胆汁制钩吻总碱抑制结肠癌细胞增殖的作用研究

目的探讨胆汁制钩吻总碱(胆钩吻总碱)体外抗肿瘤效果,旨在为钩吻减毒后存效的研究提供科学依据。方法通过CCK-8检测观察胆钩吻总碱对人结肠HCT-116细胞、人神经胶质瘤U87细胞、人肝癌HepG2细胞、人肺癌A549细胞的增殖作用,进一步以结肠癌HCT-116为研究对象,以不同浓度胆钩吻总碱(50、100、200μg·mL-1)干预HCT-116细胞,通过流式细胞技术检测其对细胞周期阻滞的影响;Annexin V FITC/PI流式细胞术检测HCT-116细胞凋亡情况;进一步从蛋白水平检测凋亡相关蛋白表达。结果在钩吻总生物碱IC 50浓度下,胆钩吻总碱对U87、A549、HepG2、HCT-116肿瘤细胞的增殖抑制率均高于钩吻总生物碱组,并且各组之间的差异具有统计学意义(P<0.01)。与空白组相比,不同浓度的胆钩吻总碱处理(50、100、200μg·mL-1)可有效降低HCT-116细胞的集落形成,并将细胞周期阻滞在G 2/M期。胆钩吻总碱还能引发结肠癌HCT-116细胞的晚期凋亡,并对凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3起到调控作用。结论胆钩吻总碱可以通过调控结肠癌HCT-116细胞周期和凋亡相关蛋白的表达来抑制其增殖。

注射用尖吻蝮蛇血凝酶在手术创面止血中的有效性及安全性的系统评价

目的:系统评价注射用尖吻蝮蛇血凝酶在手术创面止血中的有效性及安全性。方法:计算机检索PubMed、the Cochrane Library、Embase、中国知网、万方数据库和中国生物医学文献数据库,检索时间为建库至2023年3月,收集注射用尖吻蝮蛇血凝酶用于手术创面止血的随机对照试验(RCT,研究组干预措施为注射用尖吻蝮蛇血凝酶,对照组为安慰剂或空白对照),中文数据库中限定期刊为中国科技论文核心期刊,英文数据库中不限制期刊。由2名研究者对文献进行筛选、提取及偏倚风险评估,使用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果:共纳入19项RCT研究,包括1 384例患者,其中研究组患者716例,对照组患者668例。Meta分析结果显示,有效性方面,研究组方案降低术中出血量(MD=-65.71,95%CI=-81.99~-49.43,P<0.000 01)、缩短止血时间(MD=-27.25,95%CI=-36.73~-17.77,P<0.000 01)的效果优于对照组,差异均有统计学意义;在安全性方面,与对照组比较,研究组患者24 h后纤维蛋白原水平有一定的降低趋势,24 h后凝血酶原时间有一定的缩短趋势,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:现有证据表明,注射用尖吻蝮蛇血凝酶针对手术创面止血具有良好的效果及安全性。因当前所掌握的研究数据在数量和质量方面存在限制,因此,需要未来开展更多高质量的RCT研究进一步验证上述结论。

《给麻风病人的吻》中的生命美学探究

《给麻风病人的吻》是莫里亚克小说创作成熟的表现。莫里亚克在《给麻风病人的吻》中主要讲述了一对青年男女的婚姻悲剧,在其婚姻悲剧后面隐藏着的是物化的社会,自我的丧失等丑恶现象。这些“恶”恰是莫里亚克生命美学的体现,生命因“恶”而萎缩,莫里亚克期望通过“恶”让世人认清现实,实现个体生命的超越,呼唤个体生命本真的美。探析莫里亚克小说《给麻风病人的吻》的生命美学,有助于对莫里亚克思想的深入研究。

口服尖吻蝮蛇毒降纤酶对大鼠纤维蛋白原的影响

目的:探讨尖吻蝮蛇毒降纤酶(DF)灌胃给药后在SD大鼠胃肠道内的分布情况及对血浆纤维蛋白原浓度的变化情况。方法:SD大鼠灌胃尖吻蝮蛇毒DF后观察大鼠体征,检测DF对大鼠的急性毒性作用;采用免疫组织化学法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测尖吻蝮蛇毒DF在大鼠胃肠道组织中的分布情况及其与大鼠纤维蛋白原的量效关系和时效关系。结果:灌胃尖吻蝮蛇毒DF(1000 U/kg)后大鼠未出现明显的中毒反应,DF口服毒性很低;大鼠灌胃DF 3 h后,DF主要存在于十二指肠、胃和空肠组织内;在量效关系实验中,大鼠灌胃DF(200 U/kg)后纤维蛋白原水平显著低于对照组(P<0.05);在时效关系实验中,灌胃第5、第6、第7天的纤维蛋白原水平显著低于对照组(P<0.05),并呈时间和剂量依赖关系。结论:口服尖吻蝮蛇毒DF可以通过胃肠道黏膜吸收进入胃、十二指肠、空肠组织内;口服适量DF可以有效降低大鼠体内的纤维蛋白原水平,连续给药效果更为显著。

大鼻吻鮈胚胎发育特征和初孵仔鱼形态观察

【目的】为建立大鼻吻鮈(Rhinogobio nasutus)规模化人工繁育技术,并为其生产性育苗工艺和种质资源保护等提供科学依据。【方法】采用野生的大鼻吻鮈经人工催产获得受精卵,记录并分析其胚胎及仔鱼发育各时期的形态特征。【结果】大鼻吻鮈成熟卵呈圆球形,浅绿色,为漂流性卵,卵径(0.60±0.08)mm,受精卵吸水充分膨胀后卵径(0.76±0.08)mm。在水温(23.2±1.0)℃,pH 8.71~8.86条件下,受精卵3.67 h发育至囊胚期,5.95 h发育至原肠期,9.55 h胚体形成,13.38 h器官开始形成,19.98 h出现肌肉效应情况,24.05 h心跳出现,40.43 h完成出膜,至仔鱼期。大鼻吻鮈初孵仔鱼全长3.00~4.00 mm,心跳101~132次/min;在水温26℃条件下,仔鱼2 d全部吸收完卵黄,部分泄殖孔已开,3 d全部开口摄食。【结论】利用人工催产的方法记录、分析和描述了大鼻吻鮈的胚胎发育过程,并且成功获得了大鼻吻鮈初孵仔鱼,其胚胎发育过程经历胚盘期、卵裂期、囊胚期、原肠胚期、神经胚期、器官形成期及孵化出膜7个阶段,每个发育阶段又有若干个发育时期。

人吻素1、脂肪酸结合蛋白质4与糖脂代谢指标的相关性分析及其对妊娠糖尿病的早期诊断价值

目的探讨人吻素1、脂肪酸结合蛋白质4(FABP4)与糖脂代谢指标的相关性及其对妊娠糖尿病(GDM)的早期诊断价值。方法选取2018年1月至2022年1月在河北大学附属医院产科门诊建卡的496例孕妇作为研究对象,根据是否发生GDM分为GDM组和正常组。比较两组孕妇的临床资料。采用Pearson相关分析GDM患者人吻素1、FABP4水平与糖脂代谢指标的相关性。采用多因素Logistic回归分析孕妇发生GDM的危险因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析人吻素1、FABP4单独及联合检测对GDM的诊断价值。结果两组孕妇孕前体质量指数(BMI)、孕24周增长体质量、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、稳态模型胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)、空腹血糖(FBG)、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)1 h血糖(1 hPG)、OGTT 2 h血糖(2 hPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹胰岛素(FINS)、人吻素1、FABP4水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,GDM孕妇人吻素1水平与孕前BMI、HOMA-IR、FBG、OGTT 1 hPG、OGTT 2 hPG、HbA1c、TG、FINS水平均呈正相关(P<0.05),与HOMA-β呈负相关(P<0.05);GDM孕妇FABP4水平与孕24周增长体质量、HOMA-IR、TG、LDL-C、FINS水平均呈正相关(P<0.05),与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平、HOMA-β均呈负相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,孕24周增长体质量、HOMA-IR、HOMA-β、FBG、OGTT 1 hPG、OGTT 2 hPG、HbA1c、TG、FINS、人吻素1、FABP4水平升高是孕妇发生GDM的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,人吻素1、FABP4联合诊断GDM的曲线下面积(AUC)为0.865,高于人吻素1、FABP4单独诊断GDM的AUC(Z=4.563、5.681,P<0.05)。结论人吻素1、FABP4对GDM的早期诊断具有重要意义,2项指标联合检测能够有效提高GDM的诊断率。

钩吻总碱诱导慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的机制分析

目的 探讨钩吻总碱对慢性粒细胞白血病K562细胞的抑杀作用及其机制,为其抗白血病研究提供科学依据。方法 以不同浓度钩吻总碱(25、50、100、200、400μg·mL-1)干预K562细胞,MTT法测定其对K562细胞活力的影响;倒置相差显微镜观察其对K562细胞形态的影响;DAPI染色法观察K562细胞核形态变化;Annexin V FITC/PI流式细胞术检测K562细胞凋亡情况;比色法测定caspase-3活性变化;RT-PCR检测Bax和Bcl-2基因的表达水平。结果 钩吻总碱对K562细胞抑制效果呈时间、剂量依赖性,24 h时IC50为122μg·mL^(-1);TAG干预K562细胞后细胞形态逐渐不规则、胞质不清、胞核皱缩,最终胞膜的完整性破坏;DAPI染色发现细胞体积变小,整体皱缩,胞核固缩、生成典型的凋亡小体;Annexin V FITC/PI流式细胞测定显示K562细胞凋亡以早凋为主,存在量效关系;不同浓度钩吻总碱作用于K562细胞24 h后caspase-3的活性提高;RT-PCR检测发现TAG干预后会下调Bcl-2基因表达、上调Bax基因表达,二者均表现出量效关系。结论 钩吻总碱可能通过上调Bax基因表达、下调Bcl-2基因表达,活化caspase-3,从而诱导慢性粒细胞白血病K562细胞发生早期凋亡,抑制其细胞活力。

不同发酵天数赤芝钩吻的毒性及镇痛作用研究

目的比较2批不同发酵天数钩吻的急性毒性及镇痛药效。方法采用改良寇氏法测定发酵14天、21天钩吻半数致死量(LD_(50)),并获取2批不同发酵钩吻的最大安全给药剂量为药效学浓度。采用醋酸扭体法测定不同发酵钩吻对醋酸所致小鼠扭体反应疼痛阈值的影响,ELISA法检测各组小鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平。结果发酵14、21天的赤芝钩吻的LD_(50)分别为10.91 g·kg^(-1)、15.4 g·kg^(-1);2批发酵钩吻对醋酸扭体镇痛模型的镇痛率分别为74%、79%,发酵钩吻显著降低血清炎症因子含量,且批次之间无显著差异。结论2批不同发酵天数赤芝钩吻毒性降低,并具有显著的镇痛作用,2批次之间镇痛药效无显著差异。

基于线粒体COX1和ND1基因顺序的黄河上游大鼻吻鮈遗传多样性分析

为探究黄河上游大鼻吻鮈(Rhinogobio nasutus)群体遗传多样性和遗传分化现状,本研究以永宁、平罗、磴口3个不同地理群体145尾大鼻吻鮈为研究对象,利用线粒体DNA COX1和ND1基因序列进行了遗传多样性分析。结果显示:COX1和ND1基因序列长度分别为1 466 bp、975 bp, A+T含量(57.25%,56.81%)均高于G+C(42.75%,43.19%)含量,具有明显的碱基组成偏向性;3个群体145尾样本中分别界定了11个和9个单倍型,均存在共享单倍型现象。在COX1和ND1基因序列中3个群体的平均单倍型多样性(Hd)、核苷酸多样性(π)及平均核苷酸差异(K)分别为0.745 3、0.001 3、1.841和0.364、0.000 48、0.472,3个群体遗传多样性呈现出磴口群体最高、平罗群体次之、永宁群体最小的特征。基于COX1和ND1的遗传变异分析(AMOVA),表明3个群体中遗传变异均主要来自群体内,且COX1基因序列中磴口群体与永宁群体之间存在显著性明显的遗传分化。基于线粒体COX1和ND1基因单倍型序列,采用邻近法(Neighbor Joining, NJ)构建系统进化树与单倍型网络结过具有一致性,表明3个群体之间无明显的谱系分化,结构比较单一,未发现形成单独分支的群体。中性检验结果显示,大鼻吻鮈进化历程符合中性进化假设,且可能存在群体扩张。因此,为了有效地保护大鼻吻鮈野生资源,建议将大鼻吻鮈从整体上进行就地保护。

中枢性性早熟女童血清神经肽吻素和网膜素-1的表达与骨龄指数和卵巢体积的相关性分析

目的探讨中枢性性早熟女童血清神经肽吻素、网膜素-1的表达与骨龄指数、卵巢体积的相关性。方法选取2022年7月至2023年6月于河北省唐山市妇幼保健院进行治疗的中枢性性早熟女童85例作为观察组。另选取70例同期体检正常女童作为对照组。比较2组相关临床指标、神经肽吻素、网膜素-1水平。采用Logistic回归分析法分析骨龄指数、卵巢体积的影响因素。采用Pearson相关性分析法分析中枢性性早熟女童神经肽吻素、网膜素-1表达与骨龄指数、卵巢体积的相关性。结果观察组神经肽吻素、骨龄指数、卵巢体积高于/大于对照组[(2.68±1.05)μg/L比(0.60±0.20)μg/L、(1.67±0.25)比(1.02±0.06)、(3.68±0.58)cm^(3)比(2.70±0.29)cm^(3)],网膜素-1水平低于对照组[(27±4)μg/L比(70±8)μg/L],差异均有统计学意义(均P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,预测成年身高、雌二醇、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、骨源性碱性磷酸酶、骨钙素、胰岛素样生长因子1、神经肽吻素、网膜素-1为骨龄指数的影响因素(均P<0.001),子宫体积、雌二醇、LH、FSH、神经肽吻素、网膜素-1为卵巢体积的影响因素(均P<0.001)。中枢性性早熟女童神经肽吻素与骨龄指数(r=0.634,P=0.001)、卵巢体积(r=0.533,P=0.001)呈正相关;网膜素-1与骨龄指数(r=-0.569,P=0.001)、卵巢体积(r=-0.459,P=0.001)呈负相关。结论中枢性性早熟女童神经肽吻素表达升高,网膜素-1表达降低,神经肽吻素与患儿骨龄指数、卵巢体积呈正相关,网膜素-1与患儿骨龄指数、卵巢体积呈负相关。

钩吻总碱对肺腺癌细胞增殖和凋亡作用的研究

目的 以人肺腺癌细胞(A549、SPCA1)为研究对象,通过在培养液中加入不同浓度的钩吻总碱(TAG)研究其抗肿瘤作用。方法 采用加热回流、萃取等方法提取TAG,利用薄层色谱法鉴定TAG的提取,通过Incucyte S3活细胞动态分析系统拟合不同浓度的TAG作用A549、SPCA1细胞的细胞融合度并观察A549、SPCA1细胞的形态,采用CCK-8法、集落形成实验检测细胞增殖,Hoechst33258染色、Rhodamine123染色检测细胞凋亡,碘化丙啶单染法检测细胞周期,Western blotting检测凋亡指标蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。结果 经薄层色谱法鉴定成功提取TAG。Incucyte S3活细胞动态分析系统拟合出TAG作用A549、SPCA1细胞的EC50值分别是99.2、82.0μg/mL,由此确定TAG作用A549、SPCA1细胞的低、中、高浓度依次为50、100、150μg/mL,且细胞拍照观察到随着药物浓度增加细胞融合度下降、细胞数目减少。CCK-8法和集落形成实验结果表明TAG抑制A549、SPCA1细胞增殖(P <0.05)。Hoechst 33258细胞核染色实验发现给药组细胞出现核碎裂;流式细胞术检测Rhodamine123探针发现给药组出现荧光信号强度增加,检测细胞周期发现TAG使A549、SPCA1细胞周期阻滞在G_2/M期;Western blot结果显示TAG诱导Bcl-2蛋白表达下调,Bax表达上调、Caspase-3蛋白切割活化增加,通过细胞染色实验、流式细胞术及Western blotting表明TAG促进A549、SPCA1细胞凋亡(P <0.05)。结论 TAG抑制肺腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。

血清黄体生成素基础值联合神经肽吻素水平诊断女童中枢性性早熟的临床价值

目的 探究血清黄体生成素(LH)基础值联合神经肽吻素(Kisspeptin)水平诊断女童中枢性性早熟(CPP)的临床价值。方法 回顾性选取2020年1月至2023年3月浙江省舟山市妇女儿童医院收治的115例CPP女童纳入研究组,同时选取进行健康体检的女童120名纳入对照组。比较两组LH基础值和Kisspeptin水平及临床相关资料;分析女童CPP发生的影响因素;受试者操作特征曲线评估血清LH基础值联合Kisspeptin水平对女童CPP发生的诊断价值。结果 研究组LH基础值、Kisspeptin水平高于对照组(P<0.05)。研究组骨龄、雌二醇、血清卵泡刺激素基础值、催乳素、卵巢体积、子宫体积高于对照组(P<0.05)。LH基础值(OR=1.857)、Kisspeptin水平(OR=2.353)是女童CPP发生的独立危险因素(P<0.05)。血清LH基础值、Kisspeptin及二者联合预测女童CPP发生的曲线下面积分别为0.759、0.730、0.930。结论 LH基础值与Kisspeptin水平在CPP女童血清中异常高表达,是影响女童CPP发生的独立危险因素,LH基础值与Kisspeptin水平联合检测可较好地预测女童CPP的发生。

上海地区长吻鱼危全人工繁育技术研究

为进一步优化长吻鱼危的繁育流程,2021—2023年对上海地区池塘养殖3龄及以上长吻鱼危成鱼进行了全人工繁育技术研究。单独采用促黄体素释放激素类似物(LHRH-A2)对长吻鱼危亲本进行催产:雌鱼分2次注射,第1针催产剂量为2μg/kg,第2针剂量为15~20μg/kg,2针间距12~14 h;雄鱼采用1次注射法,在雌鱼注射第2针的同时进行,注射剂量为雌鱼第2针剂量的一半。3年累计催产雌性亲本230尾,其中成功催产雌性亲鱼186尾,催产率80.9%。受精卵在水温24~26℃条件下孵化,于50 h左右开始出膜。出膜仔鱼在室内水泥池静水充气条件下经8~14 d培育,3年累计培育获得体长1 cm以上的苗种21.41万尾。相比以往长吻鱼危人工繁殖大多采用野生捕捞亲本,本研究采用人工养殖亲本可确保亲鱼数量和进行质量控制,使用单一催产剂和静水孵化方法简化了过去使用混合催产剂和流水孵化的繁琐操作流程,较易实现规模化繁育。

丁酸梭菌对钝吻黄盖鲽幼鱼生长性能、肠道结构和肠道菌群的影响

为研究丁酸梭菌对钝吻黄盖鲽(Pseudopleuronectes yokohamae)幼鱼生长和肠道健康的影响,选取体长(10.28±0.08)cm、体质量(13.72±0.90)g的钝吻黄盖鲽幼鱼共180尾,随机分为试验组(饲料中添加丁酸梭菌菌液)和对照组,开展了为期42 d的饲养对比试验,采用体尺性状测量、肠道组织切片观察和高通量测序等方法,分析了饲料中添加丁酸梭菌菌液对钝吻黄盖鲽生长性能、肠道结构和肠道菌群的影响。试验结果显示,与对照组相比,试验组幼鱼的增重率、特定生长率和肥满度均显著提高(P<0.05),饲料系数显著降低(P<0.05);肠道组织的绒毛长度极显著增加(P<0.01),绒毛宽度显著增加(P<0.05)。高通量测序结果显示,在门和属水平上,试验组和对照组均表现出不同程度的差异;饲料中添加丁酸梭菌可以增加钝吻黄盖鲽幼鱼肠道中潜在有益菌的数量,促进肠道分解、代谢饲料的功能。结果表明,饲料中添加丁酸梭菌能提高钝吻黄盖鲽幼鱼的生长性能,改善其肠道结构,调节肠道菌群的比例,促进肠道健康。

常绿钩吻碱对人结肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨常绿钩吻碱促进人结肠癌HT-29细胞凋亡的机制。方法:常绿钩吻碱体外培养HT-29细胞24 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法评估其对细胞增殖的影响,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法观察HT-29细胞的凋亡情况,蛋白印迹法(western-blot)观察HT-29细胞的B型淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和B型淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)的表达情况。结果:常绿钩吻碱可抑制HT-29细胞增殖,8μg/mL常绿钩吻碱干预24 h后,对HT-29细胞增殖的平均抑制率达58.81%。DAPI染色法观察到常绿钩吻碱可促进HT-29细胞凋亡。western-blot法观察到常绿钩吻碱能降低HT-29细胞Bcl-2蛋白表达(P<0.05),对Bax蛋白表达无明显影响(P>0.05)。结论:常绿钩吻碱能有效地抑制HT-29细胞的增殖,促进HT-29细胞的凋亡,其机制可能与通过Bcl-2/Bax途径诱导细胞凋亡相关。

南美白对虾与长吻鱼危生态混养试验

为研究新型的生态养殖模式,降低南美白对虾单一品种养殖风险,于2022年6—10月开展了南美白对虾与长吻鱼危生态混养试验,并与传统的南美白对虾池塘单养模式进行对比分析。结果显示:单养模式下南美白对虾的产量为(4011.3±1083.6)kg/hm^(2),规格70~90尾/kg,成活率为(69.4±7.9)%。混养模式下虾的产量为(3650.0±663.4)kg/hm^(2),规格40~70尾/kg,成活率为(45.4±5.0)%,单养模式和混养模式虾的成活率差异显著(P<0.05)。长吻鱼危放养规格(91.9±26.8)g/尾,放养密度1500尾/hm^(2),收获规格(449.3±103.7)g/尾,成活率(98.0±1.9)%,混养模式较单养模式获得了29170元/hm^(2)的增收。试验结果表明,混养相对于单养,在几乎没有增加其他养殖成本的情况下,保证了南美白对虾的养殖收益,同时收获了较好的长吻鱼危养殖效益,提高了养殖生产总收益。

疣吻沙蚕繁育及养殖技术

疣吻沙蚕(Tylorrhynchus heterochaetus),俗称禾虫,隶属于环节动物门、多毛纲、游走目、沙蚕科、疣吻沙蚕属。疣吻沙蚕是生殖洄游型物种,在海洋河口进行群浮性集中繁殖,繁育的幼体细小(约150mm),随潮水上涨回到近海有潮感的咸淡水或淡水区域生长,达到性成熟时,又随水流回到海水区域繁殖。在我国主要分布在广东、广西,浙江和江苏也有分布。

钩吻脂氧合酶基因GeLOX1的鉴定及低温胁迫表达分析

近年来,钩吻(Gelsemium elegans)的药用和饲用价值日益凸显,但钩吻在生长过程中不耐低温,挖掘其低温响应基因,为钩吻的抗寒育种研究奠定基础。植物中,脂氧合酶(lipoxygenase, LOX)在种子老化、抗逆境胁迫等方面的生理生化过程中有重要影响。基于课题组构建的钩吻转录组数据库,挖掘响应低温胁迫的钩吻LOX基因,运用RT-PCR技术,从中克隆到一条GeLOX1的cNDA全长序列,对其进行生物信息学、亚细胞定位、基因表达、原核表达及平板胁迫等分析。结果显示,GeLOX1所编码蛋白的氨基酸长度为761 aa,蛋白相对分子质量为87.00 kD,预测为不稳定的亲水性蛋白,含有28个丝氨酸磷酸化位点,22个苏氨酸磷酸化位点和9个酪氨酸磷酸化位点。进化树分析结果表明,GeLOX1属于9-LOX家族的成员。亚细胞定位检测结果显示,GeLOX1蛋白定位于细胞质中。实时荧光定量PCR分析发现,GeLOX1在钩吻的根中高表达,且其在4℃低温胁迫下的表达量呈现下调的趋势。经原核表达诱导后,GeLOX1的重组蛋白在约111 kD处出现目标条带,且重组蛋白的积累量在诱导8 h时达到峰值。此外,平板胁迫试验表明,GeLOX1的原核表达菌株相较于对照组对低温胁迫更敏感。钩吻GeLOX1能够应答低温胁迫。

钩吻中毒的应急检验方法研究及思考

目的探讨钩吻中毒的应急检验方法。方法选取导致2022年3月广东普宁市鸡矢藤煲汤中毒事件的涉案样品为研究对象,采用性状、显微、薄层色谱和液相色谱-质谱鉴别等检验方法鉴定致毒中草药。结果样品外皮具深纵沟及横裂隙,截面具放射状纹理,含有石细胞和草酸钙簇晶,提示其为钩吻。涉案样品与钩吻对照药材及钩吻素子、钩吻素甲对照品在薄层色谱相应位置显相同颜色的斑点,并在液相色谱-质谱中检测到涉案样品含有钩吻素子和钩吻素甲。讨论本次中毒事件是由于误食混入鸡矢藤药材的钩吻而导致。基于长期从事有毒中草药中毒应急检验的经验,总结钩吻等有毒中草药中毒应急检验的常用方法,对有毒中草药监管和应急检验工作提出思考与建议,加强精准识别和快速筛查方法的研究等,为误用有毒中草药中毒应急检验提供参考,以期进一步避免钩吻等剧毒中草药中毒事件的发生。

钩吻总生物碱及常绿钩吻碱的体外抗肿瘤作用及机制

目的探讨钩吻总生物碱(TA)和常绿钩吻碱(SPV)的体外抗肿瘤作用及机制。方法观察低、中、高浓度TA(50、100、200μg/mL)和SPV(10、30、50μmol/L)对人肝癌细胞(HepG2、Bel-7402)、人肺癌细胞(A549)、人结肠癌细胞(HCT-8)形态的影响并实时监测TA和SPV对4种肿瘤细胞的毒性;检测TA和SPV对HCT-8细胞上清液中胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9含量和细胞中磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)(Thr308、Ser473)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、生存素、C/EBP-同源蛋白(CHOP)、免疫球蛋白结合蛋白(Bip)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白表达的影响。结果TA和SPV干预后的4种肿瘤细胞形态均出现体积缩小、细胞核皱缩的现象,细胞活性均出现不同程度的降低,其中TA和SPV对HCT-8细胞的抑制效果最好。TA和SPV干预后的HCT-8细胞上清液中caspase-3、caspase-9含量和细胞中Bax、CHOP、Bip、LC3Ⅱ蛋白表达水平均不同程度升高,p-Akt(Thr308、Ser473)、Bcl-2、生存素蛋白表达水平均不同程度降低。结论TA和SPV对上述4种肿瘤细胞均具有抑制作用,其对HCT-8细胞的抑制效果最好;二者对HCT-8细胞的作用机制可能与促进细胞凋亡、激活内质网应激和细胞自噬有关。