组的T细胞对C57BL／6、BALB／c淋巴细胞的反应性与对C3H淋巴细胞反应性相比显著降低（P〈0．05）。结论：经IDO基因修饰的DCs可以选择性去除骨髓移植物中异基因反应性T细胞，从而特异性地抑制GVHD并能及早地免疫重建。

吲哚胺2,3二氧化酶与肿瘤免疫耐受

肿瘤免疫耐受是一个获得性免疫应答的过程，许多机制参与调节。吲哚胺2，3-二氧化酶（IDO）是体内肝外色氨酸沿犬尿氨酸代谢的限速酶。其通过诱导“色氨酸删除”环境、色氨酸代谢产物的细胞毒性作用和调节Tregs等抑制T淋巴细胞增殖、活化，共同诱导肿瘤免疫耐受。抑制IDO可为今后肿瘤临床治疗提供新思路和方法。

绒毛及合体滋养层细胞吲哚胺2,3-二氧化酶表达与流产的关系

目的:探讨人早孕绒毛组织吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)的表达与流产的关系。方法:RT-PCR测正常妊娠和难免流产绒毛组织及JAR细胞株IDOmRNA表达;免疫组化分析两组绒毛组织IDO蛋白质表达;Westernblot检测体外培养的合体滋养层细胞IDO蛋白质表达;高效液相色谱法检测细胞培养上清液中有无犬尿氨酸。结果:难免流产组绒毛组织IDOmRNA及蛋白质表达均低于正常组;JAR细胞株不表达IDOmRNA;合体滋养层细胞表达IDO蛋白质;合体滋养层细胞培养上清中有犬尿氨酸。结论:绒毛组织IDO正常表达是维持妊娠所必需;体外培养的人早孕绒毛合体滋养层细胞表达的IDO具有活性。

吲哚胺2,3-二氧化酶在病毒性肝炎中的研究进展

病毒性肝炎具有强传染性、高流行性,其传播途径复杂、发病率高、对人体危害性大,已成为社会普遍关注的一类重要的传染性疾病。随着科学社会的进步,目前对于肝炎的治疗有一定的进展,主要应用干扰素、核苷类、基因疗法等抗病毒药物,但这些治疗适用范围局限,副作用大,易产生病毒变异和耐药现象,使病情反复,治疗出现"瓶颈"。近几年,吲哚胺2,3-二氧化酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)在病毒性肝炎中的作用日益受到关注,其与肝炎患者免疫耐受、病毒的复制、肝细胞的损伤程度密切相关。这将为病毒性肝炎的治疗提供新的思路。本文针对IDO在病毒性肝炎中的进展作一概述。

高表达吲哚胺2,3-二氧化酶的树突状细胞对角膜植片存活时间的影响

目的研究高表达吲哚胺2,3-二氧化酶(in-doleamine 2,3-dioxygenase,IDO)的树突状细胞(dendritic cells,DC)对角膜植片存活时间的影响。方法采用脂质体转染的方法将质粒CTLA4Ig转入F344大鼠(供体)DC,用荧光显微镜观察目的基因的表达,采用RT-PCR方法检测转染前后DC中IDO mRNA的表达变化,应用流式细胞仪检测转染前后不同时间的DC对同种异体T细胞的影响。以F344大鼠为供体、Lewis大鼠为受体建立大鼠同种异体角膜移植模型,将基因修饰后高表达IDO的DC在术后立即注入Lewis大鼠体内(实验组),注射转染前DC的受体为对照组。用裂隙灯观察角膜植片的存活情况,术后第7天用八肽胆囊收缩素测定受体鼠T淋巴细胞对供体抗原的反应。结果转染CTLA4Ig促进了树突状细胞IDO的表达(P<0.05),并且转染后48h的DC能显著引起T细胞凋亡(P<0.05),注射高表达IDO的DC能明显延长角膜植片的存活时间(P<0.01),治疗组Lewis大鼠T淋巴细胞对供体的抗原刺激的反应明显低于对照组(P<0.05)。结论高表达IDO的供体DC能特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应,明显延长角膜植片存活时间。

基因修饰后树突状细胞吲哚胺2,3二氧化酶表达变化及其对T细胞增殖的影响

背景:研究表明,吲哚胺2,3二氧化酶的表达可以降低机体的免疫应答反应,保护细胞和组织移植物,参与同种异体移植免疫耐受。细胞毒T细胞相关抗原4可以抑制T细胞的活化,在维持周边免疫耐受的过程中起着关键性的作用,但其作用机制尚不清楚。目的:观察转染细胞毒T细胞相关抗原4基因前后树突状细胞上吲哚胺2,3二氧化酶表达水平及其活性对T淋巴细胞增殖的影响。设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2005-09/2007-02在华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科实验室和眼科实验室完成。材料:成年雌性Lewis大鼠和F344大鼠购自北京维通利华实验动物种子中心,体质量180～200g。方法:采用脂质体转染的方法将质粒pG/细胞毒T细胞相关抗原4转入F344大鼠髓源性树突状细胞中,将转染前、转然后24,48,72h树突状细胞分为4组,反转录-聚合酶链反应检测转染前后骨髓源树突状细胞中吲哚胺2,3二氧化酶mRNA的表达,反相高效液相色谱法检测吲哚胺2,3二氧化酶活性。以Lewis大鼠T淋巴细胞为反应细胞,丝裂霉素C灭活的转染前后不同时间F344大鼠骨髓源树突状细胞为刺激细胞建立混合淋巴细胞培养体系。有或无L-色氨酸存在下,CCK8试剂盒检测T淋巴细胞增殖率,AnnexinV/PI双染色流式细胞仪检测T淋巴细胞凋亡。主要观察指标:①树突状细胞吲哚胺2,3二氧化酶mRNA的表达及吲哚胺2,3二氧化酶活性。②混合淋巴细胞培养CCK8及AnnexinV-FITC细胞凋亡检测结果。结果:转染细胞毒T细胞相关抗原4后树突状细胞中吲哚胺2,3二氧化酶的表达较转染前高(P<0.01),且转染后48h树突状细胞的吲哚胺2,3二氧化酶活性最高(P<0.01)。高表达吲哚胺2,3二氧化酶的树突状细胞在体外能诱导同种异体T细胞凋亡,抑制T细胞增殖,混合淋巴细胞培养体系中加入L-色氨酸后T淋巴细胞的凋亡率明显下降(P<0.01)。结论:树突状细胞上的吲哚胺2,3二氧化酶表达水平与T淋巴细胞的增殖密切相关,树突状细胞在体外可能通过吲哚胺2,3二氧化酶活性发挥免疫抑制作用。

吲哚胺2,3-二氧化酶与母胎免疫

吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)是色氨酸经犬尿氨酸途径代谢的限速酶,可抑制免疫细胞尤其是T细胞增殖,并通过多种机制调节免疫。抗原呈递细胞和胎盘滋养细胞表达IDO,调节母胎免疫,保护胎儿免受母体T细胞攻击。IDO抑制剂1-甲基色氨酸可通过旁路途径激活补体,引发母胎界面以T细胞依赖性、抗体非依赖性的补体沉积和出血性坏死为特征的广泛炎症,导致同种异基因胎儿排斥。

吲哚胺2，3二氧化酶与慢性乙型肝炎的免疫重建

细胞免疫不足是HBV感染持续状态和慢性乙型肝炎（CHB）重要发病机制。探索CHB患者对HBV免疫耐受机制，重建其主动免疫，将为HBV的治疗提供新的思路。目前研究发现，吲哚胺2，3二氧化酶（indoleamine-2，3-dioxygenase，IDO）广泛表达于免疫系统，参与机体肿瘤免疫、感染免疫及妊娠免疫，是CHB免疫重建的重要靶点。

吲哚胺2,3-二氧化酶对HepG2细胞生物学行为影响的研究

吲哚胺2,3-二氧化酶（indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO）是细胞内一种含亚铁血红素的酶,是肝脏以外惟一可催化色氨酸分子中吲哚环氧化裂解,从而沿犬尿酸途径进行分解代谢的限速酶,可将色氨酸分解为L-犬尿酸、吡啶甲酸和喹啉酸等多种代谢物.

外周血炎症因子、吲哚胺2,3-二氧化酶与冠心病共病抑郁相关性研究

目的研究冠心病患者外周血炎症因子及吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)与抑郁症之间的相关联系并进一步探讨其机制。方法通过对冠心病组、冠心病共病抑郁组、对照组3组进行肝肾心功能、血常规、外周血炎症因子以及IDO水平检测,并采用Pearson相关分析法分析不同炎症因子与抑郁程度的相关性。结果冠心病组与冠心病共病抑郁组心肝肾功能、血脂临床指标差异无统计学意义(P>0.05);冠心病共病抑郁组血尿酸、胱抑素C(Cys-C)高于冠心病组(P<0.05);冠心病组患者IL-10检测结果均值高于冠心病共病抑郁组(P<0.05);冠心病共病抑郁组TFN、IFN、IDO检测结果平均值高于冠心病组(P<0.05);冠心病患者TNF、IFN、Cys-C水平与抑郁程度成正相关(P<0.05);IL-10水平与抑郁程度成负相关(P<0.05)。结论促炎及抑炎因子的异常可以增加冠心病患者共病抑郁的趋向,IDO及IFN水平与抑郁严重程度相关。

N-(3,4-二甲氧基肉桂酰)邻氨基苯甲酸介导小鼠皮肤移植免疫负向调节的作用及机制研究

目的研究N-(3,4-二甲氧基肉桂酰)邻氨基苯甲酸[N-(3,4-dimethoxycinnamonyl)anthranilic acid,3,4-DAA]在小鼠皮肤移植中的免疫负调节作用,并探索其发挥作用的机制。方法 体外实验中,取同种异基因小鼠皮肤移植7d后的BALB/C小鼠脾脏制得淋巴细胞单细胞悬液,一半用四甲基偶氮唑蓝比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测小鼠脾脏淋巴细胞生长抑制率;另一半分为3组,分别加入RPMI1640培养液10μl(c1组)、3,4-DAA100μmol/L(c2组)、加入3,4-DAA200μmol/L(c3组),培养72h,进行病理学检查。同时用蛋白免疫印迹法检测吲哚胺2,3-二氧化酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)表达水平、用反相高压液相质谱法测定IDO活性。体内实验中,应用不同浓度3,4-DAA或合并使用西罗莫司进行药物干预,皮肤移植后10d取移植皮片行病理检查,用蛋白免疫印迹法检测脾脏淋巴细胞单细胞悬液中IDO的表达水平,用反相高压液相质谱法测定移植小鼠血清的IDO活性。结果 体外实验中,MTT检测结果示3,4-DAA对小鼠脾脏淋巴细胞增殖有抑制作用,呈现明显的剂量效应关系(P<0.05～P<0.01);在倒置显微镜下观察,与c1组比较,c3组、c2组皮肤移植小鼠的脾脏淋巴细胞悬液中的淋巴细胞生长明显受抑制,且c3组的淋巴细胞生长抑制较之c2组更显著,显示3,4-DAA有抑制脾脏淋巴细胞生长的作用。体内实验中,给予3,4-DAA处理组小鼠移植皮肤免疫损伤程度明显减轻。体外实验与体内实验结果示3,4-DAA处理组IDO表达水平、IDO活性较空白对照组均明显提高(P<0.05～P<0.01)。结论 3,4-DAA能够抑制小鼠皮肤移植排斥反应,显著减轻移植物排斥损伤,其作用机制是通过增强IDO活性实现的。

胸腺肽α1对再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞tlr9/ido mRNA表达的调节作用

本研究旨在探讨胸腺肽α1(Tα1)对再生障碍性贫血(AA)患儿骨髓间充质干细胞(MSC)TOLL样受体9(TLR9)/吲哚胺二氧化酶(IDO)mRNA表达的调节作用。建立正常儿童和AA患儿骨髓MSC的体外培养体系,应用RT-PCR检测Tα1对正常儿童和AA患儿骨髓MSCtlr9/ido mRNA表达的影响。结果表明:正常儿童骨髓MSC不表达tlr9 mRNA和ido mRNA。AA患儿骨髓MSC明显表达tlr9 mRNA,不表达ido mRNA;Tα1与AA患儿骨髓MSC作用18小时后,明显下调tlr9表达和上调ido表达,且呈浓度和时间依赖关系。结论:Tα1能够上调AA患儿骨髓MSC ido mRNA的表达。

IDO在肝癌细胞复发转移中的作用探讨

目的比较肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织中吲哚胺-2,3-二氧化酶(IDO)的表达,探索IDO在肝癌细胞定植转移中的作用。方法采集15例肝癌肝移植手术全肝切除标本,实时荧光RT-PCR检测并比较肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织中IDO mRNA。结果肝癌组织(A组)为15 174.9;癌旁组织(B组)为228 647.1;正常肝组织(C组)为13 640.3。可见癌旁组织(B组)IDO mRNA含量最高,明显高于肝癌组织(A组)及正常肝组织(C组),统计学差异显著;肝癌组织(A组)IDO mRNA含量略高于正常肝组织(C组),差异性不显著。结论肝癌细胞诱导其局部淋巴细胞过度表达IDO,以形成局部免疫耐受,可能是肝癌复发转移的主要原因。

CTLA4Ig基因修饰的树突状细胞抑制角膜移植排斥反应的机制研究

目的研究CTLA4Ig基因修饰的树突状细胞(DC)抑制角膜移植排斥反应的机制。方法采用脂质体转染法将质粒CTLA4Ig转入DC,用RT-PCR检测转染前后DC中吲哚胺2,3二氧化酶(IDO)的变化,CCK8检测CTLA4Ig-DC对同种异体T细胞的增生的影响,用AnnexinV/PI双染色流式细胞术检测L-色氨酸对CTLA4-DC功能的影响,建立大鼠同种异体角膜移植模型,分别在术后注入DC和DC+L-色氨酸于受体体内,观察疗效。结果转染CTLA4Ig后促进DC上IDO的表达,CTLA4-DC在体外能诱导同种异体T细胞凋亡,而L-色氨酸能有效拮抗CTLA4-DC的功能,动物实验中DC+L-色氨酸组大鼠角膜植片的存活时间较DC组缩短(P<0.01),且颌下淋巴结内未见明显T细胞凋亡。结论CTLA4-DC可能通过降低局部色氨酸浓度,从而延长角膜植片的存活时间。

间充质干细胞和Stro-1^+亚群免疫抑制的比较及IDO1、IDO2在其中的作用

目的:比较间充质干细胞(MSC)和经Stro-1抗体分选的Stro-1+MSC对淋巴细胞增殖反应的影响;探讨吲哚胺2,3二氧化酶1(IDO1)和IDO2在上述两种间充质干细胞免疫调节功能中的作用。方法:从全髋关节置换术患者的近端股骨粉碎物中得到细胞悬液,培养MSC,并筛选Stro-1+MSC。体外设立单向混合淋巴细胞反应(MLR)体系,分别加入1×103～5×104个经照射的Stro-1+MSC或MSC,检测对T淋巴细胞增殖反应的影响。再分别加入IDO1和IDO2的特异性抑制剂L-1MT和D-1MT,检测T淋巴细胞增殖反应的变化;以实时定量PCR法比较IDO1、IDO2在Stro-1+MSC和MSC中的表达,以GAPDH作为内参照基因。结果:(1)不同剂量组,Stro-1+MSC对MLR的抑制效应均显著强于相同剂量的未经分选的MSC(P<0.05);(2)加入L-1MT后,Stro-1+MSC和MSC对MLR的抑制作用均显著减弱(P<0.05),而加入D-1MT后Stro-1+MSC和MSC对MLR的抑制作用与未加入抑制剂的对照组相比无显著变化(P>0.05);(3)加入L-1MT后,Stro-1+MSC和MSC对MLR抑制的显著差异不复存在(P>0.05),加入D-1MT后Stro-1+MSC对MLR的抑制作用仍显著强于未经分选的MSC(P<0.05);(4)实时定量PCR检测发现IDO1在Stro-1+MSC中的表达显著高于MSC(P<0.05),而IDO2的表达在两者间无差异(P>0.05)。结论:IDO1在MSC的免疫调节和Stro-1+MSC的强势抑制功能中发挥重要作用,该作用可被IDO1的特异性抑制剂L-1MT所抑制,而IDO2的特异性抑制剂D-1MT无此作用。