Y染色体性别决定区相关高速泳动族框因子9和周期素依赖性激酶4在结直肠息肉、结直肠癌中的表达及意义

目的 探究Y染色体性别决定区相关高速泳动族框因子9(SOX9)和周期素依赖性激酶4(CDK4)在结直肠息肉、结直肠癌中的表达及意义。方法 选取中国人民解放军第八十二集团军医院2015年1月至2017年6月收治的结直肠癌病人病理组织标本(结直肠癌组)94例及癌旁正常结直肠组织(正常结直肠组)39例,另取同时期结直肠息肉病人结直肠息肉组织(结直肠息肉组)51例。采用免疫组织化学SP染色法检测SOX9、CDK4的表达情况,分析SOX9、CDK4表达与结直肠癌病人临床病理参数之间的关系;对结直肠癌病人进行术后复查随访,分析结直肠癌病人生存情况。结果 SOX9在正常结直肠组织、结直肠息肉组织和结直肠癌组织中的阳性表达率分别为10.26%(4/39)、27.45%(14/51)、76.59%(72/94),差异有统计学意义(P<0.05);CDK4在正常结直肠组织、结直肠息肉组织和结直肠癌组织中的阳性表达率分别为7.69%(3/39)、21.57%(11/51)、54.84%(51/94),差异有统计学意义(P<0.05);正常结直肠组织中SOX9、CDK4蛋白表达水平低于结直肠息肉组织、结直肠癌组织(P<0.05),结直肠息肉组织中SOX9、CDK4蛋白表达水平低于结直肠癌组织(P<0.05)。结直肠癌病人病理组织SOX9、CDK4表达与肿瘤分化程度、临床分期、是否合并淋巴结转移有关(P<0.05);结直肠癌组织SOX9与CDK4表达呈正相关(r=0.58,P<0.001),由TCGA数据库检索结直肠癌组织SOX9、CDK4基因表达相关性显示,二者之间亦呈正相关(r=0.40,P<0.001);SOX9高表达、低表达病人术后3年累积生存率分别为44.6%、72.4%,两组比较Log-rank检验差异有统计学意义(χ^(2)=8.31,P=0.004);CDK4高表达、低表达病人术后3年累积生存率分别为25.6%、76.5%,两组比较Log-rank检验差异有统计学意义(χ^(2)=36.36,P<0.001)。结论 SOX9和CDK4在结直肠癌组织、结直肠息肉组织、正常结直肠组织中的阳性表达率逐渐降低,与结直肠癌肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移情况及预后有关,可能参与结直肠癌的发生发展过程。

致瘤病毒与细胞周期素E

细胞周期失调是肿瘤形成的重要原因。致瘤病毒可通过诱导细胞周期的一些调控因子发生改变而引发肿瘤。细胞周期素E是调节细胞G1 S期转变的关键因子 ,因此致瘤病毒对其基因表达及其活性的影响是引起细胞周期失调进而形成肿瘤的重要途径之一。

槲皮素降低肾小球周期素激酶抑制剂p27水平改善糖尿病肾病

目的 探讨槲皮素改善糖尿病肾病与肾小球周期素激酶抑制剂 p2 7的关系。 方法 腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病 (DM )模型 ,分为DM +Qu组 ( 6只 )及DM组 ( 6只 ) ,分别给予槲皮素 10 0mg·kg-1·d-1及同体积的生理盐水灌胃 8周 ;对照组 (正常大鼠 6只 )予等体积生理盐水灌胃 8周。采用蛋白印迹 (Western杂交 )方法测定肾小球裂解液 p2 7蛋白水平 ,采用ELISA方法测定肾小球裂解液细胞外基质 (ECM )蛋白 (Ⅳ型胶原及纤维连接蛋白 )和尿白蛋白。结果 DM组大鼠肾小球 p2 7水平为 18.5± 4.3 ,尿白蛋白排泄为 ( 3 9.62± 3 .68) μg/ 2 4h ,肾重 /体重比例为 ( 14.87± 2 .0 2 )× 10 -3,均较其他 2组明显增加 ,ECM蛋白水平也较其他 2组明显增加。与DM组相比 ,DM +Qu组肾小球 p2 7水平 ( 10 .6± 3 .1)、ECM蛋白水平、尿白蛋白排泄 [( 17.62± 3 .0 2 ) μg/ 2 4h]及大鼠肾重 /体重比例 [( 11.3 5± 1.76)× 10 -3]均明显降低 (P <0 .0 1) ;DM +Qu组的血糖水平无明显改变。结论 槲皮素可能通过降低肾小球 p2

大黄素抑制系膜细胞增生与周期素激酶抑制剂p27的关系

目的 :探讨周期素激酶抑制剂p2 7在大黄素抑制肾系膜细胞 (mesangialcell,MC)增生中的作用。方法 :蛋白印迹 (west ern杂交 )方法测定MC裂解液p2 7蛋白水平 ,[3H]胸腺嘧啶核苷 ([3H]TdR)测定MC增生的情况 ,观察不同浓度大黄素 (50mg/L、10 0mg/L )对肿瘤坏死因子 α(tumornecrosisfactor α ,TNF α)刺激的MC中p2 7水平及增生程度的影响。结果 :TNF α (2 0万U/L)使无血清培养 2 4h的MC中p2 7水平降低 ,同时使 [3H]TdR掺入增加 ;大黄素提高TNF α刺激的MC中p2 7水平 ,同时使 [3H]TdR掺入减少。大黄素的上述作用随剂量的增大而增强。结论 :大黄素可能通过提高p2 7水平抑制TNF α诱导的MC增生。

槲皮素对糖尿病肾病大鼠的肾小球周期素激酶抑制剂P27水平的影响

目的:探讨槲皮素对糖尿病肾病的影响及该影响与肾小球周期素激酶抑制剂P27的关系。方法:腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病(DM)模型,分别以生理盐水或槲皮素(100 mg·kg1·d-1)灌胃8周。蛋白印迹(Western杂交)法测定肾小球裂解液P27蛋白水平,ELISA法测定肾小球裂解液细胞外基质(ECM)蛋白(Ⅳ型胶原及纤维连接蛋白)和尿白蛋白。结果:DM 8周大鼠肾小球P27水平增高,ECM蛋白水平增加,尿白蛋白排泄增多,肾质量/体质量比值增高。槲皮素灌胃8周显著降低DM大鼠。肾小球P27水平(10.6±3.1 vs 18.5±4.3,P<0.01)和ECM蛋白水平,减少尿白蛋白排泄[(17.62±3.02)vs(39.62±3.68)μg/24 h,P<0.01],降低DM大鼠肾质量/体质量比值(11.35±1.76 vs 14.87±2.02,P<0.01)。槲皮素不改变DM大鼠血糖水平。结论:槲皮素可能通过降低肾小球P27水平改善糖尿病肾病症状。

周期素A过表达诱导S期细胞凋亡的研究

目的 探讨细胞周期 S期滞留细胞凋亡的分子基础。方法 用 Westernblot法测定 L- 2和 Br1-3pr- 1两细胞株细胞周期 S期进程相关分子 Rb、周期素 A、E、CDK2、CDC2及与细胞凋亡直接相关分子 Bcl- 2和Bax的表达 ,并用组蛋白磷酸化法测定周期素 A、E、CDK2和 CDC2相关激酶的活性。结果 经 PAL A处理后 ,发生 S期细胞凋亡的 L- 2细胞与不发生 S期细胞凋亡的 Br1- 3pr- 1细胞比较 ,其周期素 A的表达明显增加 ,Bcl- 2的表达下降。但经 PAL A处理后 ,其他分子的表达和激酶活性在上述两种细胞之间无明显差异。结论 周期素 A可能是 S期检查点基因的重要候选者 ,并可能通过调节 Bcl- 2的表达来控制 S期滞留细胞凋亡的发生。

糖尿病大鼠肾小球周期素激酶抑制剂p27的变化及意义

目的 :探讨糖尿病肾小球周期素激酶抑制剂p2 7水平的变化及p2 7在糖尿病 (DM)肾小球细胞 (特别是系膜细胞MC)肥大中的作用。 方法 :蛋白印迹 (Western杂交 )方法测定肾小球裂解液p2 7蛋白水平 ,RT PCR方法测定肾小球p2 7mRNA ,ELISA方法测定肾小球裂解液细胞外基质 (ECM)蛋白 (Ⅳ型胶原及纤维连接蛋白 )和尿白蛋白。 结果 :随着DM病程的延长 ,DM大鼠肾小球p2 7水平和肾小球ECM蛋白水平逐渐增高 ,2 4h尿白蛋白排泄量逐渐增加 ,同时DM大鼠肾重 /体重呈增高趋势。DM(2 8天 )大鼠与正常大鼠间肾小球p2 7mRNA无差别。不同病程糖尿病大鼠间全血血糖浓度无明显差异。 结论 :DM大鼠肾小球p2 7水平增高 ,p2 7水平增高可能在DM大鼠肾小球细胞肥大 (特别是MC肥大 )中起重要作用。

钙周期素结合蛋白促进胃癌细胞迁移侵袭和MMP-2、MMP-9、p-ERK1/2、p-AKT水平上调

目的探讨钙周期素结合蛋白(calcyclin binding protein/Siah-1-interacting protein, CacyBP/SIP)对胃癌细胞侵袭迁移的影响和潜在机制。方法采用免疫组织化学和Western blot方法检测不同T分期胃癌组织中CacyBP/SIP水平;Western blot检测胃癌细胞中CacyBP/SIP水平;MKN-45细胞转染si-CacyBP/SIP与Ad-CacyBP/SIP后,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭情况,Western blot检测MMP-2、MMP-9和p-ERK1/2、p-AKT水平。结果 CacyBP/SIP在胃癌组织和胃癌细胞中高表达;胃癌组织中CacyBP/SIP表达水平与T分期呈正相关;敲减CacyBP/SIP抑制MKN-45细胞的迁移侵袭能力和MMP-2、MMP-9、p-ERK1/2、p-AKT蛋白表达水平;过表达CacyBP/SIP促进MKN-45细胞迁移侵袭能力和MMP-2、MMP-9、p-ERK1/2、p-AKT蛋白表达水平。结论 CacyBP/SIP对胃癌转移侵袭能力的促进作用可能与其上调MMP-2、MMP-9、p-ERK1/2、p-AKT水平有关。

高糖培养的系膜细胞肥大与周期素激酶抑制剂p27的关系

目的 研究周期素激酶抑制剂ｐ２７在高糖培养系膜细胞（ＭＣ）肥大中的作用。方法 蛋白印迹（ｗｅｓｔｅｒｎ杂交）方法测定ＭＣ裂解液ｐ２７ 蛋白水平，［３Ｈ］胸腺嘧啶核苷（３Ｈ］ＴｄＲ）及［３Ｈ］亮氨酸（［３Ｈ］ｌｅｕ）掺入方法测定ＭＣ细胞的肥大情况，观察ｐ２７反义寡核苷酸（ＯＤＮ）转染对高糖培养ＭＣ肥大的影响。结果 高糖（４５０ｍｇ／ｄｌ）无血清培养的ＭＣ同正常糖（１００ ｍｇ／ｄｌ）无血清培养的 ＭＣ相比，ｐ２７水平增高，［３Ｈ］ ｌｅｕ掺入增加，［３Ｈ］ ＴｄＲ掺入减少；ｐ２７反义 ＯＤＮ转染后高糖无血清培养 ＭＣ［３Ｈ］ ｌｅｎ掺入减少，［３Ｈ］ ＴｄＲ掺入增加；用甘露醇提高正常糖培养液渗透压并不增加 ＭＣ中Ｐ２７水平。结论 高糖培养的ＭＣ中ｐ２７水平明显增高，增高的ｐ２７在高糖培养ＭＣ细胞肥大中起重要作用。

氨基胍通过降低周期素激酶抑制剂P27水平减轻高糖培养系膜细胞肥大程度

目的 :研究氨基胍 (AG)减轻高糖培养系膜细胞 (MC)肥大程度与周期素激酶抑制剂 P2 7的关系。方法 :Western印迹方法测定 MC裂解液 P2 7水平 ,[3H]胸腺嘧啶核苷 ([3H]Td R)及 [3H]亮氨酸 ([3H ]L eu)掺入方法测定 MC肥大情况。 结果 :同正常糖 (10 0 mg/ dl)培养相比 ,高糖 (45 0 mg/ dl)培养 MC中 P2 7水平增高 (P<0 .0 1) ,MC肥大 ;[3H ]L eu掺入增加及[3H]Td R掺入降低 (P<0 .0 1) ;AG(0 .2 5 mm ol/ L )降低高糖培养 MC中 P2 7水平 [(2 .5± 0 .6 ) vs (4.0± 0 .8) ,P<0 .0 5 ],使MC肥大程度减轻 ;[3H]leu掺入降低 ,[(342 6± 5 32 ) vs (46 5 2± 30 9) cpm/孔 ,P<0 .0 1],[3H ]Td R掺入增加 [(12 33± 6 9)vs (5 4 3± 2 7) cpm/孔 ,P<0 .0 1]。 结论 :AG可能通过降低高糖培养 MC中 P2 7水平减轻

甲状旁腺肿瘤中细胞周期素D1的表达及其临床意义

目的:探讨细胞周期素D1在甲状旁腺组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学法对3例甲状旁腺腺癌、8例甲状旁腺腺瘤、13例甲状旁腺增生、1例甲状旁腺囊肿以及10例正常甲状旁腺组织中细胞周期素D1的表达进行了检测。结果:甲状旁腺腺瘤组和腺癌组的细胞周期素D1过度表达比例高于正常甲状旁腺组(P<0.05);而甲状旁腺增生组与甲状旁腺腺癌组、腺瘤组和正常甲状旁腺组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:细胞周期素D1的过度表达在甲状旁腺腺瘤和腺癌的发生中起重要作用。

反义人钙周期素结合蛋白编码基因转染对胃癌细胞多药耐药性的影响

目的 研究hCacyBP编码基因在胃癌多药耐药机制中的作用。方法 采用Northern杂交 ,检测SGC790 1细胞及SGC790 1/ADR细胞中hCacyBPmRNA表达水平的差异。将hCacyBPcDNA克隆到 pcDNA3.1中 ,构建反义核酸真核表达载体 pcDNA3.1/hCacyBP ,并转染耐阿霉素人胃癌细胞 ,用RT PCR检测转染细胞中hCacyBPmRNA水平的变化。用MTT比色法和FCM ,分别检测SGC790 1/ADR细胞、pcDNA3.1/hCacyBP 和 pcDNA3.1分别转染的SGC790 1/ADR细胞 ,对ADR的药物敏感性和胞内ADR的蓄积浓度。结果 Northern杂交证实 ,SGC790 1/ADR细胞中hCacyBPmRNA表达的水平显著高于SGC790 1细胞。成功地构建了pcDNA3.1/hCacyBP 。以 pcDNA3.1/hCacyBP 转染的SGC790 1/ADR细胞中hCacyBPmRNA的表达水平 ,显著低于空载体转染及未转染的SGC790 1/ADR细胞。MTT检测表明 ,转染pcDNA3.1/hCacyBP 的细胞 ,对ADR的药物敏性较空载体转染及未转染的SGC790 1/ADR细胞有所增高 ,生存率较后两者为低。FCM显示 ,转染 pcD NA3.1/hCacyBP 的SGC790 1/ADR细胞、转染 pcDNA3.1及未转染的SGC790 1/ADR细胞内ADR的蓄积浓度 ,分别为6 .72、5 .6 2和 5 .5 4。结论 hCacyBP碥码基因对胃癌细胞的MDR有一定的影响 。

胃癌前病变及胃癌组织中抑癌基因P16、Rb及周期素D_1蛋白表达的研究

目的:研究抑癌基因P16、周期素D1(Cyclin D1)、视网膜母细胞瘤(Rb)蛋白在胃癌前病变(不典型增生和肠化)及胃癌组织中的表达。方法:采用免疫组化法检测10例正常胃黏膜,15例胃不典型增生,15例胃黏膜肠化生,30例胃癌组织中P16、Cyclin D1、Rb蛋白的表达,并结合胃癌临床资料进行分析。结果:P16蛋白阳性表达,正常胃黏膜90％,不典型增生86.67％,肠化86.67％,胃癌36.67％,胃癌组与正常对照组及胃癌前病变组(不典型增生及肠化)间差异均有极显著意义(P<0.01)。Cyclin D1蛋白阳性表达,正常胃黏膜10％,不典型增生20％,肠化20％,胃癌53.33％,胃癌组阳性率与其他3组相比差异有显著性(P<0.05)。Rb蛋白在正常胃黏膜、肠上皮化生、不典型增生及胃癌组织中阳性率分别为90％、80％、80％、50％,其中胃癌组阳性率与正常胃黏膜组相比差异有显著性(P<0.05)。P16、Cyclin D1蛋白与胃癌分化程度、淋巴结转移与否、远处转移与否呈一定的相关性。结论:P16、Cyclin D1、Rb基因在胃癌的发生中起一定的作用;P16、Cyclin D1、Rb蛋白的检测在胃癌的早期诊断中具有一定的价值,并有助于胃癌的预后判断。

周期素依赖激酶抑制剂对大鼠大脑中动脉缺血后海马迟发性神经元死亡的影响

目的探讨细胞周期素依赖激酶(CdK)抑制剂--olomoucine对大鼠局灶性脑缺血再灌流后海马迟发性神经元死亡的影响。方法 给予大脑中动脉阻塞再灌流大鼠腹腔注射olomoucine,观察再灌流后3,7 d皮层损伤侧海马半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达水平;同时,应用免疫组织化学方法测定再灌流后3,7 d皮层损伤侧海马CAl区神经元细胞核特异性抗原(NeuN)的表达。结果olomoucine能明显抑制大鼠局灶性脑缺血再灌流后海马PCNA蛋白的表达(P＜0.01),降低caspase-3水平(P＜0.01);同时显著减少了海马CAl区神经元的丢失(P＜0.01)。结论研究表明,olomoucine通过抑制细胞增殖活动、减少caspase-3生成,从而降低局灶性脑缺血再灌流后海马迟发性神经元死亡的发生。

压力超负荷致心肌细胞增殖细胞核抗原和周期素D1的表达变化及其与心肌肥大的关系

目的观察压力超负荷所致肥大心肌中增殖细胞核抗原和周期素D1的表达变化,探讨其与心肌肥大的相互关系。方法采用腹主动脉缩窄法建立大鼠心肌肥大模型,在术后不同时间点用颈总动脉插管法动态测定心功能并观察左心室体重比及心肌细胞横径的变化,用免疫组织化学方法检测心肌细胞增殖细胞核抗原和周期素D1表达变化,分别计算其阳性细胞占总心肌细胞数的比率。结果腹主动脉缩窄术后各时间点左心室体重比及心肌细胞横径进行性增高(P<0.05),同时心功能也进行性增强(P<0.05)。增殖细胞核抗原和周期素D1阳性率术后1周时显著增高(P<0.01),随后逐步回降,6周时同对照组相比差异无显著性。结论心肌肥大中不仅有心肌细胞体积的增大而且早期伴有增殖指标高表达,这种增殖指标的高表达随着心脏对负荷的适应逐步回降至正常水平,而心肌细胞体积仍进行性增大。

地塞米松干预大鼠星形胶质细胞周期素的表达及细胞周期进程

背景:有研究表明地塞米松可引起星形胶质细胞凋亡,但其机制不清,有关地塞米松干扰星形胶质细胞的周期素表达的作用未见报道。目的:观察地塞米松引起大鼠星形胶质细胞凋亡与周期素表达的关系。方法:将不同浓度的地塞米松(0,10-5,10-4,10-3mol/L)与纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞共同孵育24h后,经流式细胞仪检测细胞周期,并用免疫细胞化学方法检测周期素A和E在星形胶质细胞内的表达。结果与结论:地塞米松10-5,10-4mol/L浓度组G1期细胞指数较对照组增加(P<0.05,P<0.01),10-3mol/L组的S期细胞指数较对照组明显升高(P<0.01);周期素A的表达随着地塞米松浓度的升高而减弱(P<0.05)。周期素E的表达在地塞米松0,10-5,10-4mol/L组随着地塞米松浓度的升高而减弱(P<0.05),但在10-3mol/L浓度组反而表达增强(P<0.01)。说明地塞米松10-5,10-4mol/L干预的星形胶质细胞周期进程受阻于G1期且与周期素A和E表达降低有关,地塞米松10-3mol/L干预的星形胶质细胞周期进程受阻于S期主要与周期素A表达降低有关。

周期素依赖激酶2在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 观察细胞周期因子周期素依赖激酶 2 (CDK2 )在非小细胞肺癌 (NSCL C)中的表达 ,探讨其临床意义。 方法 采用免疫组织化学链霉素亲生物蛋白 -过氧化酶 (S- P)法 ,观察 6 6例临床资料完整的 NSCL C组织和 12例正常肺组织中 CDK2的表达 ,并对其与临床预后的关系进行相关分析。 结果 在 6 6例 NSCL C患者中 ,CDK2在细胞核呈阳性免疫反应 ,其阳性表达率为 84 .85 %。 CDK2表达对年龄、性别、组织学类型、p TNM分期和淋巴结转移均无显著的影响 (P>0 .0 5 ) ,而对肿瘤的大小、病理分级有显著影响 (P<0 .0 5 )。CDK2表达阳性者与阴性者比较生存时间明显缩短 (P=0 .0 14 ) ,CDK2阳性患者估计增加相对风险为 2 .5。 结论 CDK2在 NSCL C组织中细胞核呈阳性免疫反应 ,其过度表达与 NSCL C患者临床病理特征和预后不良有关。

人钙周期素结合蛋白 (hCacyBP)基因的原核表达及其鼠抗血清的制备

目的 :原核表达hCacyBP并制备小鼠抗hCacyBP多克隆抗体。观察该蛋白组织分布情况 ,研究其可能在胃癌多药耐药形成中的作用。方法 :将hCacyBP基因的全编码区克隆进原核表达载体pET2 8a中 ,转化E .coli,以IPTG诱导重组目的蛋白的表达。以纯化的重组目的蛋白作为免疫原免疫小鼠 ,制备相应的多克隆抗体。以Westernblot法检测hCacyBP在兔 10种组织的表达情况 ;以Westernblot和免疫组化染色法检测hCa cyBP在胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR及其亲本药敏细胞SGC790 1中的表达和分布。结果 :成功地表达重组目的蛋白并制备了小鼠抗hCacyBP的多克隆抗体 ,Westernblot分析显示 ,hCacyBP在兔的 10种组织中均有表达 ,在脑和肝组织中表达略高 ;hCacyBP在胃癌耐药细胞SGC790 1/VCR及其亲本药敏细胞SGC790 1中的表达未见明显差异。结论 :CacyBP是在多种组织中广泛表达的一种蛋白质。制备的小鼠抗hCa cyBP多克隆抗体特异性较高 ,为进一步研究hCacyBP的功能提供了工具。