外源细菌添加对红壤吸附病毒的影响

污水中病毒往往与一些可溶性有机物质、无机胶体及菌体细胞同时存在,但很少有研究考虑菌体细胞及其分泌物对环境中病毒去向的影响。从3株代表性菌株培养液中分别获取菌体细胞及其分泌的胞外聚合物(EPS),其目的是为了:(1)比较不同红壤的病毒吸附能力;(2)明确细菌存在对红壤吸附病毒的影响;(3)评估菌体细胞及EPS影响红壤吸附病毒的相对作用权重。结果表明,4种经过灭菌处理的红壤中,红黏土和赤红壤对病毒的吸附容量最大,其次为砖红壤,而红壤土的吸附能力最弱。菌体细胞对红壤吸附病毒的影响很小,在某种土壤中甚至有促进病毒吸附的趋势,但EPS或EPS与菌体细胞同时存在显著降低了红壤对病毒的吸附能力,其降低比例分别达36%和30%,表明细菌存在降低土壤吸附病毒的现象主要由其分泌物EPS导致。本研究结果表明在评估某一介质对病毒的吸附能力时必须同时考虑细菌存在的影响,否则有可能高估其吸附容量。

纳米颗粒吸附排除病毒的理论探讨及应用研究

纳米技术可制备出与病毒同样大小的纳米颗粒。纳米颗粒可穿透血管壁进入血液，利用高比表面积产生的吸附力吸附大量病毒成微米级别的团聚颗粒，进而可被巨噬细胞捕捉吞噬，最后被整体代谢排除。据此以上，提出纳米颗粒吸附代谢排除病毒法的假说，并以微纳米尺寸的甘草、茶叶颗粒为吸附体，通过安全实验和临床试验等多方面的研究，取得了大量支持此假说的数据和结果。

重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白p239特异性吸附、侵入HepG2细胞并阻断野病毒对肝细胞的感染

By using Western blot and immunofluorescence assays,the recombinant HEV capsid protein p239 was found specifically attached to the HepG2 cell surface and entered to the cytoplasm with the increase of incubation temperature.Pre-mixture of wild-type HEV with p239 blocked the infectivity of the virus on primary cultured human hepatocytes and HepG2 cells,indicating that p239 and HEV competed the same targeting site on these cells.These data provide evidence that p239 has a similar cell surface structure with wild-type HEV.

栀子提取物ZG对单纯疱疹病毒1型细胞吸附的影响

采用负染技术,借助高倍电子显微镜观察栀子提取物ZG作用后,病毒颗粒及其病毒吸附蛋白(virus attach-ment protein,VAP)的变化,考察药物是否直接改变或破坏病毒包膜蛋白的结构,使其失去感染性;采用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记病毒,以肝素钠为参照,借助冷却慢扫描电荷耦合器件荧光成象技术,用Aquacomos软件进行图象分析,以探讨栀子提取物ZG不同加药方式对HSV-1吸附量的影响。结果表明栀子提取物ZG对HSV-1包膜表面的VAP无直接破坏作用,不影响病毒对Hep-2细胞的感染性;先加入肝素钠再进行病毒吸附及肝素钠病毒同时加入培养细胞这两种用药方式可明显减少细胞表面病毒的吸附量;栀子提取物ZG各种不同加药方式均能阻止HSV-1对Hep-2细胞表面的吸附,使病毒吸附量减少。

应用PCR从汉坦病毒吸附的人外周血特异性B细胞扩增抗体可变区基因

应用ＰＣＲ从汉坦病毒吸附的人外周血特异性Ｂ细胞扩增抗体可变区基因许国双白雪帆杨为松黄长形张文彬李光玉（第四军医大学唐都医院传染科，西安７１００３８）９０年代发展起来的噬菌体抗体库技术，可绕过免疫和杂交瘤技术，直接用人外周血淋巴细胞（ｈＰＢＬ）扩增抗体...

Grp78/Bip介导戊型肝炎病毒衣壳蛋白对宿主细胞的吸附

目的探讨Grp78/Bip在戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白进入宿主细胞过程中的作用。方法采用pull-down和免疫共沉淀技术进一步验证p239与Grp78/Bip的相互作用;采用激光共聚焦显微镜技术检测p239与细胞膜表面Grp78/Bip共定位情况;采用原核表达纯化的Grp78/Bip蛋白封闭p239的Grp78/Bip结合位点,检测其阻断p239吸附细胞的效果。结果p239与Grp78/Bip可以直接结合,而且这种结合是可逆的生理性结合;p239与Grp78/Bip在细胞膜上存在部分共定位;Grp78/Bip能部分阻断p239对肝细胞的吸附。结论Grp78/Bip参与并介导HEV衣壳蛋白对宿主细胞的吸附。

4种病毒在细胞上达最大吸附量所需时间测定

为确定鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)弱毒、鸡马立克氏病毒(MDV)弱毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)以及猪伪狂犬病毒(PRV)在细胞上达到最大吸附量所用时间,通过观察病毒在细胞上吸附不同时间后的细胞病变情况来测定病毒在该细胞上达到最大吸附量所用时间。结果表明:IBDV、MDV、PRRSV以及PRV 4种病毒在细胞上吸附一定时间后,细胞病变随着吸附时间的延长而加重,分别在60、120、60、60min时达到峰值。37℃孵育条件下,IB-DV在CEF上的吸附量在60min时达到最大值;MDV在CEF上的吸附量在120min时达到最大值;PRRSV在Marc-145上的吸附量在60min时达到最大值;PRV在PK-15上的吸附量在60min时达到最大值。

基于病毒吸附机制的制造知识与设计需求匹配研究

为提高设计人员在设计过程中获取所需制造知识的效率,提出将病毒吸附原理映射至制造知识与设计需求匹配过程中。建立了制造知识的仿病毒模型和设计需求的仿宿主细胞模型,并将基于向量空间模型的TF-IDF算法应用于知识匹配过程,通过应用实例,输出达到匹配阈值的知识供设计人员使用,验证了所提模型及算法的有效性。

从汉坦病毒吸附的特异性B淋巴细胞扩增人抗体可变区基因

从肾综合征出血热恢复期患者外周血中分离人外周血单个核细胞(hPBMNs)贴壁除去吞噬细胞及粒细胞,用汉坦病毒76-118株包被的6孔板吸附分泌抗出血热抗体的特异性B淋巴细胞,提取该种细胞总RNA后,反转录成cDNA,用人抗体重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因的通用引物扩增出VH及VL基因,为今后用噬菌体抗体库技术制备抗汉坦病毒抗体等研究工作奠定了基础。

鹅流感病毒唾液酸受体分布特点及病毒吸附模式

目的:探讨鹅流感病毒唾液酸(SA)受体分布特点、病毒吸附模式及其作用。方法:凝集素组织化学法检测鹅呼吸道和消化道流感病毒SA受体的分布,荧光素Alexa488标记禽流感病毒H9N1和人流感病毒H1N1吸附鹅呼吸道和消化道组织。结果:鹅呼吸道和消化道以表达SAα-2,3半乳糖(Gal)受体为主,SAα-2,3Gal受体在鹅呼吸道气管、支气管、次级支气管和副支气管、消化道结肠以及泄殖腔呈阳性表达,而SAα-2,6Gal受体缺乏或仅弱表达。禽流感病毒H9N1吸附鹅呼吸道气管、支气管、次级支气管和副支气管、消化道结肠以及泄殖腔,但人流感病毒H1N1仅少量病毒吸附副支气管、结肠以及泄殖腔。结论:鹅呼吸道和消化道同时表达SAα-2,3Gal受体,有助于禽流感病毒复制部位由消化道扩展到呼吸道以及各亚型禽流感病毒之间的基因重配,提示鹅在禽流感病毒的起源和进化中可能起重要作用。

miR-196b海绵吸附慢病毒载体的构建及其在骨髓基质细胞系ST2中的表达

目的构建miR-196b海绵吸附慢病毒载体,为研究miR-196b在骨髓基质细胞系中的功能奠定基础。方法根据miR-196b的成熟体序列设计与之互补的串联的六重复序列设计成引物,通过PCR反应将该六重复序列亚克隆至pUC19质粒中,再经酶切连接至pLVX-shRNA2慢病毒载体,利用293T细胞将构建成功的miR-196b海绵吸附慢病毒载体进行病毒包装和滴度测定,pLVX-shRNA2慢病毒作为对照组,miR-196b海绵吸附慢病毒作为实验组,将其感染ST2细胞,观察感染效率,并通过Western blotting检测miR-196b靶基因叉头框蛋白O1(FoxO1)的蛋白水平。结果酶切鉴定和测序结果正确,慢病毒包装所测滴度为1×108PFU/mL,将其感染靶细胞,其感染效率达80%。Western blotting结果显示,与对照组相比,其靶基因FoxO1蛋白表达水平有明显增加(P<0.05)。结论成功构建了miR-196b海绵吸附慢病毒载体,并能有效吸附内源性的miR-196b,从而发挥其抑制作用。

黄芪甲苷体外抗腺病毒作用研究

目的研究黄芪甲苷体外抗腺病毒作用。方法采用细胞病变效应(CPE)抑制实验和噻唑蓝(MTT)比色法观察黄芪甲苷对人腺病毒3型(HAdV3)的抑制作用,激光共聚焦显微镜荧光分析检测黄芪甲苷在病毒生物合成阶段对HAdV3六邻体(hexon)蛋白表达的影响。结果 CPE及MTT结果表明黄芪甲苷对腺病毒有直接灭活作用,同时能够抑制腺病毒的复制和吸附,病毒抑制率与药物浓度呈正相关,但在细胞保护作用方式下黄芪甲苷不能阻断病毒进入细胞。在生物合成阶段黄芪甲苷组与病毒对照组比较hexon蛋白的表达明显降低。结论黄芪甲苷在体外具有抗腺病毒作用,黄芪甲苷抗腺病毒作用可能与其在生物合成阶段抑制hexon蛋白的表达有关。

卷柏多糖抗肠道病毒71型活性及机制研究

目的:研究卷柏多糖对肠道病毒71型(EV71)的抑制作用,并初步探讨其抗病毒机制。方法:测定30%、50%醇沉卷柏多糖对Vero细胞的毒性和对EV71感染致Vero细胞病变的抑制作用,筛选出选择指数(SI)高的卷柏多糖醇沉部位,检测活性高的卷柏多糖部位对EV71的直接灭活作用及对病毒生活周期的影响。结果:30%和50%醇沉卷柏多糖及利巴韦林抑制EV71致细胞病变的IC50值分别为23.62±2.50、10.43±0.38和38.66±4.91 mg/L,SI分别为>169、>384和101,提示50%醇沉卷柏多糖抗EV71活性最好。机制研究显示,50%醇沉卷柏多糖对EV71无直接杀病毒作用;与模型组相比,50%醇沉卷柏多糖可显著抑制EV71对Vero细胞的吸附作用(P<0.05),而对EV71的进入、复制及释放环节无影响。结论:卷柏多糖具有抗EV71活性,可能通过抑制病毒的吸附达到抗病毒作用。

吸咐口蹄疫病毒的壳聚糖微球对动物的安全性试验

天然高分子聚合物甲壳质及脱乙酰甲壳质即壳聚糖在生物界分布广泛。近来的许多研究表明，壳聚糖的螯合和吸附作用使得甲壳质类物在环保、食品、医药和化工方面占有重要位置。壳聚糖的氨基对各种蛋白质的亲和力非常高，可作为酶、抗原、抗体等生理活性物质的载体。本试验以...

猪瘟病毒受体与配体研究进展

病毒受体与病毒配体的结合是病毒吸附和侵染靶细胞的关键步骤,阻断病毒受体与病毒配体的结合,可以有效阻止病毒吸附靶细胞,从而控制病毒感染。因此,开展病毒受体与病毒配体的研究对病毒性疾病防控具有重要意义,目前已经成为病毒学的热点研究领域,从病毒受体和配体角度阐明病毒分子感染机制,为进一步研发病毒性疾病的新型药物和疫苗奠定基础。本文从病毒受体与病毒配体的概念、猪瘟病毒（CSFV）受体和配体的研究进展以及病毒受体与病毒配体相互作用在治疗病毒性疾病中的应用3个方面进行介绍.

抗流感病毒药物的研究进展

流感是流感病毒引起的急性呼吸道传染病。由于抗原变异频繁,疫苗的预防效果不理想,所以,抗流感病毒药物研究显得更加重要。目前,离子通道阻断剂和神经氨酸酶抑制剂正式应用于临床,但有耐药性和部分不良反应;流感病毒吸附抑制剂、细胞 病毒膜融合抑制剂和反义寡核苷酸正处于实验室研究阶段,在体内外实验中有良好的抗病毒活性;RNA干扰在抗流感病毒方面具有诸多优势,已有实验证实小干扰RNA具有抑制流感病毒作用,可能成为新一代抗流感病毒药物。

两种免疫分析方法检测乙肝病毒血清标志物的差异分析

目的:比较酶联免疫吸附试验分析方法(ELISA)和化学发光免疫法(CLIA)检测乙型肝炎病毒血清标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb)的差异。方法:采用ELISA法和CLIA法对2011年1～12月在我院传染病门诊首次就诊300例患者的血清样本进行平行检测乙型肝炎病毒血清标志物,分析两种免疫分析方法灵敏度和阳性结果符合性。结果:CLIA法检测血清HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb检测的灵敏度分别为0.2ng/ml、10mIU/ml、0.1Ncu/ml、1Ncu/ml和0.5Ncu/ml,均高于ELISA法。CLIA法和ELISA法测定300份血样HB-sAg、HBsAb、HBeAg和HBcAb结果差异无统计学意义(P>0.05),CLIA法测定HBeAb差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA法相对于CLIA法测定HBsAg、HBsAb、HBeAg和HBcAb的阳性符合率分别为94.17%、96.23%、97.20%和92.42%,而HBeAb阳性符合率仅为65.52%。结论:采用CLIA检测乙型肝炎血清标志物的灵敏度和符合率优于ELISA法,并且可以直接对血清标志物表达进行定量,值得临床推广应用。

PFT-α对鸡传染性喉气管炎病毒侵染宿主细胞的影响

[目的]研究抑癌基因p53小分子抑制剂PFT-α对ILTV侵染宿主细胞的影响。[方法]用PFT-α处理LMH(鸡肝癌细胞),通过结晶紫染色技术检测细胞感染ILTV 24 h后的细胞死亡情况,通过流式细胞术检测PFT-α对ILTV吸附、进入LMH细胞的影响,通过倒置荧光显微镜和高内涵细胞筛选系统检测PFT-α对ILTV在细胞间扩散的影响。[结果]结晶紫染色表明,PFT-α促进了ILTV感染后的细胞死亡,流式细胞术结果表明,PFT-α对ILTV吸附细胞没有影响,但是促进了ILTV进入细胞。同时,倒置荧光显微镜和高内涵细胞筛选系统检测结果表明,PFT-α对ILTV在细胞间扩散没有影响。[结论]研究初步检测了PFT-α对ILTV侵染LMH细胞过程的影响,为进一步研究ILTV与宿主互作过程提供了理论补充。

PP1和PP2对鸡传染性喉气管炎病毒感染影响的研究

为研究化学小分子SRC抑制剂PP1和PP2对鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)感染宿主细胞的影响,本研究将ILTV接种鸡细胞系LMH作为研究模型,检测了PP1和PP2对ILTV感染各阶段的作用。结晶紫染色结果显示,ILTV感染细胞中,与DMSO处理组相比,PP1和PP2处理组的细胞死亡均明显增多,表明PP1和PP2促进了ILTV感染介导的宿主细胞死亡;高内涵细胞筛选检测分析结果显示,在病毒感染24h时,PP1和PP2处理组EGFP荧光面积显著大于对照组(p<0.05),表明PP1和PP2可以促进ILTV的扩散,并且该现象不受ILTV中和抗体的影响,提示PP1和PP2可以促进ILTV的细胞-细胞间扩散;病毒特异性qPCR检测显示,PP1和PP2处理组的病毒基因组拷贝数与DMSO对照组相比无显著差异,PP1和PP2处理组之间的病毒基因组拷贝数也无显著差异(p>0.05),PP1和PP2对病毒复制无显著影响。为了进一步确定PP1和PP2促进ILTV细胞-细胞间扩散的具体作用方式,本研究利用多种颜色及理化性质不同的染料对LMH细胞膜、细胞质以及ILTV囊膜分别进行染色检测,结果显示PP1和PP2能够促进ILTV进入细胞,但对ILTV吸附细胞和细胞间胞质直接联系无显著影响。本研究初步确定了PP1和PP2影响ILTV感染的具体作用方式,为对其进一步分子机制研究奠定了基础。