吸附精制破伤风类毒素几种效力检定方法的比较

本文提供了用三种效力试验方法检定吸附精制破伤风类毒素的结果。WHO推荐的方法准确性高,但耗用动物过多。中国规程法没有要求用标准品作对照,因此对检品检定的结果,易受季节和动物饲养条件的影响。当前较为合理又简便易行的精破类检定方法是将待检品与标准品同时免疫动物,然后测定其血清抗毒素效价,如待检品的滴度等于或高于标准品即可认为合格。

注射吸附精制白喉 破伤风二联类毒素引起局部化脓1例

计划免疫是预防和控制传染病经济、科学、有效的手段。但由于预防接种使用的生物制品对机体而言是异物,再加上个体差异、使用方法、疫苗质量等因素的影响,少数人在获得免疫的同时,会发生预防接种的不良反应。我院曾收治1例接种吸附精制白喉、破伤风二联类毒素引起局部化脓的患儿,经治疗痊愈。现报告如下。

精制破伤风类毒素产毒及精制工艺的改进

用超滤、硫酸铵二段盐析法取代等电点沉淀法后，精制破伤风类毒素（精破类）的纯度由８０７Ｌｆ／ｍｇＰＮ提高到１８８３Ｌｆ／ｍｇＰＮ，纯度提高一倍以上。使用双胨培养基取代酪素培养基后，产毒水平由４７Ｌｆ／ｍｌ提高到８８Ｌｆ／ｍｌ（ｔ＝６．４６，ｐ＜０．００１）；用新法精制后，精破类纯度分别为１９４９Ｌｆ／ｍｇＰＮ及１７８５Ｌｆ／ｍｇＰＮ（ｔ＝０．３３４，ｐ＞０．０５），引用双胨培养基后可提高产毒水平，但不影响精破类的纯度。

破伤风类毒素精制提纯方法的研究

1985年,我所破伤风类毒素采用六偏磷酸钠酸沉淀——超滤法(简称A法)进行精制,使精制破伤风类毒素的质量有了明显提高。为了进一步提高精破类的质量,尽快达到国际水平,1986年,我们对WHO破伤风类毒素精制提纯法(简称B法)进行了试验研究,并与A法进行了对比。结果表明,

双佐剂包被的破伤风类毒素马匹免疫试验

为提高破伤风免疫马匹的血浆抗体效价,应用不同佐剂配制TT抗原,进行马匹超免疫比较研究;采用FIA和植物油双佐剂包被与单佐剂包被的TT抗原,注射马匹进行超免疫,比较三组血浆的效价;结果显示,双佐剂抗原较单佐剂的免疫效果好,但可能对马匹刺激较强,有待调整注射剂量和免疫程序。

新型佐剂在破伤风抗毒素血浆生产中的应用研究

应用两种新型佐剂(Montan inde ISA 50V和Montan inde ISA 206)分别乳化精制破伤风类毒素制备成油乳抗原,免疫豚鼠三程,并与弗氏不完全佐剂(FIA)进行对比;在弗氏不完全佐剂免疫马匹到第7程后,改换新型佐剂抗原免疫三程(第8、9、10程)。采用小鼠中和试验测定血清效价。结果表明,两种新型佐剂使用安全,稳定性良好,且操作方便;使用Montan inde ISA 50V免疫豚鼠与马匹的免疫效果均有明显优势,Montan inde ISA 206次之,FIA效果相对较差。表明新型佐剂Montan inde ISA 50V的应用前景良好。

磷酸铝吸附的白喉类毒素的抗原指纹

测定了含白喉类毒素（DTd）、破伤风类毒素和灭活脊髓灰质炎病毒的联合疫苗中明矾吸附的白喉类毒素的抗原性。使用了一组分散在DTd上的五个抗原决定簇的单克隆抗体。获得的DTd的抗原指纹显示，联合疫苗成品中其在抗原水平上有稳定性的吸附。

破伤风抗体IgG酶联检测试剂盒的研制

目的 研制检测破伤风IgG的酶联检测试剂盒。方法 以精制破伤风类毒素进一步纯化后作为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗人IgG作为抗体制备ELISA试剂盒,并进行敏感性、特异性及重复性检测。结果 试剂盒敏感性可达0.003 9 IU/ml,特异性达95％以上,重复性好,CV<7％,试剂盒置于37℃、7 d敏感性无明显改变。结论 成功地制备了破伤风抗体IgG酶联检测试剂盒。

人破伤风免疫球蛋白的研制

作者采用吸附破类(5Lf/0.5ml)对245名健康成人进行2～3针基础免疫,再肌注大剂量(36Lf/0.5ml)精破类加强免疫1针,可获得大量高效价免疫血浆。用低温乙醇法制备3批人 TIG,其破伤风抗体效价为240～330IU/ml,较原血浆的抗体浓缩13～18倍,各项生化及生物学指标均符合有关规程要求,制品的稳定性良好。临床验证中,第一阶段观察20名健康成人,肌注 TIG1ml(250IU)后无局部及全身反应。第二阶段观察156例急诊开放性外伤患者,肌注 TIG1ml 后对破伤风病的预防有效。血清学抗体检测也显示 TIG 优于TAT。对1例破伤风患者肌注5,000IU TIG 后,其血清抗体显著上升,症状消失,得以治愈。表明用 TIG预防和治疗破伤风感染是安全有效的。

成人用吸附精制白喉破伤风二联类毒素人体反应及血清学效果观察

为了解成人用吸附精制白喉破伤风二联类毒素 (成人白破二联 )的人体反应及血清学效果 ,于 1999年 3月在北京市朝阳区5所小学对 2 14名小学一年级学生随机分为两组 ,分别接种北京生物制品研究所 (北京所 )、上海生物制品研究所 (上海所 )生产的成人白破二联。人体反应观察结果显示 :接种北京所疫苗 2 4小时全身中、强反应发生率为 2 2 5 % ,局部反应发生率 <7% ;接种上海所疫苗局部与全身中、强反应发生率均 <7%。用间接血凝法检测免疫前后配对血清白喉、破伤风抗毒素含量显示 :北京所疫苗人群免疫后白喉、破伤风抗体较免疫前≥ 4倍增长率分别为 98 9%、96 6 % ,成功率均为 10 0 0 % ;上海所疫苗人群免疫后白喉、破伤风抗体较免疫前≥ 4倍增长率分别为 93 2 %、98 8% ,成功率分别为 97 7%、10 0 0 %。观察结果表明 ,在小学一年级学生中使用上海所生产的成人白破二联是安全有效的。另外 ,根据本次观察 ,免疫前白喉抗体仍保持在较高水平 ,而破伤风抗体已下降至较低水平 ,提示有必要继续观察小学一年级学生加强免疫后血清白喉抗体消退情况 ,并据此考虑是否取消北京市初中一年级白喉类毒素加强免疫 ,同时将高三、中专。

检测破伤风类毒素的酶联免疫吸附法的建立及应用

目的建立定量检测白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产过程中破伤风类毒素（tetanustoxoid，TT）的方法。方法TT免疫家兔以制备高效价血清抗TT抗体。辛酸一硫酸铵沉淀法纯化抗TT多克隆抗体并进行辣根过氧化物酶标记，建立双抗体夹心ELISA法。结果建立的ELISA法与丝状血凝素、百日咳毒素及白喉类毒素无交叉反应，特异性较好。该ELISA法在0．5～16．0Lf／LTT检测区间有最佳线性，决定系数〉0．99。实验内和实验间检测14．0、12．0、6．0、3．0和1．5Lf／LTT，变异系数为4．7％～9．8％，回收率为92．7％～109．0％，精密度和准确度均符合常规质控要求。该法的定量下限为1．5Lf／LTT。结论建立的ELISA法可有效检测破伤风疫苗纯化过程中的TT含量，为破伤风疫苗质量控制奠定了基础。

无针粉末注射破伤风类毒素对小鼠血清IgG抗体的影响

本文以破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)为研究对象,对比自制的无针粉末注射系统与普通皮下注射方式给药对小鼠的免疫效果。考察氢氧化铝吸附破伤风类毒素(Al(OH)3-TT)粉末的制备工艺,并采用光学显微镜和激光粒度分析仪等考察其微粉学性质。结果表明,增加盐浓度、延长吸附时间均可提高吸附药量。NaCl浓度为0.4mol·L-1吸附效果较好,大于0.8mol·L-1,蛋白会发生盐析;反应10min后吸附量趋于稳定。体系pH值及温度在考察的范围内对吸附药量影响不大。根据优化后工艺制备的Al(OH)3-TT平均粒径为(60.6±4.4)μm。将自制的Al(OH)3-TT无针粉末注射剂与普通皮下注射剂对比,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测破伤风抗毒素IgG抗体浓度。结果表明,Al(OH)3-TT(含TT30μg)无针粉末注射小鼠,4周后破伤风抗毒素IgG抗体浓度为(6.19±0.52)U·L-1,8周后为(10.70±0.78)U·L-1,而普通皮下注射组(含TT20μg)分别为(4.25±0.58)、(7.48±0.57)U·L-1,提示自制的Al(OH)3-TT无针粉末注射剂免疫原性较好,为进一步开发破伤风类毒素无针粉末注射剂提供了技术参考。

接种吸附无细胞百白破疫苗的体会

吸附无细胞百白破三联制剂是由无细胞百日咳疫苗原液、白喉类毒素原液及破伤风类毒素原液加氢氧化铝佐剂制成，用于预防百日咳、白喉、破伤风三种疾病。每0．5ml的制剂含无细胞百日咳疫苗效价不低于4．0IU．白喉疫苗效价不低于30IU,破伤风疫苗效价不低于40IU。由于加入了氢氧化铝等吸附剂．这些吸附剂可以增加和加重接种后的副反应。与儿童计划免疫规定接种的其他疫苗相比．百白破疫苗接种后副反应较为常见。如何加强预防接种规范化操作，掌握禁忌证，选择免疫效果好，且安全性高的疫苗．以减少不良反应的发生显得尤为重要。现将护理体会介绍如下：

甲型副伤寒结合疫苗人免疫血清破伤风类毒素抗体亲和力的检测与分析

目的建立甲型副伤寒结合疫苗人免疫血清中破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)抗体亲和力的检测方法,探究甲型副伤寒结合疫苗免疫人体后,免疫系统对载体蛋白质TT的亲和力成熟情况,并分析与免疫后抗体含量增长情况的关系。方法采用间接ELISA检测甲型副伤寒结合疫苗免疫前后血清中TT抗体含量,利用硫氰酸钾(potassium thiocyanate,KSCN)洗脱测定抗体亲和力。检测免疫后抗体含量高增长倍数组(免疫后相比免疫前抗体含量增长>10倍)和低增长倍数组(免疫后相比免疫前抗体含量增长<2倍)血清,计算相对亲和力指数。结果KSCN洗脱对TT与酶标板之间的物理性吸附没有影响(P>0.05)。KSCN的最适洗脱浓度为3.1 mol/L。对于高抗体含量增长倍数组,免疫后相比免疫前抗体亲和力明显成熟,免疫前与免疫后抗体亲和力差异有统计学意义(P=0.0050,P<0.05),对于低抗体含量增长倍数组免疫后抗体亲和力成熟不明显,免疫前与免疫后抗体亲和力差异无统计学意义(P=0.8522,P>0.05)。结论KSCN可用于甲型副伤寒结合疫苗人免疫血清抗体亲和力测定,结果真实、可靠。用单一KSCN浓度洗脱法测定抗体含量差别较大的血清抗体亲和力进行了尝试,免疫前和免疫后血清抗体亲和力都能被良好地测定。对免疫后亲和力明显成熟的高抗体含量增长倍数组,免疫后抗体含量的增长很大程度上依赖于其中高亲和力抗体的增长。