吸附交联法和包埋法固定化混合酶研究

对从自然界分离得到的Microbacteriumsp.OU01进行发酵,制得粗酶液(壳聚糖酶和β-D-氨基葡萄糖苷酶混合液),采用吸附交联法及包埋法对其进行固定,研究其固定化的最优条件和固定化酶的酶学性质。结果表明,游离混合酶液的最佳pH为5.6,最适反应温度为50℃。吸附交联法固定化酶的最佳条件为:戊二醛体积分数5.0%,加酶量15mL(49.51U/mL),固定化时间6h。该条件下制得的固定化酶的最适pH为4.5,最适反应温度为60℃。包埋法固定化酶的最佳条件为:海藻酸钠质量浓度10g/L,CaCl2质量浓度15g/L,加酶量为1mL(50.35U/mL)/5mL质量浓度10g/L海藻酸钠,固定化时间20min。该条件下制得的固定化酶的最适pH为5.0,最适反应温度为50℃。固定化酶酶解壳聚糖所得产物中含D-氨基葡萄糖,说明粗酶液中的壳聚糖酶和外切-β-D-氨基葡萄糖苷酶被同时固定。通过对游离酶和固定化酶稳定性的研究,表明吸附交联固定化酶更适于工业化应用生产D-氨基葡萄糖。

吸附—交联法固定胰蛋白酶及在澄清啤酒中的应用

胰蛋白酶的固定化采用吸附—交联法。在单因素试验基础上 ,通过正交试验 ,获得了胰蛋白酶固定化的最佳条件 :酶与载体体积比为 2∶ 1,吸附时间为 10 h,p H=4 .5 ,缓冲液浓度为 0 .0 5 mol/ L,戊二醛的质量分数为 0 .1%。此条件下制得的磁性酶活力回收在 5 0 %左右 ,相对酶活力达 74 % 。

壳聚糖作载体制备固定化酶的方法

综述了以壳聚糖为载体制备固定化酶的几种主要方法及其特点.

糖化酶固定化技术在糯米酒生产中的应用

采用吸附交联法 ,以Al2 O3为载体、戊二醛为交联剂 ,研究了糯米酒酿造过程中糖化酶的固定化技术及固定化酶的性质。结果表明 ,加酶量及戊二醛的浓度对酶固定化有重要影响 ,其中酶浓度为 1 80IU/mL时 ,酶活力回收率为 79 0 0 %,交联剂戊二醛浓度为 1 5 %时 ,相对酶活力为86 86%。另外 ,固定化酶的最适pH值为 4 5 ,最适温度为 5 5℃。

蛋壳作载体固定化脂肪酶

研究了蛋壳作载体,吸附交联法固定化脂肪酶的最佳工艺;C_(酶)=0.12g·g^(-1)cor,t_(吸附)=30min,pH_(交联)=6.2,t_(温度)=室温,得到的最大固定化酶活力为29.41U·g_(car)^(-1);并考察了该固定化酶的稳定性:pH=9.0,t=35℃,交联后的固定化酶重复使用6次后活力仍保贸53％。

膨化大豆纤维固定化AS1.398中性蛋白酶

以膨化大豆纤维为载体 ,采用吸附 交联法固定化AS1 398中性蛋白酶 ,酶活力回收率为 4 5 % ,固定化容量为 182mg蛋白酶 / g载体 ,比活力为 90 0U /mg ,与自由酶相比较有显著提高 ,固定化酶的最适 pH由 7 0碱移至 7 5 ,最适温度由原酶的 5 0℃拓宽至 5 0～ 65℃ ,固定化酶与底物的亲和力较自由酶有所下降 ,米氏常数由自由酶的 0 0 6%变为 0 1%酪蛋白 。

壳聚糖交联介孔二氧化硅固定化β-葡萄糖苷酶生物转化淫羊藿苷研究

目的制备壳聚糖交联SBA-15型介孔二氧化硅(SBA-15)固定化β-葡萄糖苷酶(β-Glc),促进淫羊藿苷高效转化为稀有宝藿苷I。方法采用吸附-交联法将β-Glc固定在壳聚糖交联SBA-15上,以载酶量和相对酶活力为评价指标,对其固定化条件进行优化;采用透射电子显微镜(TEM)、扫描电子显微镜(SEM)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)和N2吸附-脱附分析法对固定化酶进行表征,并对其酶泄露行为进行考察;以淫羊藿苷为底物,以游离酶为对照,考察固定化酶的最适酶解条件、酶解动力学和重复利用性。结果制备交联SBA-15固定化β-Glc的最佳p H值为6.0,固定化时间为8h,酶质量浓度为7 mg/mL;固定化酶的酶活力为439.2μmol/(h·g),载酶量为1.120 g/g载体,最适酶解条件为pH 6.0,转化温度50℃,底物质量浓度0.5 mg/mL,转化时间8 h,酶解动力学参数最大反应速率(V_(max))为10.24μg/min,米氏常数(K_(m))为16.15 mmol/L,重复利用5次后残余酶活大于80%。结论制备的交联SBA-15固定化β-Glc载酶量高、转化能力强、重复利用性好,可用于高效获取宝藿苷I。