吸氧预处理对大鼠大脑皮质星形胶质细胞的影响

目的观察吸氧预处理对大鼠大脑皮质内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,探讨吸氧预处理产生的脑缺血耐受与星形胶质细胞的关系。方法雄性SD大鼠6只,随机分为两组:吸氧预处理组和对照组各3只。吸氧预处理组大鼠吸入1000ml/L氧气,持续24h。间隔24h后经心脏多聚甲醛灌注,取脑,固定,冷冻切片机冠状切片;对照组大鼠不给予吸氧预处理,吸空气24h,余同吸氧预处理组。用免疫组化法(ABC法)进行免疫组化染色,观察胶质原纤维酸性蛋白在大鼠大脑皮质的表达,比较两组大鼠的表达差异。结果吸氧预处理组大鼠各部大脑皮质内胶质原纤维酸性蛋白阳性细胞明显增多(P<0.05),包括枕皮质(t=8.32)、压后部皮质(t=6.17)、顶皮质(t=4.76)、额皮质(t=4.93)、皮质前(t=6.17)和后肢区(t=7.48)等,细胞分布密集。胶质细胞形态亦与对照组不同:胞体肥大,突起粗而长,染色深。对照组大鼠大脑皮质内GFAP阳性细胞呈散在分布,阳性细胞的胞体小,突起细而短,染色浅淡。结论吸氧预处理可以明显刺激大鼠大脑皮质GFAP的产生,使星形胶质细胞处于激活状态,与诱导脑缺血耐受的产生有关。

吸氧预处理对大鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用

目的 研究吸入不同时间 10 0 % O2 能否诱导脑缺血耐受而对脑缺血再灌注损伤产生保护作用 .方法 6 3只 SD大鼠随机分为 7组 (每组 n=9) :即 A组 (对照组 )于缺血前 2 4h吸空气 2 4 h;B,C和 D组分别于缺血前 2 4 h连续吸 10 0 %O2 2 4 ,12和 6 h;E,F和 G组分别连续吸 10 0 % O2 2 4 ,12和 6 h. A,B,C和 D组于吸氧结束后 2 4 h造成脑缺血 ;E组于吸氧后即刻造成脑缺血模型 ;F组间隔 12 h;G组间隔 18h后造成脑缺血 .局灶性脑缺血模型采用 3- 0尼龙线线栓法栓塞大脑中动脉 ,2 h后拔出尼龙线使血液再灌注 .脑缺血 2 h和再灌注后 2 4 h行脑功能障碍评分 ,并处死动物取大脑行TTC染色测量脑梗死容积 .结果 B组的脑功能障碍评分与A组相比显著降低 (P<0 .0 5 ) ,C,D,E,F和 G组与 A组相比无显著性差异 ;脑梗死容积 B组 (10 4 .8± 6 2 .1) mm3显著小于 A组 (199.0± 6 9.6 ) mm3(P<0 .0 1) .吸 10 0 % O2 12 h及6 h组及吸 10 0 % O2 2 4 h后即刻造成脑缺血组与对照组相比其脑梗死容积无明显差异 .结论 本实验首次证实连续吸10 0 % O2 2 4 h且间隔一定时间后能模拟缺血预处理对大鼠短暂性脑缺血产生保护作用 .

吸氧预处理对大鼠局灶脑缺血神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax的影响

目的观察吸氧预处理对大鼠局灶脑缺血再灌注后细胞凋亡及凋亡相关基因Bax、Bcl-2的关系,探讨吸氧预处理的脑保护作用。方法采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉造成局灶脑缺血再灌注模型,用TUNEL染色标记神经细胞凋亡,免疫组化染色观察Bax,Bcl-2蛋白含量。结果与模型组相比,吸氧预处理组半暗区的TUNEL阳性细胞数和Bax蛋白表达阳性细胞数明显下降,(P<0.05),Bcl-2蛋白表达细胞数明显上升(P<0.05)。结论吸氧预处理可通过抑制缺血再灌注后神经细胞凋亡和减少Bax的表达,增加Bcl-2蛋白的表达发挥脑保护作用。

不同强度吸氧预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护效应

目的:探讨不同强度吸氧预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护效应以及吸氧预处理引起的"脑缺血耐受"持续时间的研究。方法:56只雄性SD大鼠随机分为7组(n=8),按吸纯氧的持续时间不同分为6组,对照组吸空气。各组动物均行大脑中动脉阻闭(MCAO)120min后再灌注,24h后行神经功能学评分(Garcia评分),处死动物行TTC染色测定脑梗死容积百分比,检测各组评分及百分比。从上7组中选择梗死容积百分比最小的一组按该方式进行吸氧预处理,进一步实验将40只雄性SD大鼠以吸氧预处理和MCAO之间的间隔时间不同,随机分为5组(n=8)对照组吸空气,MCAO24h后进行Garcia评分和测定脑梗死容积百分比。结果:吸100%O2、8h、3次,1次/d,和吸100%O2、8h、1周,1次/d,Carcia评分明显高于对照组7.5±0.37(P<0.05)分别为11.7±0.32和12.4±0.36而且脑梗死容积比明显低于对照组0.48±0.057(P<0.05)分别为0.21±0.07与0.20±0.09;吸氧8h、1周,1次/d1周后缺血前24h强化一次预处理再进行MCAO与对照组相比Carcia评分高于对照组,脑梗死容积比低于对照组,而吸氧8h、1周,1次/d1周后进行MCAO处理与对照组无差异。结论:吸100%O28h、3次1次/d和吸100%O2、8h、1周,1次/d可以有效地减轻脑缺血再灌注损伤,起到很好的脑保护作用。吸氧预处理引起"脑缺血耐受"有持续效应,但随时间延长呈减弱趋势,1周后需强化1次预处理进行"唤醒"。

吸氧预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤AIF核转移的抑制作用

目的探讨吸氧预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤凋亡诱导因子(AIF)核转移的影响,揭示吸氧预处理治疗的分子机制。方法将78只SD大鼠随机分为3组:缺血再灌注组、吸氧预处理组、假手术组。缺血再灌注组用线栓法制作大鼠大脑右侧中动脉阻塞模型,2 h后实现再灌注。吸氧预处理组术前24 h持续吸入100%纯氧24 h。假手术组除不插入线栓外其它步骤同模型组。按再灌注时间再分为12 h、24 h、48 h组,用免疫组织化学和免疫印迹(Western-blot)法,检测缺血侧海马CA1区AIF核移位情况。结果免疫组化染色和Western blot检测可见吸氧预处理组和缺血再灌注组在不同时间点AIF蛋白发生核移位,AIF阳性细胞数及AIF蛋白含量较缺血再灌注组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论吸氧预处理对脑缺血再灌注损伤神经细胞保护作用,其机制之一可能是对AIF核移位的抑制。

长时程吸氧预处理对大鼠脑缺血再灌注后听皮层损伤的影响

目的:探究长时程吸氧预处理(SOP)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(IR)后听皮层损伤的影响。方法:将45只雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、缺血再灌注组(IR)与长时程吸氧预处理组(SOP)。线拴法制备大鼠局灶性脑缺氧模型,Longa法对神经功能缺失进行评分;采用听性脑干诱发电位仪检测各组大鼠听性脑干反应(ABR),采用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测各组大鼠脑梗死体积,TUNEL法检测听皮层细胞凋亡;免疫组化法检测听皮层葡萄糖调节蛋白78(GRP78)与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12(caspase-12)表达;Western Blot检测听皮层细胞磷脂酰肌醇3-激酶-丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路中PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达。结果:相比sham组,IR组神经功能缺失严重(P <0.05)、脑梗死体积增加(P <0.05)、听性脑干反应阈值显著增加(P <0.05)、神经细胞凋亡增加(P <0.05)且GRP78与caspase-12蛋白表达均明显上升(P <0.05)、HE染色显示细胞核深染、固缩以及细胞空泡变性、间质水肿;相比IR组,SOP组神经功能缺失有所缓解(P <0.05)、脑梗死体积显著减小(P <0.05)、听性脑干反应阈值显著减小(P <0.05)、神经细胞凋亡减少(P <0.05)且GRP78与caspase-12蛋白表达明显下降(P <0.05)、HE染色显示空泡变性与间质水肿明显减轻。Western Blot结果显示:与sham组相比,IR组PI3K和p-Akt蛋白表达明显降低(P <0.05);与IR组相比,SOP组PI3K和p-Akt蛋白表达明显升高(P <0.05),而3组间Akt蛋白表达的差异无统计学意义(P> 0.05)。结论:长时程吸氧预处理能够减少大鼠缺血再灌注引起的脑梗死与听力损失,其机制与大脑听皮层中GRP78表达的上调和caspase-12表达的下调以及激活PI3K/Akt信号转导通路相关。