2,3-吲哚醌诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡作用及机制

目的观察2,3-吲哚醌(ISA)经Caspase-3途径诱导人神经母细胞瘤凋亡的作用及机制。方法以不同浓度ISA(0、100、200、400μmol/L)作用于SH-SY5Y细胞48 h,采用Hocehst33258/PI荧光染色技术观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western blot方法检测Caspase激活的脱氧核糖核酸酶抑制剂(ICAD)蛋白表达的变化。结果Hochest33258/PI荧光染色可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡形态学特征。100、200、400μmol/L ISA处理组SH-SY5Y细胞的凋亡率均明显高于对照组(F=111.30,P<0.05)。随着ISA浓度的升高,表达活化Caspase-3的细胞数逐渐增加(F=5.622,P<0.05)。Western blot检测到其下游作用底物ICAD被降解。结论ISA能诱导SH-SY5Y细胞凋亡,该作用可能通过激活Caspase-3来实现。

2,3-吲哚醌诱导成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡过程中部分凋亡调控基因的变化

目的:研究2,3-吲哚醌(2,3-dioxoindoline,isatin,ISA)诱导人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的分子机制。方法:体外培养人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞,将SH-SY5Y细胞随机分为对照组和ISA不同浓度(100、200和400μmol/L)处理组,采用Hoechst 33258荧光染色、DNA ladder分析细胞凋亡,RT-PCR检测不同浓度ISA处理后基因VEGF、bcl-2、bax、sur-vivin及p53在mRNA水平上表达的变化,FCM法检测caspase-3蛋白表达的变化。结果:不同浓度的ISA(0、100、200和400μmol/L)作用SH-SY5Y细胞48 h后,在荧光显微镜下观察到400μmol/L ISA组细胞出现典型的凋亡形态学改变:细胞核染色质聚集、碎裂,细胞质浓缩;琼脂糖凝胶电泳显示400μmol/L ISA处理组细胞出现明显的梯状条带。RT-PCR结果显示:随着ISA作用浓度的增加,bcl-2、VEGF和survivin mRNA的表达均逐渐减少(P<0.05),bax mRNA表达水平未见明显变化(P>0.05);而随着ISA浓度的增加,p53 mRNA表达水平逐渐增加(P<0.05),并呈浓度依赖关系。FCM结果显示,随着ISA作用浓度的增加,活化的caspase-3蛋白表达率分别为18.38%、26.93%和35.66%,明显高于对照组的11.23%(P<0.05)。结论:ISA能明显诱导SH-SY5Y细胞凋亡,其机制可能与ISA促进p53 mRNA转录、抑制bcl-2和survivin mRNA转录以及使细胞内活化的caspase-3蛋白水平增加有关。另外,ISA能抑制VEGF mRNA转录,对抑制肿瘤生长及转移有重要意义。

吲哚-2,3-二酮对醋酸棉酚致生精障碍小鼠的影响

目的观察吲哚-2,3-二酮对醋酸棉酚致雄性小鼠生精障碍模型生精功能的影响。方法雄性昆明种小鼠分为正常对照组、模型对照组和吲哚-2,3-二酮25、50、100 mg·kg^(-1)组(n=8)。醋酸棉酚20 mg·kg^(-1)灌胃30 d制备生精障碍模型。制模同时吲哚-2,3-二酮各剂量组灌胃给予相应剂量30 d后,观察小鼠精子、睾丸发育及生育的影响。结果与空白对照组比较,模型对照组精子密度和活动率均降低(P<0.01),精原细胞、初级精母细胞及精子细胞数目减少(P<0.01);吲哚-2,3-二酮25、50、100 mg·kg^(-1)组精子密度和活动率显著高于模型对照组(P<0.05或P<0.01),吲哚-2,3-二酮25 mg·kg^(-1)组初级精母细胞数目增多(P<0.05),50 mg·kg^(-1)、100 mg·kg^(-1)组精原细胞、初级精母细胞及精子细胞数目均增多(P<0.01),呈剂量依赖性。模型对照组孕鼠1只,胎鼠3只;吲哚-2,3-二酮25 mg·kg^(-1)、50 mg·kg^(-1)和100 mg·kg^(-1)组孕鼠分别为2、3、6只,胎鼠分别为(6.1±2.1)、(7.5±1.7)和(8.6±1.4)只。结论吲哚-2,3-二酮可改善醋酸棉酚致雄性小鼠生精障碍模型的生精功能。