低剂量电离辐射对人淋巴细胞氧化应激及DNA损伤的影响

目的:探讨低剂量^(137)Cs γ射线照射后正常人淋巴细胞(AHH-1)是否产生氧化应激及DNA损伤,并引发DNA修复。方法:以剂量率为8.32 mGy/min的^(137)Cs γ射线照射AHH-1细胞,剂量分别为0(未照射)、0.01、0.02、0.05、0.075、0.1和0.2 Gy,照射后分别培养1、24、48和72 h。采用CCK-8试剂盒检测细胞存活率变化;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和活性氧(ROS)试剂盒检测细胞氧化损伤水平;免疫荧光方法分析γH2AX和53BP1焦点形成情况;实时荧光定量PCR方法检测DNA损伤修复相关基因CDKN1A、DDB2和POLH的mRNA表达水平变化。结果:与未照射组相比,照射后24和48 h,各剂量组细胞存活率显著增强(P<0.05);照射后48 h,MDA水平和SOD活性在0.2 Gy剂量组发生显著变化(P<0.05);0.02~0.075 Gy和0.2 Gy剂量组ROS相对荧光强度显著升高(P<0.05);0~0.2 Gy γ射线照后1 h,γH2AX和53BP1焦点数量随剂量增加而增加,且具有明显的剂量-效应关系(P<0.01);与未照射组相比,照射后48 h,DDB2和POLH mRNA相对表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:低剂量电离辐射引起人淋巴细胞产生氧化应激和DNA损伤,并促进DNA损伤修复相关基因在转录水平发生改变。

慢性氟性骨损伤患者心功能和周围淋巴细胞DNA损伤变化临床意义

目的 探讨慢性氟性骨损伤患者心功能和周围淋巴细胞DNA损伤变化临床意义。方法 应用整群随机抽样方法,随机抽取丽水地区某铝业公司职业健康体检的200名电解车间的氟接触工人,拍摄骨盆和右前臂X线正位片,按照X线的骨骼改变确定氟性骨损伤。采用超声诊断仪测定左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室射血分数(LVEF)和左心室收缩末期内径(LVESD);采用单细胞凝胶电泳技术测定周围淋巴细胞DNA损伤情况。结果 慢性氟接触200名中,发生氟性骨损伤31例,占15.50%。氟性骨损伤组LVEF低于无氟性骨损伤,且LVEDD和LVESD高于无氟性骨损伤,差异均有统计学意义(P<0.05)。氟性骨损伤组总体DNA损伤率高于无氟性骨损伤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。氟性骨损伤组尾部DNA百分率、Olive尾距和尾长高于无氟性骨损伤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关性分析显示,氟性骨损伤与LVEF呈线性负相关,而与LVEDD、LVESD和周围淋巴细胞DNA损伤呈线性正相关(P<0.05)。结论 氟性骨损伤患者存在心功能异常和周围淋巴细胞DNA损伤,并心功能与周围淋巴细胞DNA损伤具有明显相关性。

氯化钇和氯化镨引起的人淋巴细胞DNA分子损伤的研究

用单细胞凝胶电泳法检测了稀土化合物氯化钇和氯化镨对人外周血淋巴细胞的ＤＮＡ损伤效应。结果表明，与对照相比，３种不同浓度的氯化钇和氯化镨均可引起淋巴细胞ＤＮＡ受损后ＤＮＡ迁移率的显著升高，受损伤细胞的百分率与对照差异明显，提示氯化钇和氯化镨具有一定的遗传毒性。

氡及其子体对大鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤效应

将大鼠暴露于 10、2 0和 30WLM (workinglevelmonths)的氡浓度后 ,采用H -TdR掺入法和碱性单细胞凝胶电泳技术 (SCGE) ,研究吸入氡及其子体后大鼠外周血淋巴细胞的DNA损伤效应。结果表明 ,各暴露剂量组大鼠外周血淋巴细胞转化均显著低于对照组 ;淋巴细胞在碱性单细胞凝胶电泳条件下DNA的迁移距离均显著高于对照组 ,且呈剂量 -效应关系。大鼠吸入氡及其子体可引起淋巴细胞DNA合成抑制及淋巴细胞转化能力下降。

石油烃对栉孔扇贝血淋巴细胞DNA损伤的初步研究

为研究石油烃对海洋生物的毒性效应,将栉孔扇贝(Chlamys farreri)暴露于0.08、0.21和0.88mg·L-1石油烃中,采用单细胞凝胶电泳实验(彗星实验)技术检测不同暴露时间扇贝血淋巴细胞的DNA损伤程度,对照组中石油烃背景浓度为0.04mg·L-1。结果显示,低浓度(0.08mg·L-1)的石油烃短期(<7d)内即可导致栉孔扇贝血淋巴细胞的DNA损伤,并且随石油烃浓度的增大和暴露时间的延长,DNA损伤程度增加,石油烃浓度达0.88mg·L-1时,DNA损伤程度已非常严重。3d恢复实验后,各浓度组DNA损伤又均有不同程度的恢复。研究表明,彗星实验是检测石油烃对海洋贝类DNA损伤的一种有效手段,贝类血淋巴细胞DNA损伤有望成为石油烃污染的一种生物标志物,用于海洋污染的早期预警监测。

单细胞凝胶电泳技术分析过氧化氢对大鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤作用

目的 观察不同浓度过氧化氢 (2 5～ 2 0 0 μmol/L)分别作用于正常大鼠外周血淋巴细胞不同时间 (5min和 2 0 min)后细胞DNA的损伤情况。方法 利用快速、灵敏的检测细胞 DNA损伤的单细胞凝胶电泳 (SCG)技术结合激光扫描共聚焦显微镜 ,以“彗星样”淋巴细胞出现率 (计数一定量细胞其中彗星样细胞所占的比例 )、总彗星长度 (“彗星”电泳方向上的最大长度 ,即尾长 )和尾距 (尾部 DNA占总 DNA的百分比与头尾部中心间距的乘积 )来评价淋巴细胞 DNA的损伤程度。结果 过氧化氢能剂量依赖性地导致大鼠外周血淋巴细胞 DNA的明显断裂损伤 ,能使“彗星样”淋巴细胞出现率、总彗星长度和尾距显著增加 ,并随着时间的延长损伤加重。结论 提示活性氧或自由基增多可能是造成体内细胞 DNA断裂损伤的重要原因。

芥子气对淋巴细胞DNA损伤的研究

分离大鼠脾淋巴细胞培养２４小时后，经１０～１０００μｍ芥子气染毒３０ｍｉｎ继续培养３ｄ，以单细胞凝胶电泳法检测ＤＮＡ损伤。结果显示中毒后淋巴细胞ＤＮＡ迁移率和受损细胞百分率呈时间和剂量依赖关系；中毒４ｈ，高、中剂量与对照组相比呈显著性差异（Ｐ＜０．０１）。提示单细胞凝胶电泳法检测ＤＮＡ损伤用作评价芥子气细胞毒性指标的可能性。

烷基酚类化合物对人外周血淋巴细胞DNA损伤的研究

烷基酚类化合物是一类污染十分广泛 ,且具有诱发某些肿瘤的环境内分泌干扰物 .应用单细胞凝胶电泳技术 ,研究了烷基酚类化合物对人外周血淋巴细胞DNA的损伤作用 .实验结果表明 ,9种烷基酚类化合物均能引起不同程度的DNA损伤 ,并呈现出剂量效应关系 .其高剂量组与对照组相比 ,均有极显著性差异 (p <0 .0 1) .实验结果亦表明 。

氧化应激在硒缺乏致鸡淋巴细胞DNA损伤中的作用

为探讨氧化应激在硒缺乏致鸡淋巴细胞DNA损伤中的作用,选择1日龄健康海兰褐雏鸡120只,随机分为对照组和缺硒组,对照组饲喂硒含量为0.282mg/kg的饲料,缺硒组饲喂硒含量为0.032mg/kg的饲料,分别于30、45、60及75日龄采集胸腺、脾脏和法氏囊,检测硒含量、抗氧化功能和淋巴细胞DNA损伤。与对照组比较,缺硒组鸡胸腺、脾脏和法氏囊中硒含量降低;T-AOC,GSH-Px和SOD活性降低,MDA含量升高;淋巴细胞彗星率增加,并呈明显的时间-效应关系;胸腺、脾脏和法氏囊中硒含量、T-AOC、GSH-Px和SOD活性与淋巴细胞DNA损伤呈负相关,MDA含量与其呈正相关。结果表明,氧化应激与硒缺乏致鸡淋巴细胞DNA损伤密切相关。

应用碱性单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测镉致鸡脾淋巴细胞DNA的损伤效应

应用碱性单细胞凝胶电泳技术（single cell gel electrophoresis，SCGE）]检测了0～30μmol／L CdCl2对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞DNA的损伤效应。结果表明，镉浓度在0～30μmol／L范围内，随着镉浓度的增加，对鸡脾脏淋巴细胞DNA的损伤作用逐渐增强，呈现显著的剂量效应（r=0．983，P=0．004）。结果提示，镉致鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤是镉对禽类免疫毒性的重要机制之一。

茯苓多糖对糖尿病小鼠淋巴细胞DNA损伤及肾组织主要抗氧化酶活性的影响

为研究茯苓多糖对2型糖尿病(NIDDM)小鼠淋巴细胞DNA损伤及肾组织主要抗氧化酶活性的影响,试验采用高糖高脂饲料+小剂量链脲佐菌素(STZ)方式诱导NIDDM动物模型,然后将动物分成正常对照组、模型对照组、茯苓多糖灌胃组、罗格列酮灌胃组,药物连续灌胃42 d后,检测小鼠淋巴细胞DNA损伤,肾组织超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果表明:WRP对NIDDM小鼠淋巴细胞DNA损伤具有修复作用,能提高糖尿病小鼠肾组织中SOD、GSH-Px、CAT活性,降低MDA的含量。表明茯苓多糖能增强肾脏抗氧化性,保护自由基介导的氧化损伤,可以治疗或延缓糖尿病肾病(DN)的发生。

镉致淋巴细胞DNA损伤及其免疫毒性的研究

目的 探讨镉 (Cd)致淋巴细胞DNA损伤及其镉免疫毒性机制中的地位和作用。方法 运用单细胞凝胶电泳法、MTT法和荧光抗体标记法分别检测各染镉剂量组的DNA损伤、T淋巴细胞增殖转化功能和T淋巴细胞亚群情况。结果 各染镉组的DNA损伤与对照组有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;T淋巴细胞增殖功能与对照比较有降低 (P <0 0 5 ) ,并均随镉剂量的升高有逐步加重的趋势 ;DNA损伤与T淋巴细胞增殖转化功能有显著的相关关系 (Pearson相关分析 ,r =0 .80 78,P <0 .0 1)。结论 镉的免疫毒性机制中镉致淋巴细胞DNA损伤可能是重要的机制之一。

T-2毒素对大鼠心肝肾及外周血淋巴细胞DNA损伤的实验观察

目的 探求 T- 2毒素在体内的毒作用靶器官以及对 T- 2毒素中毒的敏感监测方法和生物标志。方法 采用单细胞凝胶电泳 (SCGE)技术及动物实验。结果 在所测的器官中 ,以大鼠肝脏对 T- 2毒素最为敏感 ,其次为外周血淋巴细胞 (PBL )。结论 外周血淋巴细胞的 DNA损伤可以作为机体 T-

单细胞微凝胶电泳技术在人血淋巴细胞DNA损伤研究中的应用

介绍了单细胞微凝胶电泳(SCG)技术的原理和操作过程,并应用该技术研究了γ-线照射、过氧化氢(H_2O_2)、氯化镉(CdCl_2)对人血淋巴细胞DNA的损伤效应。结果表明,γ-线照射、H_2O_2和CdCl_2均能引起细胞DNA迁移长度增加,且呈显著的剂量效应关系。对未处理对照细胞DNA迁移的原因及SCG实验操作过程中应注意的事项也进行了讨论。

胃癌和胃炎患者淋巴细胞DNA损伤及血浆抗氧化力测定

用单细胞凝胶电泳技术、硫代巴比妥酸法和比色法研究了胃癌、胃炎患者和健康人的外周血淋巴细胞 DNA损伤、血浆丙二醛 (MDA)含量和总抗氧化力 .结果表明 ,胃癌患者淋巴细胞DNA损伤明显高于健康人 (P <0 .0 0 1) ,血浆 MDA含量明显高于胃炎病人 (P <0 .0 5 )及健康人 ,血浆总抗氧化力极明显低于胃炎病人及健康人 (P <0 .0 0 1) ,胃癌病人淋巴细胞 DNA损伤随年龄增加而加重 .说明胃癌病人抗氧化力低且 DNA损伤严重 .

苯并[a]芘对马氏珠母贝血淋巴细胞DNA损伤的研究

通过单细胞凝胶电泳技术(彗星试验)研究了苯并[a]芘(B[a]P)对马氏珠母贝(Pinctada martensi)血淋巴细胞DNA的损伤。结果显示,在相同暴露时间内,不同质量浓度的B[a]P均能引起马氏珠母贝血淋巴细胞DNA损伤。4μg.L-1 B[a]P处理组DNA含量、彗尾长度和Olive尾矩均最大,分别为34.39%、281.73和60.31μm。随着暴露时间的延长,彗星尾长明显增加,表现出明显的时间-效应关系,而DNA含量和Olive尾矩没有呈现出规律性变化。此外,在不同的染毒时间内,对照组和各处理组之间均存在显著差异(P<0.05),3个指标具有很好的一致性。研究表明,彗星试验是检测B[a]P对马氏珠母贝血淋巴细胞DNA损伤的一种有效手段,马氏珠母贝血淋巴细胞DNA损伤可作为指示B[a]P污染的一种有效生物标志物用于早期预警监测。

六味地黄生物制剂对衰老小鼠脾淋巴细胞DNA损伤的保护作用

目的探讨六味地黄生物制剂延缓衰老的机制。方法小鼠随机分为正常对照组、阳性药物(维生素E)组、衰老模型组与六味地黄生物制剂组。除正常对照组注射生理盐水外,其余各组皮下注射0.5mL 5%D-半乳糖以建立衰老模型,连续50 d。第10天开始以0.2 mL.10 g-1给予各组小鼠灌胃相应的药物,50 d后处死小鼠,分离脾淋巴细胞并利用单细胞凝胶电泳法检测各组小鼠脾脏淋巴细胞的DNA损伤情况。结果与正常对照组比较,衰老模型组小鼠的脾淋巴细胞有较为严重的损伤(P<0.01),尾长、尾距与DNA拖尾率分别为(145.96±94.63)μm、(51.34±44.67)μm、(23.14±15.90)%;与衰老模型组比较,阳性药物组和六味生物制剂组小鼠的DNA损伤均显著降低(P<0.01)。结论六味地黄生物制剂对D-半乳糖所致的衰老小鼠的脾淋巴细胞有明显的保护作用,这可能是六味地黄生物制剂延缓衰老的机制之一。

单细胞凝胶电泳技术在甲基汞对小鼠胸腺淋巴细胞DNA损伤中的应用

目的 探讨甲基汞对小鼠胸腺淋巴细胞DNA损伤的作用。方法 采用单细胞凝胶电泳技术进行检测。结果 1 2 0 0～ 1 2LD50 ,剂量组的甲基汞均可引起淋巴细胞DNA不同程度电泳迁移 ;A组 ( 1 2 0 0LD50 )、B组 ( 1 2 0LD50 )、C组 ( 1 2LD50 )DNA平均迁移长度与对照组之间差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,并且C组与A、B两组之间差异也有显著性 (P <0 0 0 1) ;B组尾直径 头直径、尾面积 总面积之比均与A组差异有显著性 (P <0 0 5 )、C组各项之比均与A、B组差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论 甲基汞引起DNA链断裂损伤 ,随着甲基汞剂量的增加 ,对淋巴细胞DNA损伤加重。

过度运动激活中性粒细胞产生的活性氧对淋巴细胞DNA损伤及干预研究

目的：探讨过度运动激活中性粒细胞NADPH氧化酶介导产生的活性氧（ROS）对淋巴细胞DNA损伤的影响及实施二联苯碘（DPI）干预作用。方法：30只雄性Vistar大鼠随机分为3组,安静组（C,n=10）、过度训练组（E,n=10）和DPI干预组（D,n=10）,E组和D组进行递增负荷跑台训练11周,末次训练结束后在36~40 h内各组随机取8只眼眶静脉采血。应用ELISA方法检测血浆细胞因子水平及血液中脂质过氧化水平;提取白细胞用An-nexinV/PI双染色法流式测定中性粒细胞凋亡与坏死程度;免疫细胞化学的激光共聚焦法测定NADPH氧化酶关键亚基的gp91 phox与p47 phox的共定位;单细胞凝胶电泳测定淋巴细胞的DNA损伤程度。结果：1）与C组比较,E组血浆IL-1 b显著性升高,IL-8、TNF-α显著升高（分别为P〈0.01和P〈0.05）,MCP-1与CINC显著性下降（P〈0.05）;而D组血浆IL-1 b、MCP-1显著下降（P〈0.05）,IL-8、TNF-α显著性升高（P〈0.05）;E组和D组大鼠血浆MDA、MPO水平均上升（分别为P〈0.01和P〈0.05）;2）与C组相比,E组、D组中性粒细胞性凋亡的百分比均显著上升（P〈0.01）,但中性粒细胞的死亡数E组增加（P〈0.05）而D组无显著变化;3）与C组比较,E组出现DNA损伤的彗星细胞数非常显著性升高（P〈0.01）,且彗星细胞的宽度和尾长的变化均达到显著性水平,而D组的变化均未达到显著性水平;4）中性粒细胞的共聚焦染色定位显示：与安静组对照比较,E组出现了NADPH氧化酶关键亚基的gp91 phox与p47 phox的共定位。结论：1）过度运动可引起外周血炎性因子和趋化分子分泌的增加,从而有可能诱发组织炎症的发生和而调节T淋巴细胞的分化;2）过度运动可激活外周血中性粒细胞的NADPH氧化酶介导产生过多的ROS使血液的脂质过氧化水平提高;3）由此途径产生的ROS的增多和血液过氧化水平的提高可能引起中性粒细胞本身的凋亡甚至死亡和淋巴细胞的DNA损伤：4）由此途径产生的ROS的增多、吞噬细胞及淋巴细胞的过氧化损伤、炎性因子及免疫调节因子的变化等多因素可调节细胞免疫,是过度运动引起的运动型免疫抑制的可能因素。

用单细胞凝胶电泳技术检测壬基酚对扇贝血淋巴细胞的DNA损伤

采用单细胞凝胶电泳技术研究了壬基酚(NP)对扇贝血淋巴细胞DNA的损伤作用。以0,0.025,0.10,0.25和1.00 mg/L的NP处理海湾扇贝24 h和48 h,检测其对血淋巴细胞DNA的损伤程度。结果表明,当NP在0.025 mg/L时就可以使扇贝血淋巴细胞产生轻微的DNA损伤,表现在DNA发生了拖尾,处理24 h后DNA拖尾率为10%,48 h后拖尾率为33%。随着NP浓度的增加和染毒时间的延长,血淋巴细胞的DNA拖尾率都相应增加,最高浓度的处理组(1.00 mg/L)中,DNA损伤最为明显,处理24 h后的拖尾率为80%,48 h后拖尾率为93%。该结果表明NP对扇贝血淋巴细胞具有遗传毒性损伤作用。