外阴上皮内非瘤样病变女性患者细胞周期蛋白D1、周期素依赖性蛋白激酶4和周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27的表达及意义

目的探讨外阴上皮内非瘤样病变(NNEDV)女性患者细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)、周期素依赖性蛋白激酶4(CDK4)和周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27 (P27)的表达及意义,为临床诊治提供参考依据。方法采用免疫组织化学(SP)法研究NNEDV患者皮损中Cyclin D1,CDK4及P27蛋白的表达。结果①NNEDV组织的3组病理类型[外阴鳞状上皮增生(SH)组、外阴硬化性苔癣(LS)组、SH合并LS组]中Cyclin D1、CDK4蛋白阳性表达率明显高于正常组,差异有统计学意义(均P<0. 05),P27蛋白阳性表达率低于正常组,但差异无统计学意义(均P>0. 05);而病变的3组病理类型之间Cyclin D1、CDK4及P27蛋白阳性表达率差异无统计学意义(均P>0. 05)。②Cyclin D1和CDK4在NNEDV组中棘细胞层/基底细胞层阳性表达率的比值高于正常组,差异有统计学意义(均P<0. 01); P27的棘细胞层/基底细胞层阳性表达率比值在两组中差异无统计学意义(P>0. 05)。结论①Cyclin D1及CDK4蛋白的高表达可能是NNEDV发病的原因之一。②NNEDV的3种病理类型可能具有共同的或相似的发病机制。③NNEDV组织各层上皮细胞增殖不平衡说明NNEDV存在恶变的可能性。④本研究认为在NNEDV的随访中P27蛋白作为随访病变恶变的指标比Cyclin D1及CDK4的意义更大。

大黄素抑制系膜细胞增生与周期素激酶抑制剂p27的关系

目的 :探讨周期素激酶抑制剂p2 7在大黄素抑制肾系膜细胞 (mesangialcell,MC)增生中的作用。方法 :蛋白印迹 (west ern杂交 )方法测定MC裂解液p2 7蛋白水平 ,[3H]胸腺嘧啶核苷 ([3H]TdR)测定MC增生的情况 ,观察不同浓度大黄素 (50mg/L、10 0mg/L )对肿瘤坏死因子 α(tumornecrosisfactor α ,TNF α)刺激的MC中p2 7水平及增生程度的影响。结果 :TNF α (2 0万U/L)使无血清培养 2 4h的MC中p2 7水平降低 ,同时使 [3H]TdR掺入增加 ;大黄素提高TNF α刺激的MC中p2 7水平 ,同时使 [3H]TdR掺入减少。大黄素的上述作用随剂量的增大而增强。结论 :大黄素可能通过提高p2 7水平抑制TNF α诱导的MC增生。

转化生长因子β1和即刻早期基因及p27在中耳胆脂瘤上皮中的表达

目的 研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactor β1,TGF β1)、即刻早期基因 (c fos)、周期素依赖性激酶抑制蛋白 p2 7在中耳胆脂瘤上皮中的表达及相互之间的关系 ,探讨其表达对胆脂瘤侵袭能力的影响。方法 应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶染色法检测TGF β1、c fos和 p2 7在 31例胆脂瘤上皮、11例胆脂瘤患者外耳道上皮和 10例正常外耳道上皮中的表达 ,应用计算机图像分析系统对其阳性表达进行定量分析。结果 TGF β1和c fos在胆脂瘤上皮中表达阳性率分别为 87 1%和 83 9% ,与胆脂瘤患者外耳道上皮和正常外耳道上皮相比表达差异有显著性。而p2 7在胆脂瘤上皮和外耳道上皮组上皮中均未见阳性表达。胆脂瘤上皮中c fos与TGF β1表达无相关性 (r =0 339,P =0 331) ;胆脂瘤侵袭能力与c fos表达有高度显著相关关系 (r =- 0 96 5 ,P <0 0 1) ,与TGF β1表达也有高度相关关系 (r =- 0 4 0 6 ,P <0 0 1)。 结论 即刻早期基因c fos在胆脂瘤中表达显著增强 ,且与胆脂瘤的侵袭能力有高度显著相关性 ,提示高c fos表达是胆脂瘤高增殖特征的因素之一。TGF

舌鳞状细胞癌组织中Cks1、Skp2和p27^(kip1)蛋白的表达及其临床意义

目的:检测舌鳞状细胞癌(舌癌)组织中Cks1、Skp2和p27kip1蛋白的表达,分析其与患者临床病理特征的关系,探讨其在舌癌的发生发展及预后中的作用。方法:采用免疫组织化学法检测45例舌癌组织、30例癌旁组织和10例正常舌黏膜组织中Cks1、Skp2和p27kip1蛋白的表达情况;比较不同类型舌组织中各蛋白表达阳性率的差异;分析Cks1、Skp2和p27kip1蛋白表达与舌癌临床病理学参数的关系。结果:在舌癌组织中,Cks1和Skp2蛋白呈强表达,阳性表达率为73.3%和62.2%,在癌旁组织和正常舌黏膜组织中其阳性表达率依次降低,阳性表达率分别为23.3%、10.0%和36.7%、10.0%;在舌癌组织中,p27kip1蛋白表达明显减少或缺失,阳性表达率为24.4%,在癌旁组织中和正常舌黏膜组织中其阳性表达水平依次升高,阳性表达率分别为30.0%和70.0%;在舌癌组织中Cks1和Skp2蛋白阳性表达率高于正常舌黏膜组织和癌旁组织(P<0.05),而p27kip1蛋白阳性表达率低于正常舌黏膜组织和癌旁组织(P<0.05)。舌癌组织中Cks1、Skp2和p27kip1蛋白阳性表达率与舌癌患者的年龄和性别无关联(P>0.05);与癌组织淋巴结转移、TNM分期、分化程度和临床分期有关联(P<0.05)。结论:舌癌组织中Cks1和Skp2蛋白阳性表达率升高、p27kip1蛋白阳性表达率降低,Cks1、Skp2和p27kip1蛋白阳性表达率的检测有助于判断舌癌的恶性程度和预后。

粘膜白斑损害中HPV DNA的检测及细胞周期相关因子的表达

目的 探讨人乳头瘤病毒 (HPV)感染和细胞周期相关因子周期素E(cyclinE)及周期素依赖性蛋白激酶抑制蛋白p2 7在外生殖器粘膜白斑损害发病中的作用。方法 采用通用型引物PCR方法对 3 2例外生殖器粘膜白斑损害进行粘膜型HPVDNA的检测 ,并应用SP免疫组化方法检测病变中cyclinE和p2 7表达。结果 3 2例粘膜白斑损害中粘膜型HPVDNA全部阴性 ;粘膜白斑损害cyclinE表达阳性率及阳性强度均高于正常对照 ,且有统计学差异 (P <0 .0 5) ;而p2 7表达阳性率及阳性强度均低于正常对照 ,但无统计学差异 (P >0 .0 5) ,粘膜白斑损害中cyclinE和p2 7的表达有显著相关性。结论 外生殖器粘膜白斑损害的发生可能与HPV感染关系不大 ;细胞周期相关因子cyclinE和p2

细胞周期蛋白E及相关因子表达与肾癌发生、侵袭及转移的相关性研究

目的探讨肾癌细胞周期蛋白E(cyclinE)、周期依赖性激酶2(CDK2)和周期依赖性激酶抑制因子P27的表达状况及其意义。方法应用免疫组化SP法及RT-PCR检测37例肾癌组织、13例癌周正常肾组织中cyclinE、CDK2和P27蛋白及mRNA表达。并将上述指标与临床病理特征进行统计学分析。结果肾癌组织中cyclinE、CDK2阳性表达率分别为51.4%、43.2%,明显高于癌旁正常肾组织(P<0.05),并且随肿瘤分级及分期的升高、肿瘤转移而升高;两者mRNA含量变化同蛋白表达水平相符;相反,P27在肾癌和癌旁正常肾组织中表达量分别为48.6%、69.2%,二者差异显著(P<0.05),P27表达随肿瘤分级及分期升高、肿瘤的远位转移出现降低趋势。结论cyclinE、CDK2、P27参与了肿瘤形成及侵袭过程,是反映肾癌生物学特征有价值的标志物。

对肿瘤细胞中p27^(kip1)蛋白功能的再认识

p27kip1（以下简称p27）蛋白是一种调控细胞周期并抑制细胞分裂的重要因子,被认为是人类多种肿瘤独立的预后因子和未来可能的肿瘤治疗靶点。传统经典观点认为p27是细胞周期素依赖性激酶抑制因子（cyclindepen dent kinaseinh ibitor，CDKI），

抑癌蛋白p27在乳腺浸润性导管癌细胞质中的表达及临床意义

目的:探讨p27蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法:免疫组化检测251例乳腺浸润性导管癌中p27蛋白的表达。结果:细胞质p27蛋白表达与乳腺浸润性导管癌组织学类型和雌激素受体表达相关,细胞质高表达p27蛋白的患者预后较好。结论:乳腺浸润性导管癌细胞质p27的表达是患者的预后因素,临床检测其表达水平将对乳腺癌恶性程度、复发转移的可能性以及患者预后的评估均具有重要的参考价值。

FTP5通过抑制Cdk5活性调节胰岛β细胞的胰岛素分泌

目的探讨FTP5通过抑制周期素依赖性蛋白激酶(Cdk5)活性调节高糖环境下胰岛β细胞分泌胰岛素的作用。方法体外培养小鼠胰岛β细胞株(Min6细胞)。①体外抑制实验。将Cdk5活性抑制肽(CIP)和P5蛋白与Cdk5+p25激酶在试管混匀测定酶的活性,分为:p25+Cdk5组、p25+Cdk5+CIP组,p25+Cdk5+P5组。②细胞内试验。应用腺病毒表达空载体(EV),含有p5的重组腺病毒(p5)、和FITC-TAT合成的短肽(FTP5),分别转染细胞并给不同浓度的葡萄糖3 mmol(低糖,LG)和25 mmol(高糖,HG)刺激,分组为LG+EV组、HG+EV组、HG+FTP5组、HG+p5组。用免疫印迹和免疫荧光检测Cdk5和p35等蛋白表达,同位素标记测定Cdk5的活性,酶联免疫吸附试验测定胰岛素的分泌水平。结果 p5与CIP均可抑制Cdk5的活性,且前者的抑制作用更强;①高糖可以诱发p35表达增高,抑制胰岛素分泌;②FTP5和p5均抑制在高糖(25 mmoL)刺激下的Cdk5活性、恢复胰岛素的分泌,FTP5的作用更强(P<0.05)。结论 FTP5可以抑制Cdk5的过度活性,恢复胰岛素分泌,在2型糖尿病治疗中可能有潜在的广阔前景。

miR-K1-5p相关的G1/S期基因编码的蛋白在卡波西肉瘤中的表达

目的研究miR-K1-5p相关的G1/S期基因编码的蛋白在卡波西肉瘤中表达的意义。方法利用生物信息软件miRDB和TargetScan Custom筛选miR-K1-5p的靶基因。使用生物信息数据库确定靶基因参与的信号通路,分析通路上的关键基因。应用免疫组化法检测靶基因及关键基因(miR-K1-5p相关的G1/S期基因)编码的蛋白在卡波西肉瘤和作为对照的血管瘤中的表达,并分析患者性别、年龄与蛋白表达以及各蛋白表达之间的相关性。结果细胞周期素依赖蛋白激酶抑制剂4(CDKN4)是miR-K1-5p的靶基因,参与细胞周期信号通路,通路下游关键基因为细胞周期蛋白A(CCNA)、细胞周期蛋白D2(CCND2)、周期素依赖性激酶2(CDK2)、周期素依赖性激酶4(CDK4)。免疫组化检测各基因编码的蛋白,CDKN4在卡波西肉瘤中的阳性率低于血管瘤,CCNA、CCND2、CDK2、CDK4在卡波西肉瘤中的阳性率高于血管瘤(P均<0.05);在卡波西肉瘤中CDKN4、CCNA、CCND2、CDK2和CDK4的表达与性别、年龄均无关(P均>0.05);在卡波西肉瘤中CDKN4与CCNA、CCND2、CDK2和CDK4的表达均呈负相关,CCNA、CCND2、CDK2、CDK4各蛋白之间的表达互为正相关(P均<0.05)。结论miR-K1-5p相关的G1/S期基因编码的蛋白(CDKN4、CCNA、CCND2、CDK2、CDK4)的异常表达在卡波西肉瘤发生、发展中可能发挥重要作用。

p27kip1在胃癌中的表达和意义

目的 探讨 p2 7kip1 (细胞周期素依赖性激酶抑制因子 )在胃癌中表达及其与胃癌临床病理学特征的关系。方法 采用免疫组织化学方法检测 p2 7kip1在 60例胃癌组织原发灶和淋巴结转移灶中的表达。结果 p2 7kip1在胃癌的阳性表达率为 43 33% ( 2 6/60 ) ,阳性细胞定位于细胞浆 ,在高分化及Ⅰ ,Ⅱ期胃癌高表达 (P <0 0 5 ) ,且与淋巴结转移密切相关 (P <0 0 1 )。结论 p2 7kip1表达与胃癌组织分化程度、淋巴结转换呈负相关 ;p2 7kip1表达对估计胃癌预后有一定意义。

P21蛋白在不同级别宫颈组织中的表达及其与高危HPV感染相关性的研究

目的通过检测宫颈组织中p21waf基因表达与高危HPV感染的情况,研究P21蛋白与高危HPV感染在宫颈组织恶性转化过程中的作用及其相互关系。方法应用免疫组化检测P21蛋白及基因杂交捕获Ⅱ代技术(HC-Ⅱ)检测高危HPV在正常宫颈组、宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)及宫颈癌组这4组中的表达情况。结果在正常宫颈组、宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)、及宫颈癌组中P21的阳性表达率分别为11.8%、15.4%、39.1%和57.7%;高危HPV的阳性表达率分别为20%、23.5%、65.2%和88.5%,这两项指标在CIN、宫颈癌组有明显的升高趋势且与正常宫颈和宫颈炎两组相比差异具有显著性统计学意义(P<0.05);各级别宫颈组织中高危HPV阳性组的P21蛋白阳性率明显高于阴性组的P21蛋白阳性率。差异在统计学上具有显著性意义(P<0.05)。结论P21蛋白的表达和高危HPV感染与宫颈病变的恶化均有高度的相关性,其检出率和阳性表达率随着宫颈病变恶性程度的增加而升高。在CIN向宫颈癌恶性转化过程中,P21与高危HPV共同促进肿瘤的发生。

p16及p27基因与原发性肝癌的关系

细胞周期是指连续分裂的细胞从一次有丝分裂结束到完成下一次有丝分裂所经历的整个连续过程，主要经过G1、S、G2、M期4个阶段。最新研究表明，细胞周期素(eyclin)和细胞周期素依赖蛋白激酶(CKIs)是eyelin-CDKs复合物的抑制因子，主要起负性调控。CKIs基因家族按结构和功能的不同分两类：一类为Ink4(Inhibitor of CDK4)。包括P15、P16、P18和P19。

p27在肌萎缩脊髓侧索硬化症转基因鼠脊髓中的表达变化

目的：通过观察细胞周期蛋白激酶抑制因子p27在成年肌萎缩脊髓侧索硬化症（ALS）转基因鼠脊髓中的表达变化,探讨p27在ALS转基因鼠发病机制中的作用及其意义.方法：选取ALS转基因鼠和同窝野生型鼠,分别于95 d、108 d和122 d取材,分离脊髓,分别应用免疫荧光、免疫荧光双标记和免疫印迹,观察p27的分布和表达变化.结果：与同窝野生型鼠比较,p27蛋白在ALS转基因鼠发病早期（95 d）、中期（108 d）、晚期（122 d）均显著降低.免疫荧光实验结果显示,与同窝野生型鼠比较,ALS转基因鼠脊髓中p27阳性细胞数量减少,阳性细胞主要为p27/oligo-2双阳性细胞和p27/β-tubulinⅢ双阳性细胞,p27/GFAP双阳性细胞数量较少.结论：在ALS转基因鼠脊髓中p27阳性细胞数量减少,蛋白表达降低,表明p27与ALS的发病密切相关.

芪术抗癌方通过PCK1/Akt/p21信号轴调控肿瘤代谢重编程抑制肝细胞癌增殖的作用机制

目的:研究芪术抗癌方对二乙基亚硝胺(DEN)联合四氯化碳(CCl4)诱导肝癌模型小鼠肝脏及人肝癌Huh7细胞中糖异生酶磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1(PCK1)的调控作用,探讨其调节肝癌细胞代谢重编程并抑制细胞增殖的作用机制。方法:使用DEN联合CCl4腹腔注射构建肝癌小鼠模型,设置正常组、模型组、芪术抗癌方组,每天予以芪术抗癌方(3.51 g·kg^(-1))或等体积生理盐水灌胃,干预8周后收集血清及肝脏样本。检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-GT)和甲胎蛋白(AFP)评估各组小鼠肝功能变化;苏木素-伊红(HE)染色及天狼星红染色观察肝组织病理改变。细胞实验将Huh7细胞分为空白组、芪术抗癌方低、中、高剂量组和(或)PCK1抑制剂(盐酸SKF-34288)组、索拉非尼组,给予对应含药血清和药物处理。采用细胞增殖活性检测(CCK-8)法、集落形成实验、Edu荧光标记检测、细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量检测、细胞周期流式检测评估各组Huh7细胞增殖能力、能量代谢变化情况及对Huh7细胞周期的影响。蛋白免疫印迹法(Western blot)用于检测PCK1、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)的蛋白表达水平。结果:与模型组比较,芪术抗癌方组小鼠肝癌组织中细胞异型、坏死、胶原纤维沉积等病理改变有所减轻,肝脏肿瘤数量显著减少(P<0.01),血清ALT、AST、γ-GT和AFP水平显著降低(P<0.01)。细胞水平上,与空白组比较,芪术抗癌方含药血清低、中、高剂量组和索拉非尼组均可显著降低Huh7细胞存活率(P<0.01),显著减少Edu标记的阳性细胞数(P<0.01),显著抑制其克隆增殖能力(P<0.01);芪术抗癌方组还可降低细胞内ATP含量(P<0.05),增加细胞周期G0/G1期分布比例(P<0.05),且呈剂量依赖性。与模型组和空白组比较,芪术抗癌方组小鼠肝癌组织及Huh7细胞的PCK1、p21蛋白水平明显降低(P<0.05,P<0.01),p-Akt蛋白水平显著增加(P<0.01)。与空白组比较,盐酸SKF-34288组Huh7细胞ATP含量、细胞存活率明显升高(P<0.05),但Edu阳性细胞率、G0/G1期分布比例变化差异无统计学意义;与盐酸SKF-34288组比较,芪术抗癌方联合盐酸SKF-34288组可明显降低Huh7细胞的ATP含量、细胞存活率及Edu阳性细胞率(P<0.05),增加G0/G1期分布比例(P<0.05)。结论:芪术抗癌方可能通过激活PCK1诱导肝癌细胞代谢重编程促进Akt/p21介导的抑癌作用,从而发挥抗肝癌增殖的作用机制。

小干扰RNA沉默巨噬细胞移动抑制因子基因对肝癌细胞p27表达的影响

目的观察巨噬细胞移动抑制因子（MIF）和细胞周期调控因子p27在肝细胞癌中表达的相互关系，探讨小干扰RNA（siRNA）沉默MIF基因对肝癌细胞p27表达的影响。方法免疫组织化学法和荧光定量PCR法检测MIF、p27的蛋白和mRNA在肝癌及其癌旁组织中的表达情况。化学合成MIF siRNA和对照siRNA，脂质体法转染肝癌细胞PLC和Hep3B，荧光定量PCR法检测MIF和p27 mRNA在实验组及对照组中的表达情况。根据不同资料分别采用x。检验、Logistic回归分析或单因素方差分析。结果MIF蛋白及其mRNA在肝癌组织中过表达，在癌旁组织中低表达；p27蛋白及其mRNA在癌组织中低表达，在癌旁组织中高表达。Logistic回归分析提示MIF为肝癌发生的危险因素，p27为保护因素。MIF mRNA在肝癌细胞株中过表达（F=61．036，P〈0．01），p27 mRNA在正常肝细胞L02中高表达（F=529．853，P〈0．01）。经MIFsiRNA转染后，MIF mRNA在PLC及Hep3B中的表达水平降低，并且呈剂量依赖关系（F值分别为320．1和201．2，尸值均〈0．01）；p27 mRNA伴随MIFmRNA的降低而增加（F值分别为419．4和459．9，P值均〈0．01）。结论MIF在肝细胞癌中过表达，MIF siRNA能特异性抑制其在肝癌细胞中的表达；MIF可能参与了p27基因表达的调控。