茯苓酸调节NF-κB途径诱导宫颈癌细胞凋亡和细胞周期停滞

目的:探讨茯苓酸能否通过调节NF-κB途径诱导宫颈癌细胞HeLa凋亡和细胞周期停滞。方法:HeLa细胞分为空白对照组、二硫氨基甲酸酞吡咯烷(100.0μmoL/L)组及茯苓酸低(5.0μmoL/L)、中(10.0μmoL/L)、高(20.0μmoL/L)浓度组,相应培养液培养48 h后,CCK-8法检测细胞活力;Hoechst 33258染色检查凋亡细胞核形态;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;免疫荧光染色检测NF-κB P65表达与定位;Western Blot检测CyclinD1、CDK4、cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达及p-IKKβ/IKKβ、p-IκBα/IκBα、p-NF-κB P65/NF-κB P65水平。结果:与空白对照组比较,各给药组HeLa细胞活力、S期比例、G_(2)/M期比例及CyclinD1、CDK4、Bcl-2蛋白表达和p-IKKβ/IKKβ、p-IκBα/IκBα、p-NFκB P65/NFκB P65水平显著降低,细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期比例及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05),同时细胞萎缩、核碎裂、染色质浓缩逐渐明显,细胞核NF-κB P65逐渐向细胞质分布。茯苓酸的作用呈浓度依赖性(P<0.05)。结论:茯苓酸可诱导宫颈癌HeLa细胞G_(0)/G_(1)期停滞和细胞凋亡,其作用机制可能与抑制NF-κB途径激活有关。

三氧化二砷抑制cdc2基因表达诱导K562白血病细胞G_2/M周期停滞

目的检测三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导慢性髓系白血病急变细胞K562周期停滞中细胞周期相关调节基因的转录、蛋白表达及其磷酸化改变,以期阐明As2O3诱导其周期停滞的分子生物学机制,为克服K562细胞的As2O3抵抗性提供实验基础。方法体外培养K562细胞,采用PI染色、流式细胞仪检测As2O3作用后细胞周期分布的改变;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞周期相关调节基因mRNA表达变化;Westernblot检测相关蛋白及磷酸化改变。结果As2O3作用K562细胞24h后,G2/M期细胞比例明显增加,浓度为0、2、5、10μmol/L时G2/M期细胞比例分别为(22.6±3.4)%、(27.2±2.3)%、(43.8±4.5)%、(36.7±4.1)%;K562细胞在As2O3处理前有Sur-vivin、cdc2、chk1基因表达,As2O3处理后Survivin、chk1的表达无明显变化,但cdc2表达呈浓度依赖性下调;As2O3作用前可见Survivin、cdc2、cdc2-p、chk1等4种蛋白的表达,作用24h后,Survivin的表达条带增强,cdc2蛋白表达水平呈浓度依赖性下调,cdc2-p水平在2～5μmol/L时无明显变化,在10μmol/L时受抑明显,chk1蛋白表达水平在As2O3作用前后无明显改变。结论As2O3显著诱导K562白血病细胞G2/M周期停滞,其机制与抑制cdc2转录水平,下调活性化cdc2蛋白表达有关。不能有效抑制抗凋亡蛋白Survivin的表达可能是K562白血病细胞对As2O3诱导凋亡抵抗的一个重要机制。

DNA损伤后细胞凋亡与周期停滞中Δ40P53的作用

目的探讨HCT116p53-/-细胞Δ40P53在脱氧核糖核酸(DNA)损伤时细胞凋亡和细胞周期停滞中的作用,明确Δ40P53与野生型P53的不同作用。方法荧光素酶报告基因和免疫印迹法检测Δ40P53在DNA损伤后转录活性和表达情况,流式细胞技术检测DNA损伤后细胞周期停滞情况,乳酸脱氢酶(LDH)检测分析DNA损伤后细胞凋亡情况,分析Δ40P53的生物学功能。结果 HCT116p53+/+细胞中bax和p21基因的启动子活性在甲烷磺酸甲酯(MMS)刺激时比无MMS刺激时高3～5倍,HCT116p53-/-细胞中bax和p21基因的启动子活性在有无MMS刺激时无显著不同;免疫印迹表明有和无MMS刺激的细胞Δ40P53保持在较高水平,野生型P53经MMS刺激过度表达;LDH法检测50μg/ml的MMS刺激后52.2%的HCT116p53+/+细胞凋亡,而只有32.5%的HCT116p53-/-细胞凋亡,差异有统计学意义(t=84.2,P<0.05);流式细胞仪检测MMS处理后88%的HCT116p53-/-细胞进入G2/S期细胞,66%的HCT116p53+/+细胞进入G2/S期细胞。结论经MMS刺激的HCT116p53-/-细胞的Δ40P53不能诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。

PTEN基因诱导人胚肾293细胞凋亡和细胞周期停滞

为了研究抑癌基因PTEN过表达对HEK2 93细胞凋亡和细胞周期停滞的作用 ,以野生型PTEN和PTEN突变子 (T910G)表达质粒分别转染无PTEN表达的人胚肾 2 93细胞 ,采用细胞质梯度DNA方法检测细胞凋亡 ,以流式细胞仪分析细胞周期 .发现PTEN过表达能够诱导人胚肾 2 93细胞质中出现梯度DNA ,2 93细胞发生凋亡 ,PTEN过表达改变细胞周期分布 ,G0 /G1期细胞增加 13% ,S期细胞下降 15 % .PTEN突变子对细胞凋亡和G1细胞停滞的影响略弱于野生型PTEN .PTEN基因过表达明显下调血小板衍生生长因子 (PDGF)诱导的蛋白激酶B (PKB)和p4 2 ,p4 4 促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)磷酸化水平 ,PTEN突变子对p4 2 ,p4 4 MAPK磷酸化水平的调节作用略弱于野生型PTEN .PTEN通过抑制细胞增殖 。

细胞周期停滞:AKI向CKD转变的关键点

急性肾损伤(Acute Kidney Injury,AKI)向慢性肾脏病(Chronic Kidney Disease,CKD)的进展过程严重影响肾脏预后及患者生存质量,是目前研究热点之一,其中细胞周期停滞是AKI向CKD进展中一个重要的致病机制。其可能通过持续增加细胞因子及炎症因子生成和释放、上皮间充质转分化、细胞器应激/串扰、衰老激活、管周微血管稀疏等一系列适应性不良修复过程,加速AKI向CKD转变。故调控细胞周期有望成为预防、减缓甚至阻断AKI-CKD进展的新的靶点机制。

细胞周期停滞标志物在AKI的诊断及预后中的研究进展

急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)是住院患者常见且严重的并发症,目前临床上缺乏AKI早期诊断及预后评估的生物标志物。近期研究表明,细胞周期停滞在AKI发生发展中发挥重要作用,其生物标志物金属蛋白酶组织抑制因子2(tissue inhibitor of metalloproteinase 2,TIMP2)和胰岛素样生长因子结合蛋白7(insulin-like growth factor binding protein 7,IGFBP7)可用于早期诊断AKI及预后评估。该文对细胞周期停滞在AKI中的作用机制进行论述,为干预细胞周期停滞改善AKI预后提供潜在治疗靶点;同时对细胞周期停滞标志物TIMP2和IGFBP7在AKI中的研究进行综述,为AKI早期诊断及预后评估提供潜在生物标志物。

干扰素-α增强足叶乙甙介导的凋亡和细胞周期停滞

目的探讨干扰素（IFN）-α对足叶乙甙介导骨肉瘤细胞周期停滞和凋亡的影响及其分子机制。方法采用IFN-α和足叶乙甙单独或联合处理骨肉瘤U2OS细胞72 h，通过锥虫蓝法测定细胞生长抑制率，应用流式细胞术检测细胞周期停滞，通过Hochest 33258荧光染色检测凋亡，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测p53在mRNA水平的表达，通过小干扰RNA（siRNA）干扰沉默p53的表达，采用Western blot法检测p53和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的表达。结果药物处理72 h，IFN-α、足叶乙甙和联合用药组细胞生长抑制率为：（2.29±1.03）%、（23.85±3.09）%和（50.51±3.77）%，IFN-α增强足叶乙甙的生长抑制，差异有统计学意义（P＝0.008）。在足叶乙甙和联合用药组均出现凋亡形态学改变。足叶乙甙组和联合用药组S期细胞为（19.68±3.62）%和（11.33±2.94）%，G2/M期细胞为（65.02±2.55）%和（76.09±2.87）%，两者组间差异有统计学意义（P＝0.037）。IFN-α没有增加足叶乙甙引起的p53在mRNA水平的表达，但沉默p53表达后空白组、对照siRNA组、p53-siRNA组的生长抑制率分别为：（55.72±3.88）%、（51.63±4.36）%和（36.40±3.95）%，p53沉默减弱了联合用药引起的生长抑制，差异有统计学意义（P＝0.023），同时联合用药组的PARP裂解明显减弱。泛半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）抑制剂Z-VAD-FMK预处理后Z-VAD-FMK、足叶乙甙组、IFN-α＋足叶乙甙组、足叶乙甙＋ Z-VAD-FMK组和IFN-α＋足叶乙甙＋ Z-VAD-FMK组的生长抑制率为（3.52±1.98）%、（27.11±4.06）%、（56.44±4.78）%、（21.37±3.55）%、（23.81±4.22）%。Z-VAD-FMK减弱联合用药引起的生长抑制，差异有统计学意义（P＝0.015），并且联合用药引起的PARP裂解也被减弱。结论IFN-α在人骨肉瘤U2OS细胞中增强足叶乙甙介导的生长抑制、细胞周期停滞和凋亡，该作用依赖p53和Caspase。

重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α调节细胞周期的分子机制

背景:目前研究显示低氧诱导因子1α可诱导细胞周期停滞,但其机制尚不清楚。目的:研究重组腺病毒突变型人低氧诱导因子1α(Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803)调节细胞周期的分子机制。设计、时间及地点:对照实验,于2007-03/12在南方医科大学中医实验中心完成。材料:人结肠腺癌细胞株LoVo细胞由南方医院消化内科实验室提供;重组腺病毒Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803和对照病毒Ad-lacZ载体为自行构建。方法:将重组腺病毒Ad-HIF-1α-Ala564-Ala803和对照病毒Ad-lacZ在HEK293A细胞中扩增,测定病毒滴度,然后在常氧下以感染复数10,20,30,40,50,60,70,80,90,100感染LoVo细胞。主要观察指标:X-gal染色检测重组腺病毒对LoVo细胞的感染效率;荧光定量PCR检测不同时间点低氧诱导因子1α与p21WAF1/CIP1的mRNA表达水平;MTT检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果:①重组腺病毒扩增后能获得较高的滴度,在LoVo细胞中具有很高的感染效率,感染效率与感染复数成量效关系,当感染复数为60时,感染效率为90%以上。②随低氧诱导因子1α表达的增高,p21WAF1/CIP1的表达也相应增高,两者存在正相关(r=0.945,P<0.05)。③与对照病毒相比,重组腺病毒感染后LoVo细胞增殖轻度受抑;细胞周期示G1期细胞明显增加,S期的细胞显著减少(P<0.05)。结论:①重组腺病毒载体介导的人HIF-1α-Ala564-Ala803基因可有效地转染LoVo细胞并成一定的量效关系。②低氧诱导因子1α在细胞周期的调节中发挥重要的作用,可能通过上调p21WAF1/CIP1的表达,诱导细胞周期停滞于G1期。

p53介导G_1停滞和细胞凋亡与肿瘤（综述）

ｐ５３介导Ｇ１停滞和细胞凋亡与肿瘤（综述）黄行许朴英杰乔东访（第一军医大学中心实验室５１０５１５，广州）细胞周期停滞（ｃｅｌｃｙｃｌｅａｒｒｅｓｔ）是指正常细胞受到不当因素影响时，主动停止在细胞周期的某一阶段，以消除所受到的不利影响。细胞凋亡（ａｐｏ...

细胞周期阻滞标志物在早期急性肾损伤中应用的研究进展

急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)明显影响患者的临床预后,其发病机制不清,且临床缺乏有效的治疗手段,缺少可早期预测AKI发生的标志物。肌酐作为目前诊断手段既缺乏敏感度,也缺少特异度。临床迫切需要能够早期准确地预测肾功能损伤的生物学标志物。最近的研究表明,细胞周期停滞可能与AKI的发生密切相关。细胞周期停滞时产生的尿基质金属蛋白酶(TIMP-2)和胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP-7)可在早期准确预测AKI的发生。

穿心莲内酯抗肿瘤的作用及其机制研究进展

穿心莲内酯是自穿心莲中提取得到的二萜内酯类化合物,是穿心莲的主要活性成分之一。最近的研究表明,穿心莲内酯在抗肿瘤方面有巨大潜力,包括抑制肿瘤细胞活性,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞周期进展、癌细胞转移和侵袭特性、生长因子信号传导调节,抑制细胞迁移和血管生成等,是一种新型抗肿瘤药物。该文就穿心莲内酯对不同癌症的作用及其机制的研究进展作一综述。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸的免疫调控功能

组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylases inhi—bitors，HDACIs）是一类在转录水平调控基因表达的化合物，通过诱导蛋白过乙酰化引起染色体重建、细胞周期停滞、诱导细胞分化和凋亡以及调节转录因子活化和抑制等一系列生物学效应。HDACIs在多种血液系统肿瘤和实体瘤中显示了明确而强大的抗肿瘤活性，目前已进入临床研究阶段。

姜黄素抑制翼状胬肉成纤维细胞增生的研究

目的观察姜黄素对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增生和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新方法。方法用0～160μmol/L姜黄素作用体外培养的HPF,24～96h后观察不同浓度姜黄素对HPF的影响。MTT法及免疫组织化学染色增生细胞核抗原(PCNA)检测细胞生长活性,流式细胞仪测定细胞周期时相变化。结果在20～160μmol/L浓度作用24～72h范围内,姜黄素可剂量和时间依赖性的抑制HPF增生(P<0.05)。20,40,80,160μmol/L姜黄素作用24h后,流式细胞仪检测结果发现,姜黄素作用组均出现典型的亚二倍体凋亡峰,G0/G1期细胞百分比上升(P<0.05),S期细胞百分比下降(P<0.05),说明细胞阻滞于G0/G1期。当姜黄素的浓度在20～160μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论姜黄素可显著抑制翼状胬肉成纤维细胞增生,使细胞周期停滞于G0/G1期,并诱导其凋亡,作用呈时间和剂量依赖性。

三氧化二砷对5种人类白血病细胞体外效应的比较研究

目的:了解三氧化二砷(AS2O3)在体外对K562、BV173、HL60、U937等白血病细胞生长增殖、凋亡、细胞周期的影响,并与NB4细胞进行比较。方法:体外培养上述细胞株,在不同浓度AS2O3作用不同时间后以锥虫蓝拒染计数法计数细胞,绘制生长曲线;通过PI和AnnexinV双染色流式细胞仪检测细胞凋亡率;PI染色、流式细胞仪检测药物作用前后白血病细胞的周期分布改变。结果:AS2O3明显抑制实验所用NB4、K562、BV173、U937、HL60等5种白血病细胞的生长增殖,且其效应在2～10μmol/L的浓度范围内均呈剂量依赖性和时间依赖性;5μmol/L浓度AS2O3处理48h后细胞凋亡率分别为K562(14.6±2.5)%、BV173(19.4±3.1)%、U937(13.8±3.6)%、HL60(18.2±4.0)%,与NB4细胞(41.8±2.6)%比较,差异有统计学意义(均P<0.01)。以5μmol/L浓度的AS2O3经24h处理,NB4细胞的周期改变以亚G1峰增加为主(5.2%∶36.2%);BV173细胞以G0/G1期细胞比例的增加为主(55.2%∶71.7%),K562细胞及U937细胞以G2/M期细胞比率增加最为明显(分别为22.6%∶45.8%,15.7%∶48.6%)。结论:在本实验浓度范围内AS2O3对5种白血病细胞株均具有明显生长抑制作用,对不同白血病细胞抑制生长的机制不同,NB4细胞以诱导凋亡为主,K562、BV173、U937白血病细胞以诱导周期停滞为主。提示周期停滞而凋亡不足是AS2O3对NB4以外白血病细胞体外效应的普遍特点;探讨周期停滞及凋亡耐受的机制对提高这些白血病细胞的AS2O3敏感性具有重要意义。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗炎机制的研究进展

组蛋白乙酰转移酶（HATs）和组蛋白去乙酰化酶（HDACs）通过对组蛋白氮端氨基酸残基进行乙酰化或去乙酰化,调节组蛋白的乙酰化水平,进而调控基因表达,对维持细胞正常功能有重要作用。组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACIs）是一类在转录水平调控基因表达的化合物,通过诱导组蛋白过乙酰化,引起染色体重建、细胞周期停滞、诱导细胞分化和凋亡以及调节转录因子活化和抑制等一系列生物学效应,具有神经保护、抗氧化、脏器保护、抗炎等作用。

5，4’-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对人肺腺癌细胞及其裸鼠异种移植瘤生长的影响

摘要目的研究金雀异黄素(genistein)衍生物5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮(5，4’-Di-n-octoxyl-7-gem-difluoromethylenegenistein，DOdFMG)对人肺癌细胞系(A549)细胞生长的影响及其作用机制。方法MTT比色法测定5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对A549和人胚肺二倍体成纤维细胞(KMB—17)增殖的影响；细胞记数法观察DOdFMG对A549细胞生长曲线的抑制作用；P1染色流式细胞术(FCM)分析DOdFMG对A549细胞凋亡和细胞周期的影响；人肺腺癌(A549)细胞裸鼠异种移植瘤模型治疗实验检测DOdFMG体内抗肺癌作用。结果MTT比色法测定结果显示，DOdFMG对A549细胞增殖有显著抑制作用，呈浓度依赖关系，半数抑制浓度(IC50值)是10．26μmol／L，对KMB-17细胞增殖抑制作用弱，IC50值为163．2μml/L，其对人肺腺癌细胞毒选择指数为15．91。细胞记数法测定结果表明，5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对A549细胞生长具有抑制作用，在10．0／μmol/L浓度下，A549细胞群体倍增时间延长到52．7h(溶媒对照组倍增时间为31、4h)。PI染色FCM分析发现，5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮明显使A549细胞周期停滞于G1期(G1期细胞百分数由52．5％上升到74．7％，P<0．05)。裸鼠异种移植瘤治疗实验结果显示，5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮对人肺癌异种移植瘤生长具有显著抑制作用，其作用效价强度弱于羟基喜树碱(HCPT)，强于其母体化合物金雀异黄素。结论5，4'-二-正辛烷氧基-7-二氟亚甲基异黄酮具有体内外抗肺腺癌作用，其机制可能与细胞周期G1期阻滞有关。

鸦胆子苦醇阻滞小鼠早期胚胎发育的作用机制

目的截止目前,鸦胆子苦醇在小鼠早期胚胎发育中的作用及其作用机制仍不清楚。文中旨在探究鸦胆子苦醇对小鼠早期胚胎发育的影响及其可能的作用通路。方法取100只健康清洁级昆明小鼠(雌鼠80只,雄鼠20只)分为6组:阴性对照组(不添加DMSO)、空白对照组(新鲜CM中培养添加等量DMSO)以及20 nmol/L鸦胆子苦醇组、50 nmol/L鸦胆子苦醇组、100 nmol/L鸦胆子苦醇组、200 nmol/L鸦胆子苦醇组(用CM分别稀释鸦胆子苦醇浓度为20、50、100、200 nmol/L)。每组每次平均使用20枚胚胎,重复4次。受精卵培养24、48、72、96 h分别为2-细胞期、4-细胞期、桑葚胚期和囊胚期。观察各组各期发育率并筛选出最适浓度,并通过免疫荧光染色检测核因子E2相关因子2(Nrf2)的定位,实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分别比较G2/M期Cyclin B,CDK1 mRNA水平以及Nrf2蛋白表达的变化。结果在4-细胞期,20、50、100 nmol/L鸦胆子苦醇组胚胎发育率[(75.0±2.8)%、(30.4±7.5)%、(4.2±5.9)%]较阴性对照组[(93.0±2.8)%]、空白对照组[(90.9±1.2)%]显著降低(P<0.05)。在桑葚胚期,与阴性对照组、空白对照组桑葚胚形成率[(83.5±2.1)%、(84.2±1.2)%]比较,50nmol/L鸦胆子苦醇组[(19.3±13.1)%]显著降低[(79.00±0.06)%vs 100%,P<0.05]。50 nmol/L鸦胆子苦醇组Nrf2蛋白的表达较空白对照组显著降低(P<0.05)。50 nmol/L鸦胆子苦醇组G2/M期Cyclin B[(59.5±9.2)%]、CDK1 mRNA[(56.0±1.4)%]的表达较空白对照组(100%)显著降低(P<0.05)。结论鸦胆子苦醇可能通过下调Nrf2,调节Cyclin B-CDK1复合物的表达影响细胞周期由G2向M期转变,进而抑制胚胎发育。

肺癌侵袭与转移相关信号传导通路的研究进展

细胞外各种刺激通过生长因子、细胞因子等介质与相应受体结合后诱发细胞内一系列级联反应，包括受体活化、蛋白激酶和磷酸酶活化、蛋白分子间特异性结合及转录因子活化等，使细胞发生凋亡、分裂或细胞周期停滞等反应，由此构成细胞信号传导系统。肿瘤细胞的恶性转化、增殖与凋亡调控失衡、细胞基质及黏附分子结构表达异常、血管及淋巴管转移等均涉及多条细胞信号传导通路的异常。

Cln3缺失对酿酒酵母生长的影响

Cln3是酿酒酵母G1期周期蛋白中的一种,为了研究Cln3在细胞周期与形态发生中的作用,我们构建了酿酒酵母CLN3基因的缺失株,并对其表型进行了分析。结果显示,cln3缺失株对α信息素的敏感性增强,α信息素诱导的细胞周期停滞现象明显大于野生型菌株,这种增强作用不受Sgv1因子的影响。同时,与野生菌相比cln3缺失株的细胞形态也有明显变化,双倍体cln3缺失株细胞的顶端生长能力增强而单倍体细胞的侵入生长能力则受到抑制。结果表明,与酿酒酵母的另外两个G1期周期蛋白Cln1、Cln2不同,Cln3在形态发生中有其独特的功能与作用方式。

宫颈癌HeLa细胞调控信号通路研究新进展

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤,发病率高,死亡率高,发病人群年轻化,极大地威胁着女性的生命健康。对宫颈癌HeLa细胞调控信号通路的研究进展进行了综述,包括PI3K/Akt/mTOR信号通路、Wnt/β-连环蛋白信号通路、抑制MMPs相关蛋白表达、诱导HeLa细胞周期停滞、调节凋亡基因的表达等,以期为治疗宫颈癌提供新思路。