吴茱萸生物碱抗肿瘤活性的研究

目的:研究吴茱萸生物碱的抗肿瘤活性。方法:取从吴茱萸中分离得到的吴茱萸碱粗品,以吴茱萸碱粗品500mg／kg灌胃给予大鼠,考察吸收入血成分;通过离体抗肿瘤活性实验,考察对MCF-7、HL-60、K562、SPC-A-1和NCI-H446等5种肿瘤细胞的影响;通过在体抗肿瘤活性实验,考察吴茱萸碱对小鼠S180、HepA和MFC的影响。结果:大鼠口服吴茱萸碱粗品后吸收入血的主要成分为吴茱萸碱。离体实验发现吴茱萸碱粗品对MCF-7、SPC-A-1、NCI-H446等肿瘤细胞有明显抑制作用;在体实验发现吴茱萸碱粗品对S180、MFC、HepA等小鼠肿瘤细胞有明显抑制作用。结论:吴茱萸生物碱具有很强的抗肿瘤活性。

吴茱萸生物碱的提取及纯化研究

目的以吴茱萸碱和吴茱萸次碱为检测指标,研究吴茱萸生物碱的提取纯化方法并测定其含量。方法采用中性氧化铝柱层析进行纯化,高效液相色谱法(HLCP)测定其含量。结果氧化铝柱色谱的上样量20 g,洗脱剂为醋酸乙酯:二氯甲烷为70∶30,洗脱剂用量为5 BV,洗脱速度为2 BV/h。吴茱萸碱的回归方程:y=5424x+35.60(r=0.992 0),线性范围0.024 0~1.322 0μg,线性关系良好;吴茱萸次碱回归方程:y=1908x-4.628(r=0.995 5),线性范围为0.025 3~1.068 8μg,线性关系良好。吴茱萸总生物碱含量可达到85.66%。结论采用中性氧化铝柱层析提取纯化吴茱萸碱和吴茱萸次碱可行,能得到纯度较高的样品,经济简便,效率较高。

吴茱萸总生物碱的提取纯化及HPLC含量测定

目的:对吴茱萸生物碱进行提取纯化,并测定其含量,为中药外用制剂提供天然透皮促进剂。方法:利用吴茱萸碱和吴茱萸次碱的溶解性,采用浓度为70%乙醇提取吴茱萸生物碱,用中性氧化铝柱层析进行纯化,采用高效液相色谱法测定其含量。结果:吴茱萸碱的回归方程:y=5501x+35.37(r=0.999 5),线性范围为0.027-1.350μg,线性关系良好;吴茱萸次碱回归方程:y=1970x-4.018(r=0.999 5),线性范围为0.021 4-1.070 0μg,线性关系良好。吴茱萸总生物碱含量可达到86.6%。结论:该提取纯化方法所得样品纯度高,达到了提取有效部位要求,可为中药外用制剂选择天然透皮促进剂提供参考。

吴茱萸总生物碱对大鼠肝纤维化的防治作用

目的研究吴茱萸总生物碱(total alkaloids ofEvodiarutaecarpa,TAE)对四氯化碳(carbon tetra-chloride,CCl4)致大鼠实验性肝纤维化的防治作用,探索其作用机制。方法采用40%CCl4皮下注射12周复制大鼠肝纤维化模型,检测各组大鼠血清丙氨酸转氨酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST),层黏连蛋白(laminin,LN)、透明质酸(hyalurnic acid,HA)、Ⅲ型前胶原(precollagen typeⅢ,PCⅢ)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和肝组织中羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)水平,并对肝脏进行病理学检查。结果模型组大鼠肝脏有明显胶原沉积、脂肪变性和肝纤维化,部分大鼠形成完整的假小叶;血清ALT、AST、MDA、SOD、LN、HA、PCⅢ和肝组织中Hyp含量明显高于正常组(P<0.05,或P<0.01)。给药10周末,TAE 50,100mg/kg组肝小叶结构明显改善,脂肪变性减轻,胶原纤维间隔减少,ALT、AST、MDA、LN、HA、PCⅢ及肝组织中Hyp水平明显下降。结论TAE 50,100 mg/kg灌胃给药对CCl4致大鼠实验性肝纤维化有保护作用,其作用机制与抗脂质过氧化有关。

吴茱萸中有效成分对大肠杆菌代谢作用的微量量热法研究

从中药吴茱萸中提取了两种有效成分吴茱萸生物碱和吴茱萸内酯,用瑞典产的2277型热活性检测仪测定了不同浓度的吴茱萸生物碱和吴茱萸内酯对大肠杆菌的代谢作用,并处理得出了最佳促菌浓度和最小抑菌浓度．

3种生物碱透皮促进剂对阿魏酸体外经皮渗透的影响

目的考察吴茱萸生物碱、芥子碱硫氰酸盐、盐酸小檗碱对阿魏酸的透皮促渗效果,筛选有效的透皮吸收促进剂,提高阿魏酸的透皮速率。方法采用YB-P6型智能透皮试验仪,以小鼠离体腹部皮肤为渗透屏障,采用HPLC法对阿魏酸进行测定,考察3种促进剂对阿魏酸累积渗透量、透皮吸收速率、透皮时滞等体外透皮吸收动力学参数的影响。结果吴茱萸总生物碱、芥子碱硫氰酸盐、盐酸小檗碱的渗透速率分别为:9.086 1、26.396 0、8.663 9μg(cm2·h),增渗倍数(ER)分别为:12.79、4.40、4.20,透皮时滞分别:0.03、0.74、1.50 h。结论 3种天然透皮促进剂均能明显促进阿魏酸的透皮吸收,为研究其透皮给药提供参考依据。

吴茱萸有效部位的提取纯化及含量测定

目的:对吴茱萸挥发油、吴茱萸总生物碱进行提取纯化,使其纯度达到有效部位的要求。方法:采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,采用浓度为70%乙醇对挥发油提取后的药渣提取吴茱萸总生物碱,用中性氧化铝柱层析进行纯化,采用可见-紫外分光光度法测定含量。结果:吴茱萸碱和吴茱萸次碱分别在0.404-4.040μg/m L和0.484-5.808μg/m L范围内呈良好的线性关系,回归方程分别为A=0.193C+0.0231(r=0.999 9)和A=0.1327C-0.0012(r=0.999 8),平均回收率和RSD分别为100.3%、99.6%和1.80%、1.12%,吴茱萸挥发油、吴茱萸总生物碱含量分别为0.38%和80%以上。结论:该提取纯化方法所得样品纯度高,达到了有效部位要求。

不同生物碱透皮吸收促进剂对芍药苷透皮吸收的影响

目的考察吴茱萸总生物碱、芥子碱硫氰酸盐、盐酸小檗碱3种促进剂对芍药苷的体外透皮渗透效果,筛选有效的透皮促渗剂,提高芍药苷的透皮速率。方法以小鼠离体腹部皮肤为渗透屏障,采用HPLC法对芍药苷进行含量测定,考察3种促进剂在12 h内对芍药苷累积渗透量、透皮吸收速率、透皮时滞等体外透皮吸收动力学参数的影响。结果吴茱萸总生物碱、芥子碱硫氰酸盐、盐酸小檗碱的渗透速率分别为0.543 9、0.993 0、3.709 9 g/(cm^2·h),增渗倍数(ER)分别为1.50、2.74、10.22,透皮时滞分别为2.10、1.12、0.34 h。结论 3种天然透皮促进剂均能明显促进芍药苷的透皮吸收,为研究其透皮给药提供参考依据。

Simultaneous determination of seven alkaloids and two flavonoid glycosides in Wuzhuyu decoction by RP-HPLC-DAD

A reversed-phase high-performance liquid chromatography （RP-HPLC） method with diode array detector was established to simultaneously determine nine bioactive compounds in Wuzhuyu decoction, namely dehydroevodiamine, isorhanmetin-7-O- rutinoside, 10-hydroxyrutaecarpine, diosmetin-7-O-13-D-glucopyranoside, evodiamine, rutaecarpine, 1-metbyl-2-n-nonyl-4（1H） quinolone, evocarpine, and dihydroevocarpine. The RP-HPLC assay was performed on a reversed-phase Cl8 column with a gradient elution. The mobile phases consisted of methanol and water containing 1% （v/v） acetic acid. The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was set at 300 nm. All calibration curves showed good linearity （r2〉0.9941） within test ranges. The results of intra-day precision, inter-day precision, and accuracy were satisfactory. The overall recoveries were in the range of 90.13%-102.48%. The method was successfully applied to quantify nine bioactive compounds in six samples. Baseline resolution for all nine major compounds was achieved. This method could be used as a suitable quality control assay for Wuzhuyu decoction.