乳腺癌组织中周期素依赖性激酶10基因启动子甲基化状态检测的临床意义

目的探讨乳腺癌组织中周期素依赖性激酶10(cyclin-dependent kinase 10,CDK10)基因启动子甲基化状态及其与临床病理参数的联系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应检测CDK10基因启动子在50例乳腺癌组织及相应癌旁组织中的甲基化状态并结合临床病理资料进行分析。结果在乳腺癌组织中CDK10基因甲基化阳性率为60%(30/50),癌旁对照组织未出现CDK10基因甲基化。CDK10基因甲基化同淋巴结转移与临床分期显著相关(P<0.05)。结论 CDK10基因甲基化与乳腺癌临床分期密切相关,可能是参与乳腺癌发展的重要分子事件。

人周期素依赖性激酶10真核表达质粒的构建及鉴定

目的构建人周期素依赖性激酶10(cyclin-dependent kinase 10,CDK10)真核表达质粒,并进行鉴定。方法采用RT-PCR法从人鼻咽癌细胞株HNE1中扩增CDK10基因全长编码区序列,克隆入真核表达载体pc DNA3.1(+)中,构建重组表达质粒pc DNA-CDK10,转染人鼻咽癌细胞株CNE-2,采用Western blot法检测转染细胞中CDK10蛋白的表达水平。结果重组真核表达质粒pc DNA-CDK10经双酶切及测序证实构建正确;经800μg/ml的G418筛选2周后,获得过表达CDK10的稳定转染细胞系CDK10c1和CDK10c2;与空载体转染对照组相比,CDK10c1和CDK10c2细胞中CDK10蛋白的表达量均显著升高(P均<0.05)。结论成功构建了人CDK10真核表达质粒。

小分子细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制剂flavopiridol联合泰素治疗卵巢癌的实验研究

目的:检测flavopiridol联合泰素对人卵巢癌细胞系SKOV3、裸鼠人卵巢癌皮下及腹腔移植瘤模型的治疗作用。方法:应用CCK-8法、流式细胞术和原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测flavopiridol和泰素作用后卵巢癌细胞系SKOV3的细胞存活率和凋亡率;应用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测作用前后细胞中cyclinD1的表达:应用ELISA法检测细胞中活性caspase-3的表达。建立裸鼠人卵巢癌皮下及腹腔移植瘤模型,观测flavopiridol和泰素治疗前后裸鼠肿瘤体积的变化并计算抑瘤率,用TUNEL和免疫组化法分别检测作用前后肿瘤组织中的凋亡情况和微血管密度(MVD)值。结果:flavopiri-dol(300nmol/L)或泰素(1μmol/L)单独应用24h均能显著降低细胞存活率,增强caspase-3活性,诱导细胞凋亡,并下调细胞中cyclinD1的表达。Taxol先作用24h再用flavopiridol作用24h的联合用药对二者的上述作用产生显著的协同效应:联合用药后细胞存活率为(5.2±0.8)%,凋亡率为(51.10±2.52)%,caspase-3活性相对值为0.602±0.008,cy-clinD1相对表达水平为0.264±0.076。Flavopiridol和泰素单独应用均能显著抑制皮下移植瘤生长(抑瘤率分别为84.5%和85.7%),并降低肿瘤组织MVD值(分别为12.4±4.7vs 35.2±10.3和15.2±2.9 vs 35.2±10.3)。二者联合应用抑瘤作用稍差(抑瘤率68.9%),抑制MVD作用(23.0±5.1 vs 35.2±10.3)也不及单药治疗。结论:Flavopiridol和泰素均能通过致凋亡作用显著抑制卵巢癌细胞及移植瘤生长,二者联合应用对体外培养的卵巢癌细胞具有协同杀伤作用,但体内治疗中无协同抑瘤作用。

周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)在大鼠脑发育过程中的表达及其分布

目的 研究周期素依赖性蛋白激酶 5 (CDK5 )的mRNA及蛋白在大鼠发育过程中脑内的表达及分布。方法 采用胚胎至老年期Wistar大鼠脑片行原位杂交组织化学和免疫细胞化学染色。 结果 1 原位杂交结果显示 ,脑内CDK5mRNA在大鼠E14～P35 0整个发育过程中均有表达 ,成年后趋于稳定 ;脑内CDK5mRNA主要定位于神经元 ,阳性区域主要分布于大脑皮层、海马、丘脑、下丘脑、小脑及部分神经核团。 2 免疫组织化学结果显示 ,出生后脑内CDK5蛋白表达较强 ,胚胎及老年鼠表达较弱 ;阳性区域集中在室周区、海马、小脑及部分神经核团内 ;老年鼠仅在海马、小脑蒲肯野细胞层内表达。 结论 以上结果进一步证明 ,脑内CDK5的作用贯穿了整个神经发育的各个时期 ;

周期素依赖性蛋白激酶5及其激动剂在神经系统发育中的作用

周期素依赖性蛋白激酶5（cyclin dependent kinase5，CDK5）是CDKs家族的成员之一，属于丝氨酸／苏氨酸激酶家族，具有与其他的CDKs成员同源的序列。CDK5最早是从Hela细胞中分离并克隆，并且发现是一种PSSALRE激酶与cdc2和CDK2的基因序列有57％的同源性，故又称为edc2相关的蛋白激酶。近年的研究表明CDK5并不像其他家族成员（CDKs）主要参与细胞周期的调控，

周期素依赖性激酶抑制剂p18^(INK4C)在急性肾损伤中的表达受血红素加氧酶1调控

目的初步探讨周期素依赖性激酶抑制剂p18INK4C(p18)在急性肾损伤(AKI)中的肾保护作用机制。方法利用血红素加氧酶(HO)-1的化学诱导剂(hemin)和抑制剂(锌原卟啉,ZnPP)观察在顺铂诱导的小鼠肾脏上皮细胞(TCMK-1)损伤中HO-1与p18之间的关系。利用p18基因敲除鼠,观察p18基因缺失对于顺铂诱导的HO-1表达的影响。结果在顺铂诱导的AKI小鼠肾组织及损伤的TCMK-1细胞中,p18、HO-1的mRNA和蛋白表达均明显上调(P值均<0.05),HO-1的诱导表达峰值先于p18上调峰值。在无血清培养的TCMK-1细胞中,HO-1诱导剂hemin与细胞共同孵育后明显上调TCMK-1细胞中HO-1和p18蛋白的表达(P值均<0.05)。相反,HO-1抑制剂ZnPP与顺铂共同孵育TCMK-1后的第8和16小时,ZnPP不仅抑制了顺铂诱导的HO-1蛋白表达的上调,而且使p18的表达受到明显抑制。p18-/-与p18+/+小鼠肾组织中HO-1蛋白表达基线值的差异无统计学意义(P>0.05),顺铂注射后第3天,p18-/-与p18+/+小鼠肾组织中HO-1蛋白的诱导表达量的差异亦无统计学意义(P>0.05)。顺铂注射后第3天,p18+/+(WT)小鼠肾组织中p18蛋白表达上调,而p18-/-小鼠肾脏中p18蛋白表达缺失。结论在顺铂诱导的AKI中,HO-1调控p18的表达,p18部分介导了HO-1在AKI中的保护作用。

周期素依赖性激酶在肿瘤发生中的作用

周期素依赖性激酶是与细胞周期相关的细胞周期蛋白——周期素依赖性激酶——周期素依赖性激酶抑制物网络调节系统中的中心环节 ,它在细胞周期调控中异常 ,与肿瘤的发生密切相关。对于 Cdk的生物学特性 ,作用机制及其检测在肿瘤学研究、诊断、治疗以及其预后观察中都有十分重要的价值。本文对细胞周期、Cdk网络调节系统与细胞周期的关系、Cdk系统与肿瘤发生。

老年性学习记忆减退与大鼠脑发育过程中周期素依赖性蛋白激酶5的表达(英文)

背景:周期素依赖性蛋白激酶5是周期素依赖性蛋白激酶家族的成员之一,脑发育过程中周期素依赖性蛋白激酶5m RNA 及其蛋白在脑内的表达及分布状况与神经退行性变思维认知学的关系一直被研究者关注。目的:探讨大脑发育过程中的周期素依赖性蛋白激酶5对神经系统的发生和退行性变的影响。设计:单因素方差分析实验。单位:解放军第一军医大学组织学与胚胎学教研室和神经生物学教研室。材料:实验在解放军第三军医大学组织学与胚胎学实验室完成。W istar大鼠胚胎期(E8～E21)、新生期(P0～P15)、幼年期(P16～2个月)、成年期(>2个月)及老年期(>8个月后)5个阶段25只大鼠,每组5只。方法:采用胚胎期至老年期大鼠脑片行原位杂交组织化学和免疫细胞化学染色。主要观察指标:不同脑区内周期素依赖性蛋白激酶5m RNA 及其蛋白的阳性细胞分布及表达状况。结果:25只大鼠全部进入结果分析。①周期素依赖性蛋白激酶5mRNA 在大鼠E14～P350整个发育过程中均有表达,成年后趋于稳定;周期素依赖性蛋白激酶5mRNA 主要定位于神经元,阳性区域主要分布于大脑皮质、海马、丘脑、下丘脑、小脑及部分神经核团。②出生后周期素依赖性蛋白激酶5表达较强,胚胎及老年鼠表达较弱;阳性区域集中在室周区、海马、小脑及部分神经核团内;老年鼠仅在海马、小脑蒲肯野细胞层内表达。结论:脑内周期素依赖性蛋白激酶5的作用贯穿了整个神经发育的各个时期,在新生期、幼年期有较为显著的表达,成年后表达下降,尤以老年期显著。老年大鼠海马内周期素依赖性蛋白激酶5的表达下调可能与老年性学习记忆减退的发生密切相关。

周期素依赖性蛋白激酶抑制物1A相互作用锌指蛋白1在结肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨周期素依赖性蛋白激酶抑制物1A相互作用锌指蛋白1(Ciz1)在结肠癌中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学染色方法观察Ciz1蛋白在80例结肠癌和正常结肠组织中的表达。结果:癌组织中Ciz1蛋白的阳性表达率显著高于正常结肠组织(62.5%vs42.5%,P=0.007),Ciz1蛋白过表达与结肠癌T分期(P=0.027)、淋巴结转移(P=0.033)、M分期(P=0.027)以及AJCC分期(P=0.022)显著相关。结论:Ciz1蛋白过表达可能在结肠癌发生发展过程中发挥重要作用。

周期素依赖性激酶5在阿尔茨海默病中的作用

周期素依赖性激酶5在神经系统发育过程中,可调节轴突生长、神经元分化及迁移。最近研究表明,周期素依赖性激酶5激酶活性失调与阿尔茨海默病的发病有关。本文对周期素依赖性激酶5的生物学特征及其在阿尔茨海默病的作用进行综述。

周期素依赖性激酶5激活结合蛋白3在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨周期素依赖性激酶5激活结合蛋白3(CDK5RAP3)在结肠癌组织中的表达,并分析其表达水平与结肠癌患者临床病理特征及预后的关系。方法通过GEPIA数据库分析CDK5RAP3在肿瘤组织及正常组织中的表达水平;采用组织芯片技术和免疫组织化学染色法,检测88例结肠癌组织以及对应正常组织中CDK5RAP3的表达水平,并分析CDK5RAP3表达水平与结肠癌临床病理特征及预后的关系。采用Cox比例风险回归模型分析影响结肠癌患者预后的独立因素。结果GEPIA数据库分析显示,CDK5RAP3在结肠癌组织中呈低表达,而在正常组织中呈高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。同时免疫组化结果也显示,CDK5RAP3在结肠癌组织中以不表达和低表达为主,而在正常组织中以高表达为主。结肠癌癌和正常组织中CDK5RAP3的H-score中位数及四分位数分别为220(205,250)和270(240,290),CDK5RAP3在结肠癌组织中的表达显著低于正常组织,差异有统计学意义(P<0.001)。CDK5RAP3的表达水平与结肠癌各临床病理特征均无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,CDK5RAP3低表达的结肠癌患者中位总生存期(OS)为42.6个月,较CDK5RAP3高表达患者显著缩短,差异有统计学意义(P=0.004)。Cox多因素分析结果显示,CDK5RAP3表达水平(HR=0.420,95%CI:0.210~0.839,P=0.014)、脉管侵犯(HR=2.926,95%CI:1.015~8.429,P=0.047)和TNM分期(HR=3.255,95%CI:1.453~7.291,P=0.004)均为影响结肠癌患者预后的独立因素。结论CDK5RAP3在结肠癌组织中的表达下调,有望成为结肠癌患者的预后预测指标。

Y染色体性别决定区相关高速泳动族框因子9和周期素依赖性激酶4在结直肠息肉、结直肠癌中的表达及意义

目的 探究Y染色体性别决定区相关高速泳动族框因子9(SOX9)和周期素依赖性激酶4(CDK4)在结直肠息肉、结直肠癌中的表达及意义。方法 选取中国人民解放军第八十二集团军医院2015年1月至2017年6月收治的结直肠癌病人病理组织标本(结直肠癌组)94例及癌旁正常结直肠组织(正常结直肠组)39例,另取同时期结直肠息肉病人结直肠息肉组织(结直肠息肉组)51例。采用免疫组织化学SP染色法检测SOX9、CDK4的表达情况,分析SOX9、CDK4表达与结直肠癌病人临床病理参数之间的关系;对结直肠癌病人进行术后复查随访,分析结直肠癌病人生存情况。结果 SOX9在正常结直肠组织、结直肠息肉组织和结直肠癌组织中的阳性表达率分别为10.26%(4/39)、27.45%(14/51)、76.59%(72/94),差异有统计学意义(P<0.05);CDK4在正常结直肠组织、结直肠息肉组织和结直肠癌组织中的阳性表达率分别为7.69%(3/39)、21.57%(11/51)、54.84%(51/94),差异有统计学意义(P<0.05);正常结直肠组织中SOX9、CDK4蛋白表达水平低于结直肠息肉组织、结直肠癌组织(P<0.05),结直肠息肉组织中SOX9、CDK4蛋白表达水平低于结直肠癌组织(P<0.05)。结直肠癌病人病理组织SOX9、CDK4表达与肿瘤分化程度、临床分期、是否合并淋巴结转移有关(P<0.05);结直肠癌组织SOX9与CDK4表达呈正相关(r=0.58,P<0.001),由TCGA数据库检索结直肠癌组织SOX9、CDK4基因表达相关性显示,二者之间亦呈正相关(r=0.40,P<0.001);SOX9高表达、低表达病人术后3年累积生存率分别为44.6%、72.4%,两组比较Log-rank检验差异有统计学意义(χ^(2)=8.31,P=0.004);CDK4高表达、低表达病人术后3年累积生存率分别为25.6%、76.5%,两组比较Log-rank检验差异有统计学意义(χ^(2)=36.36,P<0.001)。结论 SOX9和CDK4在结直肠癌组织、结直肠息肉组织、正常结直肠组织中的阳性表达率逐渐降低,与结直肠癌肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移情况及预后有关,可能参与结直肠癌的发生发展过程。

周期素依赖性蛋白激酶-5在不同成年牛皮肤中的表达

采用不同毛色的牛皮作为研究对象,运用免疫组织化学法对周期素依赖性蛋白激酶-5(CDK-5)在成年牛皮肤中的表达进行定位和定性研究。结果表明,CDK-5在牛皮肤毛囊的外根鞘和毛球部呈阳性表达,说明CDK-5可能与牛毛色形成有关。

miR-365-3p抑制CDK-10表达对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的探讨miR-365-3p通过周期素依赖性激酶-10(CDK-10)影响口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡与周期的机制。方法收集在本院就诊的40例口腔鳞癌患者肿瘤组织样本及癌旁正常组织样本,检测其miR-365-3p和CDK-10表达水平。随机将人舌鳞癌细胞系(CAL-27)分为空白组、对照组及miR-365-3p三组。对照组与miR-365-3p组分别转染miR-365-3p NC与miR-365-3p mimic,空白组不进行转染。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-365-3p表达,CCK-8法及流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡。qPCR和Western blot检测CDK-10的表达水平。结果相较于对照组与空白组,miR-365-3p在miR-365-3p组的表达水平显著升高(P<0.05),细胞增殖指数显著降低(P<0.05);细胞凋亡水平显著升高(P<0.05)。转染72 h后,相较于空白组与对照组,miR-365-3p组G1期比例显著降低(P<0.05),S期+G2期比例则显著增加(P<0.05)。转染48 h与72 h后,相较于空白组与对照组CDK-10蛋白在miR-365-3p组的相对表达量显著降低(P<0.05)。结论miR-365-3p在口腔鳞癌细胞中的高表达能够抑制CDK-10表达,从而抑制细胞增殖,调节细胞周期,促进细胞凋亡。

周期素依赖性激酶4抑制因子基因启动子甲基化与口腔颊癌发生发展的关系

目的探讨p16基因启动子甲基化在口腔颊癌发生发展中的作用。方法对颊黏膜白斑10例、颊癌30例的新鲜标本采用MSP、Western blot杂交分析p16甲基化和p16蛋白表达情况。结果颊癌p16甲基化率高于颊部白斑(P<0·05);颊癌有颈淋巴结转移组p16甲基化率高于无转移组(P<0·05);颊癌p16蛋白失表达与pl6基因甲基化呈正相关(P<0·01)。结论启动子甲基化是导致p16基因失活的主要方式,与颊癌的发生、转移有密切关系。

周期素依赖性激酶抑制剂对神经元损伤的保护作用

周期素依赖性激酶抑制剂(cyclin-dependent kinases inhibitors,CDKIs)分为INK4(inhibitor of CDK4,INK4)和KIP(kinase inhibition protein,KIP)两大家庭,主要通过视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein,pRb)或p53两条途径对细胞周期起调控作用。在脑缺血再灌注损伤后周期素依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,cDKs)所调控的信号通路被激活,细胞周期紊乱可促使神经元凋亡,CDKIs对神经元损伤具有保护作用。

细胞周期蛋白依赖性激酶10在瘢痕疙瘩中的表达及其临床意义

目的研究细胞周期蛋白依赖性激酶10在瘢痕疙瘩中的异常表达及其在瘢痕疙瘩发生机制中的作用。方法应用反转录聚合酶链式反应（1it．PCR）及Western Blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶10mRNA及细胞周期蛋白依赖陛激酶10蛋白在人正常皮肤成纤维细胞及人瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达；将外源重组性真核质粒pCMV6-细胞周期蛋白依赖性激酶10转染到人瘢痕疙瘩成纤维细胞内为实验组；转染空质粒细胞及未处理细胞为对照组。用MTF法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖状况。结果与正常皮肤成纤维细胞相比，细胞周期蛋白依赖陛激酶10mRNA和细胞周期蛋白依赖f生激酶10蛋白在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达显著下调，差异具有统计学意义（P〈0．01）；与空pCMV6组和未转染组相比，pCMV6-细胞周期蛋白依赖性激酶10组细胞生长明显受到抑制，差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论CDKl0在瘢痕疙瘩中呈下调表达，以CDKl0为靶点的基因治疗有潜在的临床应用前景。

周期素依赖性激酶抑制因子3在11种常见肿瘤中的蛋白表达模式

目的 观察周期素依赖性激酶抑制因子3（CDKN3）基因在不同肿瘤的表达模式,探讨其在不同肿瘤发生发展中的角色.方法 应用免疫组织化学技术对11种常见肿瘤类型进行CDKN3蛋白表达及组织定位进行检测.结果 发现CDKN3蛋白定位呈现胞浆阳性,少量核阳性,在各类肿瘤无明显差异.直肠癌（4.40±0.26）、结肠癌（4.10±0.55）及胰腺癌（4.00±0.50）细胞中表达丰度高;而在肺癌（3.30±0.35）、食道癌（3.60±0.30）、胃癌（3.20±0.50）、卵巢癌（3.30±0.40）及肝癌（3.00±0.55）中呈现中等表达,在胆管癌（2.30 ±0.42）、乳腺癌（2.20 ±0.36）及肾癌（2.00 ±0.15）中表达较弱.结论 CDKN3在各类肿瘤中表达强弱有明显差异,这说明其在肿瘤发生发展中的作用可能因肿瘤背景而异.

外阴上皮内非瘤样病变女性患者细胞周期蛋白D1、周期素依赖性蛋白激酶4和周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27的表达及意义

目的探讨外阴上皮内非瘤样病变(NNEDV)女性患者细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)、周期素依赖性蛋白激酶4(CDK4)和周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27 (P27)的表达及意义,为临床诊治提供参考依据。方法采用免疫组织化学(SP)法研究NNEDV患者皮损中Cyclin D1,CDK4及P27蛋白的表达。结果①NNEDV组织的3组病理类型[外阴鳞状上皮增生(SH)组、外阴硬化性苔癣(LS)组、SH合并LS组]中Cyclin D1、CDK4蛋白阳性表达率明显高于正常组,差异有统计学意义(均P<0. 05),P27蛋白阳性表达率低于正常组,但差异无统计学意义(均P>0. 05);而病变的3组病理类型之间Cyclin D1、CDK4及P27蛋白阳性表达率差异无统计学意义(均P>0. 05)。②Cyclin D1和CDK4在NNEDV组中棘细胞层/基底细胞层阳性表达率的比值高于正常组,差异有统计学意义(均P<0. 01); P27的棘细胞层/基底细胞层阳性表达率比值在两组中差异无统计学意义(P>0. 05)。结论①Cyclin D1及CDK4蛋白的高表达可能是NNEDV发病的原因之一。②NNEDV的3种病理类型可能具有共同的或相似的发病机制。③NNEDV组织各层上皮细胞增殖不平衡说明NNEDV存在恶变的可能性。④本研究认为在NNEDV的随访中P27蛋白作为随访病变恶变的指标比Cyclin D1及CDK4的意义更大。