含hup基因的质粒在催娩克氏杆菌中的稳定性及吸氢酶的表达

以质粒 pKT2 30为载体 ,亚克隆大豆根瘤菌吸氢酶结构基因 (hupSL )片段 ,构建成嵌合质粒pKH1。将质粒分配系统基因 ( parDE)片段和吸氢酶结构基因 (hup )片段插入载体质粒pRK415 ,构建成质粒 pRKBH。质粒 pKH1、pRKBH和载体 pRK415经转化和三亲本杂交 ,得到DH5α/pHR11、DH5α/pRKBH、E12 0 1/pKH1、NG13/pKH1(NGH999)、NG1390 /pRK415、NG1390 /pHR11、NG1390 /pRKBH和NG1390 /pKH1(NGH982 )等接合子。稳定性分析发现 ,质粒 pKH1在催娩克氏杆菌中传 80代后仍有92 %以上的菌株含此质粒 ,说明质粒 pKH1有较高的稳定性。吸氢酶活性分析表明 ,H2 诱导接合子NGH999和NGH982吸氢酶活性高表达 ,同时固氮效率和固氮酶活性也高。低碳源浓度更有利于接合子吸氢酶活性的表达和固氮效率的提高。接合子NGH982具有耐铵的基因 。