告达庭调控HIF-1α抑制肝癌的作用机制研究

目的:探讨告达庭对肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用及机制。方法:BALB/c小鼠皮下接种H_(22)细胞构建肝癌移植瘤模型,测定告达庭对小鼠肿瘤生长的影响;HE染色观察病理变化;流式细胞术检测免疫细胞比例;免疫印迹法检测蛋白表达;免疫组化和免疫荧光分别检测HIF-1α和CD8^(+)T细胞比例。H_(22)细胞过表达HIF-1α,考察其对告达庭抗肿瘤作用的影响。结果:告达庭能显著缩小肿瘤体积,延长生存期,降低HIF-1α、PDK1、GLUT1表达,增加CTL浸润,降低Treg和T细胞表面耗竭分子PD-1的比例。HIF-1α过表达削弱了告达庭对H_(22)荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。结论:告达庭能抑制H_(22)移植瘤,改善免疫微环境,其机制可能与抑制HIF-1α有关。

告达庭对大鼠肝损伤的改善作用机制研究

目的探讨告达庭改善大鼠肝损伤的作用机制。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组和告达庭低、高剂量组(25、50 mg/kg),每组6只。采用腹腔注射(每周3次,连续8周)二乙基亚硝胺(DEN)复制大鼠肝损伤模型。造模第5周,大鼠灌胃相应药物或0.5%羧甲基纤维素钠,连续4周。检测大鼠血清中肝功能指标[丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总蛋白(TP)和总胆红素(TBI)]及炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1β]水平,观察大鼠肝脏组织病理学形态变化,检测肝脏组织中核因子κB(NF-κB)、78 kDa葡糖调节蛋白(Grp78)蛋白阳性表达水平,检测肝脏组织中内质网应激相关蛋白Grp78、C/EBP同源蛋白(CHOP)、转录激活因子6(ATF6)、肌醇需求激酶1α(IRE1α)的表达水平和蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)磷酸化水平。结果与空白组比较,模型组大鼠血清中ALT、AST、TBI、IL-6、TNF-α、IL-1β水平和肝脏组织中NF-κB、Grp78蛋白阳性表达水平以及Grp78、CHOP、ATF6、IRE1α蛋白表达水平和PERK蛋白磷酸化水平均显著升高(P<0.05),血清中TP水平显著降低(P<0.05);肝小叶结构紊乱,肝细胞肿胀,细胞间分界不明显,且伴随炎症细胞浸润。与模型组相比,告达庭各剂量组大鼠上述大部分指标显著逆转(P<0.05);肝小叶结构较完整清晰,细胞排列趋整齐,炎症细胞浸润也有所减少。结论告达庭对DEN所致大鼠肝损伤具有明显的改善作用,其作用机制可能与抑制内质网应激和炎症反应有关。

告达庭对人胃癌细胞株SGC-7901细胞增殖和凋亡的调节作用

目的研究告达庭(caudatin)对SGC-7901胃癌细胞增殖与凋亡的调节作用及可能的分子机制。方法 MTT法检测告达庭对SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞术分析SGC-7901细胞周期的变化;细胞形态学、琼脂糖凝胶电泳及FITC-AnnexinⅤ/PI双标记检测对胃癌细胞凋亡的影响,免疫印迹实验检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果可明显抑制SGC-7901细胞的增殖,且抑制作用呈时间和剂量依赖性;SGC-7901细胞经告达庭作用24h后,处于G1期的细胞数目增加,而G2期和S期的细胞数目明显减少,并发生明显的凋亡;调节Bcl-2家族相关因子的表达水平和活化caspase-9、caspase-3与告达庭诱导SGC-7901细胞凋亡相关。结论告达庭可抑制SGC-7901胃癌细胞的增殖并诱发凋亡,其分子机制可能与调节Bcl-2与Bax的平衡以及释放CytC,进而促进caspase-9、caspase-3和PARP的降解密切相关。

告达庭诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡的作用(英文)

目的:观察Caudatin体外对人肝癌细胞SMMC7721的作用。方法:采用MTT法测定不同浓度的Caudatin作用于SMMC7721细胞24,48和72 h对其生长的抑制作用。用流式细胞仪以PI单染检测细胞周期、以Annexin V/PI双染检测细胞凋亡,比色法测定Caspase-3酶活力。结果:Caudatin体外能抑制人肝癌细胞SMMC7721的增殖并呈明显的时间和剂量依赖性。Caudatin体外能诱导SMMC7721细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于G0/G1期。Caspase-3的酶活力随着Caudatin体外作用时间的延长先升高并于8 h达到最大,再随时间的变化而降低。结论:Caudatin体外能显著抑制人肝癌细胞SMMC7721的生长,其抗肿瘤作用可能与其抑制肿瘤细胞增殖、阻滞细胞周期于G0/G1期,并通过激活Caspase-3诱导肿癌细胞凋亡有关。

告达庭增强TRAIL诱导的HepG2细胞凋亡

目的:研究C21甾体苷元告达庭对肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的Hep G2肝癌细胞增殖和凋亡的影响,并进一步明确其作用机制。方法:采用MTT法和细胞集落形成实验检测告达庭与TRAIL联合对细胞增殖的影响;TUNEL染色法检测细胞凋亡的变化;免疫印迹实验分析蛋白的表达水平。结果:告达庭与TRAIL联合作用Hep G2细胞24 h后,细胞活力明显下降,细胞增殖受到抑制;同时,两者联用后细胞凋亡数目明显增加,显著高于告达庭和TRAIL单用诱导的细胞凋亡率;与对照相比,告达庭与TRAIL联用促进了caspase-3、caspase-7、caspase-9和PARP的活性切割,而凋亡抑制蛋白survivin的表达则下调。结论:告达庭能够增强TRAIL诱导Hep G2细胞凋亡,其机制可能与激活caspase家族因子的活性切割和抑制survivin的表达相关。

告达庭联合吉非替尼逆转HGF诱导的非小细胞肺癌对EGFR-TKI的获得性耐药研究

目的探讨告达庭联合吉非替尼对肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）诱导的非小细胞肺癌PC-9细胞对吉非替尼耐药的效应及可能机制。方法利用外源性HGF及与MRC-5共培养诱导PC-9细胞对EGFR-TKIs耐药模型;MTT法考察告达庭对HGF诱导的PC-9细胞耐吉非替尼的逆转作用;Western blot检测告达庭联合吉非替尼逆转HGF诱导PC-9细胞耐药的机制。结果外源性HGF和MRC-5均可诱导PC-9对吉非替尼的耐药作用,降低相对抑制率（P〈0.05）;在HGF存在的情况下,单用告达庭（0～32μM）和吉非替尼（1μM）均不能显著抑制PC-9的增殖,而告达庭联合吉非替尼能剂量依赖性抑制PC-9增殖（P〈0.05）。告达庭联合吉非替尼下调Met及PI3K/AKT磷酸化水平（P〈0.05）。结论告达庭能逆转HGF诱导的PC-9细胞对吉非替尼的耐药,其机制可能与其抑制Met/PI3K/AKT通路有关。

大鼠血浆中告达庭的LC-MS-MS测定方法学研究

目的建立大鼠血浆中告达庭浓度的LC-MS-MS测定方法。方法取待测大鼠血浆0.2mL,加入炔诺酮(内标),乙酸乙酯提取、浓缩,取上清液20μL进样分析。流动相为乙腈-水(70∶30),色谱柱为江苏汉邦C18柱(4.6mm×150mm,5μm),流速为1.0mL·min-1,LC-MS-MS多反应离子检测,正离子模式,用于定量分析的离子分别是告达庭:m/z514.1→385.4[M+Na+]和炔诺酮:m/z299.7→108.9[M+H+]。结果告达庭的线性范围为2.5～1000μg.L-1,方法的回收率大于80%,批内和批间的精密度均小于15%,稳定性符合生物样品测定要求。结论该方法经考察符合血浆样品的测定要求,可以应用于血药浓度的测定和药动学研究。

告达庭丙酸酯及丙二酸酯的合成

以耳叶牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex Wight的块根为原料,经乙醇、氯仿提取,经硅胶柱色谱分离获得告达庭单体,并以其为原料,经半合成获得告达庭丙酸酯和告达庭丙二酸酯,以便进一步对其进行抗肿瘤活性研究。以告达庭为原料,在DCC和少量DAMP的催化下与酸反应成酯。结果表明:合成了告达庭丙酸酯和丙二酸酯,结构经1H NMR和13C NMR鉴定,并开展药理活性实验。通过该实验方法能合成告达庭酯类化合物。

新型告达庭酯苷的合成及其抗肿瘤药效学评价

目的合成新型的抗肿瘤活性优于告达庭的酯苷。方法以告达庭、阿司匹林为原料,DCC\DMAP为脱水剂和缩合剂合成目标化合物;以告达庭为对照,MTT法检测目标化合物对肿瘤细胞增殖的影响。结果目标化合物经~1H-NMR、^(13)C-NMR、DEPT谱和元素分析鉴定为3β-乙酰水杨酸告达庭酯苷。结论经骈合原理设计合成的3β-乙酰水杨酸告达庭酯苷具有较告达庭更强的抑制肿瘤细胞增殖作用,且抑制作用呈时间和剂量依赖性。

告达庭抑制卵巢癌生长及其机制的研究

目的研究告达庭(caudation)对卵巢癌生长的抑制作用及其机制。方法细胞实验分为两组,即对照组和告达庭组(30μmol/L告达庭作用卵巢癌细胞SKOV324h)。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA法检测细胞凋亡;Western blot法检测SKOV3细胞中DNMT1、Axin、Bcl-2、cyclinD1蛋白的表达。观察告达庭对卵巢癌细胞内凋亡相关蛋白的表达作用。建立起裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,观察移植瘤的生长,实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因的表达。结果与对照组比较,告达庭可抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖,并促进癌细胞凋亡,呈浓度依赖性;告达庭干预后,DNMT1、Bcl-2及cyclinD1表达均下降,Axin表达上调。在体外移植瘤实验中,告达庭可抑制移植瘤的生长,并抑制卵巢癌组织内DNMT1、Bcl-2及cyclinD1基因表达,上调Axin基因表达。结论告达庭可抑制卵巢癌生长,其机制可能与调控DNMT1/β-catenin信号通路有关。

白首乌中抗肿瘤活性成分告达庭-3-O-β-D-磁麻糖苷在大鼠体内的代谢产物分析

目的研究白首乌中甾苷成分告达庭-3-O-β-D-磁麻糖苷在大鼠体内的代谢情况。方法大鼠单剂量灌胃给予20 mg/kg的告达庭-3-O-β-D-磁麻糖苷,分别收集24 h内的血浆、尿液、粪便和胆汁,样品经处理后,采用UPLC-Q-TOF分析,结合MetabolynxTM软件初步鉴定告达庭-3-O-β-D-磁麻糖苷在大鼠血浆、尿液、粪便和胆汁中的代谢产物。结果在血浆、尿液、粪便和胆汁样品中发现了告达庭-3-O-β-D-磁麻糖苷的原型、水解及去甲基化代谢物,其中尿液中有原型,血浆和胆汁中有水解产物,粪便中有去2个甲基化产物,胆汁中有去1个和去3个甲基化产物。结论告达庭-3-O-β-D-磁麻糖苷在大鼠体内可发生较为广泛的代谢,其中主要代谢类型有水解和去甲基化。

告达庭衍生物抑制人乳腺癌细胞增殖及其作用机制研究

目的:研究告达庭-3-O-β-D-加拿大麻糖苷(Ca-G)对人乳腺癌细胞的作用及其作用机制。方法:采用MTT法研究Ca-G对人乳腺癌细胞株细胞增殖的影响;通过流式细胞术研究Ca-G对人乳腺癌细胞株细胞周期和细胞凋亡的作用;采用western blotting研究Ca-G对细胞周期和细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响。结果:Ca-G能够明显抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7的增殖,并阻滞细胞周期G1期,其机制可能是通过调控G1期关键蛋白cyclin D1发挥作用; Ca-G能通过caspase3/7途径诱导乳腺癌细胞株产生细胞凋亡。结论:Ca-G可有效抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7的增殖。这为告达庭及其衍生物抗肿瘤作用的进一步研究提供了一定的实验基础,也为综合开发C21甾体苷类化合物的临床应用提供一种思路。

告达庭四乙酰半乳糖苷半合成及抗肿瘤活性研究

目的:合成告达庭-β-D-四乙酰半乳糖并研究其抗肿瘤活性。方法:以告达庭为原料,在CdCO3催化下与溴活化的四乙酰半乳糖成苷,MTT法考察其对肿瘤细胞的抑制作用。结果及结论:合成告达庭-β-D-四乙酰半乳糖苷,结构经1H-NMR和13C-NMR鉴定,MTT法测目标化合物对4种受试细胞株均具有一定的抗肿瘤活性,化合物显示其有与阳性对照紫杉醇相当的肿瘤抑制活性。

告达庭下调β-catenin/survivin抑制神经胶质瘤C6细胞迁移实验研究

目的观察告达庭对大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖和迁移能力的影响,并初步探讨其内在的分子机制。方法 MTT法检测告达庭对C6细胞存活力的影响;流式细胞术检测细胞周期的变化;细胞划痕实验及Transwell迁移小室检测告达庭对C6细胞体外迁移能力的抑制作用;免疫印迹实验检测告达庭对C6细胞内β-catenin、Survivin以及细胞周期相关蛋白CyclinD1和Cdk4蛋白表达的影响。结果告达庭能够剂量依赖性地抑制C6细胞的增殖并阻滞细胞于G1期,其机制与下调细胞周期素CyclinD1和Cdk4的表达相关;告达庭给药后,C6细胞的迁移能力明显受到抑制,同时β-catenin及其下游因子Survivin的表达呈显著下降趋势。结论告达庭具有抑制C6细胞的增殖和体外迁移能力的作用,其机制可能与抑制β-catenin蛋白及Survivin的表达相关。

告达庭葡萄糖苷的合成及抗肿瘤活性研究

目的合成告达庭-β-D-葡萄糖苷并研究其抗肿瘤活性。方法以告达庭为原料在CdCO3催化下与溴活化的乙酰葡萄糖成苷,脱保护基得到目标产物,以MTT法考察其对肿瘤细胞的抑制作用。结果合成了告达庭-β-D-葡萄糖苷,结构经1H-NMR和13C-NMR鉴定。结论初步药理实验表明乙酰葡萄糖苷对大鼠胶质瘤细胞C6的抑制作用较强,而告达庭-β-D-葡萄糖苷对C6细胞的抑制作用与原料告达庭相当。

告达庭在大鼠体内的药代动力学研究(英文)

目的:研究化合物告达庭口服给药后在大鼠体内的药代动力学过程。方法:大鼠单次灌胃给予告达庭后,于不同时间点采血以LC/ESI-MS/MS法检测血浆中药物浓度,并计算药代动力学参数。结果:大鼠分别单次口服10,20,40mg·kg-1剂量的告达庭后其半衰期分别为(1.59±1.08),(0.99±0.27),(1.92±1.55)h;AUC0-t分别为(220.6±114.8),(539.1±160.6),(1631.9±915.9)μg·h·L-1;cmax分别为(153.5±79.1),(232.8±119.3),(687.9±245.7)μg·L-1;tmax为(0.36±0.35),(1.33±0.61),(0.96±0.68)h。其AUC与给药剂量间呈现出非线性相关性。结论:在本实验所用剂量范围内告达庭在大鼠体内的动力学过程基本符合非线性动力学特征。

告达庭通过调控menin/β-catenin表达抑制卵巢癌生长

目的研究告达庭对卵巢癌生长的影响及其机制。方法细胞实验分为4组:对照组、低剂量组(15μmol/L)、中剂量组(30μmol/L)、高剂量组(60μmol/L)告达庭作用卵巢癌细胞CAOV324 h。CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测凋亡;Western blot检测相关蛋白表达。采用RNA干扰技术,抑制多发性内分泌腺瘤1型基因编码蛋白(menin)表达,观察告达庭对凋亡相关蛋白的表达作用。建立卵巢癌皮下移植瘤模型,观察瘤的生长,实时荧光定量PCR(realtime PCR)检测凋亡相关基因的表达。结果告达庭可抑制卵巢癌细胞生长,并促进其凋亡;告达庭干预后,Nuclearβ-catenin、DNA甲基转移酶1(DNMT1)、survivin及c-myc表达均减少,而menin表达增加。抑制menin表达,逆转告达庭对相关蛋白的表达作用。在体内实验中,告达庭可抑制移植瘤的生长;抑制menin表达,逆转告达庭对卵巢癌组织内相关基因表达。结论告达庭可抑制卵巢癌增殖,并促进其凋亡,机制可能与调控menin/β-catenin信号通路有关。

双波长HPLC测定青阳参中青阳参苷元和告达庭的含量

目的建立采用双波长HPLC同时测定青阳参中青阳参苷元和告达庭含量的方法。方法采用高效液相色谱法，ZORBAXSB-C18（4．6mm×150mm，5gm）色谱柱，柱温40℃，流动相为乙腈-水，梯度洗脱，流速为1．0mL·min^-1，检测波长为220，260nm。结果青阳参苷元和告达庭均在2-64Pg·mL^-1内呈良好的线性关系，r均为1；平均回收率为100．1％和97．9％，RSD值分别为1．34％和1.37％（n=6）。结论该方法快捷简单，精密可靠，重复性好，可为青阳参及其制剂的质量控制提供参考。

告达庭激活Caspase-3诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡

[目的]评价告达庭体外诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用。[方法]MTT法检测细胞活性;吖啶橙染色观察核形态;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western-blot及比色法检测Caspase-3表达及活性。[结果]告达庭抑制SGC-7901细胞的活性,具有浓度、时间依赖性;告达庭70μM能使SGC-7901细胞出现核染色体浓聚等典型的凋亡形态学改变,告达庭35、70μM使细胞凋亡率升高,并使Caspase-3蛋白表达量和蛋白活性显著升高。[结论]告达庭可能通过激活Caspase-3诱导SGC-7901细胞凋亡。

白首乌中C_(21)甾总苷盐酸水解条件的优化

目的研究白首乌C21甾总苷盐酸水解的最优水解条件。方法采用正交试验法,考察水解时间、水解温度、盐酸浓度等因素对告达庭-3-O-β-D-磁麻糖苷含量的影响。结果影响盐酸水解的最优水解条件为:0.5%盐酸溶液,60℃加热回流5h。结论优化的水解条件能明显提高白首乌总苷中有效成分的含量,对进一步研究白首乌总苷抗肿瘤活性的增强具有一定意义。