周期素依赖性蛋白激酶-5在不同成年牛皮肤中的表达

采用不同毛色的牛皮作为研究对象,运用免疫组织化学法对周期素依赖性蛋白激酶-5(CDK-5)在成年牛皮肤中的表达进行定位和定性研究。结果表明,CDK-5在牛皮肤毛囊的外根鞘和毛球部呈阳性表达,说明CDK-5可能与牛毛色形成有关。

HSV-1感染后认知功能障碍小鼠海马组织细胞周期素依赖性蛋白激酶5mRNA的表达

目的探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)在单纯疱疹病毒-1型(HSV-1)感染后认知功能障碍小鼠海马组织中的表达变化及其作用。方法将雄性C57BL/6小鼠100只随机分为模型组、假手术组及正常组。采用颅内注射法建立单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)动物模型,感染后20 d进行水迷宫实验评价认知功能,应用RT-qPCR方法检测小鼠海马组织CDK5 mRNA的相对表达量。结果与正常组及假手术组比较,模型组小鼠学习、记忆能力受损明显,模型组小鼠海马组织CDK5的表达水平明显升高(P<0.05)。结论 CDK5有可能参与了HSV-1感染后小鼠认知功能障碍的发生。

卡配因I-细胞周期依赖性蛋白激酶5通路在血管性痴呆小鼠海马中的变化

目的观察脑缺血-再灌注导致的血管性痴呆小鼠不同时间点海马组织卡配因I(CalpainI)-细胞周期依赖性蛋白激酶5(Cdk5)通路表达的变化。方法雄性昆明小鼠160只,随机分为假手术组(n=65)和模型组(n=95)。采用双侧颈总动脉反复缺血-再灌注的方法制备血管性痴呆(VD)模型。术后第4周和第6周应用水迷宫实验进行行为学测试,免疫组化观察海马CA1区CalpainI的表达,RT-PCR观察Cdk5的mRNA表达,Western-blot检测Cdk5的蛋白表达。结果术后第4周和6周时模型组小鼠的学习、记忆成绩均明显劣于假手术组小鼠(P<0.05)。术后第4周模型组海马CA1区神经元CalpainI表达的平均光密度值(0.0900±0.0100)较假手术组(0.0332±0.0043)显著增高(P<0.05),Cdk5 mRNA表达(0.91±0.07)较假手术组(0.35±0.02)显著增高(P<0.05);术后第6周模型组海马CalpainI表达的平均光密度值(0.1040±0.0084)较假手术组(0.0327±0.0045)显著增高(P<0.05),Cdk5 mRNA表达较假手术组显著增高(0.80±0.07vs0.53±0.05,P<0.05)。结论Calpain I-Cdk5通路参与了脑缺血-再灌注后小鼠VD的发生。

周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)在大鼠脑发育过程中的表达及其分布

目的 研究周期素依赖性蛋白激酶 5 (CDK5 )的mRNA及蛋白在大鼠发育过程中脑内的表达及分布。方法 采用胚胎至老年期Wistar大鼠脑片行原位杂交组织化学和免疫细胞化学染色。 结果 1 原位杂交结果显示 ,脑内CDK5mRNA在大鼠E14～P35 0整个发育过程中均有表达 ,成年后趋于稳定 ;脑内CDK5mRNA主要定位于神经元 ,阳性区域主要分布于大脑皮层、海马、丘脑、下丘脑、小脑及部分神经核团。 2 免疫组织化学结果显示 ,出生后脑内CDK5蛋白表达较强 ,胚胎及老年鼠表达较弱 ;阳性区域集中在室周区、海马、小脑及部分神经核团内 ;老年鼠仅在海马、小脑蒲肯野细胞层内表达。 结论 以上结果进一步证明 ,脑内CDK5的作用贯穿了整个神经发育的各个时期 ;

周期素依赖性蛋白激酶5及其激动剂在神经系统发育中的作用

周期素依赖性蛋白激酶5（cyclin dependent kinase5，CDK5）是CDKs家族的成员之一，属于丝氨酸／苏氨酸激酶家族，具有与其他的CDKs成员同源的序列。CDK5最早是从Hela细胞中分离并克隆，并且发现是一种PSSALRE激酶与cdc2和CDK2的基因序列有57％的同源性，故又称为edc2相关的蛋白激酶。近年的研究表明CDK5并不像其他家族成员（CDKs）主要参与细胞周期的调控，

细胞周期依赖性蛋白激酶-5在C型尼曼-皮克病神经元变性中的作用

目的确定细胞周期依赖性蛋白激酶-5(cyclin dependent kinases-5,cdk5)在C型尼曼-皮克病(Niemann-Pickdisease type C,NPC)神经元变性过程中的作用,为NPC的临床治疗提供可能的药物作用靶点。方法将针对cdk5基因的si RNA序列克隆入rAAV-2载体,对4周龄npc-/-小鼠进行小脑rAAV-cdk5-si RNA-GFP注射(n=8),以空载体病毒(rAAV-GFP)注射组及非手术的同龄npc小鼠为对照(n=8)。在干预后4周连续观察小鼠脑内cdk5水平及小鼠神经生化和病理的改变。结果注射后1周可见针道附近、小脑深部核团及浦肯野细胞出现绿色荧光蛋白表达。与空载体病毒组相比,注射4周后小鼠脑内cdk5的表达水平降低34.17%(P<0.05,n=6);轴突球状体数量减少30.76%(P<0.05,n=6),存活浦肯野细胞数增加300%(P<0.05,n=8);细胞骨架蛋白磷酸化程度降低16.32%(P<0.05,n=6)。结论rAAV2-cdk5-si RNA小脑注射,能显著减轻npc小鼠神经生化和病理改变。cdk5的激活在NPC神经元变性过程中起到了关键性的作用,有可能成为NPC治疗的新靶标。

老年性学习记忆减退与大鼠脑发育过程中周期素依赖性蛋白激酶5的表达(英文)

背景:周期素依赖性蛋白激酶5是周期素依赖性蛋白激酶家族的成员之一,脑发育过程中周期素依赖性蛋白激酶5m RNA 及其蛋白在脑内的表达及分布状况与神经退行性变思维认知学的关系一直被研究者关注。目的:探讨大脑发育过程中的周期素依赖性蛋白激酶5对神经系统的发生和退行性变的影响。设计:单因素方差分析实验。单位:解放军第一军医大学组织学与胚胎学教研室和神经生物学教研室。材料:实验在解放军第三军医大学组织学与胚胎学实验室完成。W istar大鼠胚胎期(E8～E21)、新生期(P0～P15)、幼年期(P16～2个月)、成年期(>2个月)及老年期(>8个月后)5个阶段25只大鼠,每组5只。方法:采用胚胎期至老年期大鼠脑片行原位杂交组织化学和免疫细胞化学染色。主要观察指标:不同脑区内周期素依赖性蛋白激酶5m RNA 及其蛋白的阳性细胞分布及表达状况。结果:25只大鼠全部进入结果分析。①周期素依赖性蛋白激酶5mRNA 在大鼠E14～P350整个发育过程中均有表达,成年后趋于稳定;周期素依赖性蛋白激酶5mRNA 主要定位于神经元,阳性区域主要分布于大脑皮质、海马、丘脑、下丘脑、小脑及部分神经核团。②出生后周期素依赖性蛋白激酶5表达较强,胚胎及老年鼠表达较弱;阳性区域集中在室周区、海马、小脑及部分神经核团内;老年鼠仅在海马、小脑蒲肯野细胞层内表达。结论:脑内周期素依赖性蛋白激酶5的作用贯穿了整个神经发育的各个时期,在新生期、幼年期有较为显著的表达,成年后表达下降,尤以老年期显著。老年大鼠海马内周期素依赖性蛋白激酶5的表达下调可能与老年性学习记忆减退的发生密切相关。

糖尿病大鼠脑细胞周期依赖性蛋白激酶5和蛋白激酶A参与调节Tau蛋白磷酸化

细胞周期依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase5,Cdk-5)及蛋白激酶A(protein kinaseA,PKA)是调节Tau蛋白磷酸化的重要激酶,其对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠脑内Tau蛋白磷酸化的作用如何,目前尚不明确.为探讨胰岛素缺乏的DM大鼠海马Cdk-5及PKA对Tau蛋白磷酸化的作用,用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立DM大鼠模型,Fura-2负载及荧光测定细胞内游离Ca2+浓度,免疫沉淀法测定Cdk-5活性,放射性配体结合实验检测PKA的活性,蛋白质印迹检测Tau蛋白磷酸化的水平.结果提示:在DM大鼠海马神经元,Ca2+浓度升高,Cdk-5及PKA活性升高,Tau蛋白在Ser198/Ser199/Ser202和Ser396/Ser404位点的磷酸化增强.Cdk-5的特异性抑制剂roscovitine可降低DM大鼠Cdk-5活性,但不能降低PKA活性,使Tau蛋白在Ser198/Ser199/Ser202位点磷酸化水平降低,但不降低Ser396/Ser404位点的磷酸化,roscovitine处理正常大鼠后,上述酶的活性及Tau蛋白的磷酸化无明显变化.首次从整体水平上证实DM大鼠海马Cdk-5及PKA活性升高,协同促进Tau蛋白在Ser198/Ser199/Ser202位点和Ser396/Ser404位点的磷酸化,神经元内游离Ca2+浓度升高可能起重要作用.

抑制细胞周期依赖性蛋白激酶-5表达对C型尼曼-皮克病小鼠的神经保护作用

目的:观察抑制细胞周期依赖性蛋白激酶-5(cdk5)的表达对C型尼曼-皮克病(NPC)小鼠(npc-/-)的治疗作用。方法:采用携带cdk5特异性小干扰RNA(cdk5-siRNA)的重组腺相关病毒rAAV-cdk5-siRNA-GFP,对出生三天内的npc-/-小鼠进行双侧侧脑室注射,以rAAV-GFP注射组及非手术的同龄npc小鼠为对照(n=6～10/组);采用免疫组织化学染色、HE染色和小鼠衣架悬挂试验来评价小鼠脑内的神经病理改变和运动功能。结果:rAAV2-cdk5-siR-NA-GFP能显著减少轴突球状体的数量,延缓浦肯野细胞的死亡并改善npc-/-小鼠的运动功能。结论:降低cdk5的活性对npc-/-小鼠的神经元有一定的保护作用。

腹部推拿按摩对CFS大鼠HPA轴功能及海马区5-HT1AR-CaMKⅡ通路的影响

目的 观察腹部推拿按摩对慢性疲劳综合征(CFS)大鼠下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能及海马区5-HT1AR-CaMKⅡ通路的影响,为完善其作用机制提供数据支撑。方法 将60只SD大鼠随机分为3组,每组20只。对照组正常饲养,模型组和干预组采用睡眠剥夺和力竭游泳法制备CFS模型。制备成功后,干预组予以腹部按摩,干预6周。结果 T_(0)时,模型组和干预组矿场格子计数、悬挂不动时间、力竭游泳时间比较,差异无统计学意义(P<0.05);各组大鼠的血浆ACTH、CORT、CRH水平比较,无显著差异(P>0.05)。T_(1)时,模型组与干预组矿场格子计数和力竭游泳时间少(短)于对照组,悬挂不动时间长于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组与干预组ACTH、CORT、CRH水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。T_(2)时,干预组矿场格子计数和力竭游泳时间多(长)于模型组,干预组ACTH和CORT水平均高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 腹部推拿按摩能够改善CFS大鼠病理进程中HPA轴功能耗损,对海马区5-HT1AR-CaMKⅡ通路也有调节,可能是其发挥抗CFS作用的重要机制。

miR-K1-5p相关的G1/S期基因编码的蛋白在卡波西肉瘤中的表达

目的研究miR-K1-5p相关的G1/S期基因编码的蛋白在卡波西肉瘤中表达的意义。方法利用生物信息软件miRDB和TargetScan Custom筛选miR-K1-5p的靶基因。使用生物信息数据库确定靶基因参与的信号通路,分析通路上的关键基因。应用免疫组化法检测靶基因及关键基因(miR-K1-5p相关的G1/S期基因)编码的蛋白在卡波西肉瘤和作为对照的血管瘤中的表达,并分析患者性别、年龄与蛋白表达以及各蛋白表达之间的相关性。结果细胞周期素依赖蛋白激酶抑制剂4(CDKN4)是miR-K1-5p的靶基因,参与细胞周期信号通路,通路下游关键基因为细胞周期蛋白A(CCNA)、细胞周期蛋白D2(CCND2)、周期素依赖性激酶2(CDK2)、周期素依赖性激酶4(CDK4)。免疫组化检测各基因编码的蛋白,CDKN4在卡波西肉瘤中的阳性率低于血管瘤,CCNA、CCND2、CDK2、CDK4在卡波西肉瘤中的阳性率高于血管瘤(P均<0.05);在卡波西肉瘤中CDKN4、CCNA、CCND2、CDK2和CDK4的表达与性别、年龄均无关(P均>0.05);在卡波西肉瘤中CDKN4与CCNA、CCND2、CDK2和CDK4的表达均呈负相关,CCNA、CCND2、CDK2、CDK4各蛋白之间的表达互为正相关(P均<0.05)。结论miR-K1-5p相关的G1/S期基因编码的蛋白(CDKN4、CCNA、CCND2、CDK2、CDK4)的异常表达在卡波西肉瘤发生、发展中可能发挥重要作用。

6-羟基-1-氢-吲唑保护MPP^+诱导凋亡的SH-SY5Y细胞的机制

目的研究6-羟基-1-氢-吲唑对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导凋亡的SH-SY5Y细胞的保护作用机制。方法体外培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,以200μmol/L MPP+诱导SH-SY5Y细胞凋亡建立体外帕金森病细胞模型。Western blot法分别检测200μmol/L MPP+和200μmol/L MPP+联合0.1μmol/L 6-羟基-1-氢-吲唑作用后SHSY5Y细胞内糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)以及凋亡蛋白酶3(caspase-3)的活性。结果200μmol/L MPP+作用SH-SY5Y细胞8 h,GSK-3β、CDK5与caspase-3活性升高。200μmol/L MPP+联合0.1μmol/L 6-羟基-1-氢-吲唑作用SH-SY5Y细胞8 h,GSK-3β、CDK5与caspase-3的活性降低。结论 6-羟基-1-氢-吲唑对MPP+诱导凋亡的SH-SY5Y细胞的保护机制可能是抑制GSK-3β、CDK5和caspase-3的活性。

大鼠全脑缺血再灌注损伤时海马细胞SOD、MDA及Cdk-5的变化

目的:探讨急性全脑缺血再灌注损伤时大鼠海马超氧化物歧化酶(superoxidismutase,SOD),丙二醛(Malondialdehyde,MDA),细胞周期依赖性蛋白激酶-5(cyclin-dependent kinase 5,Cdk-5)的关系变化。方法:用三管结扎法建立急性全脑缺血再灌注大鼠模型,用免疫沉淀法测定Cdk-5的酶活性,用比色法测定SOD的活性及MDA的含量。结果:与对照组比较,在缺血和/或再灌注大鼠海马神经元内SOD活性降低(P<0.01),MDA含量明显升高(P<0.01),且伴有细胞内Cdk-5活性升高(P<0.05,P<0.01)。结论:本研究从整体水平上证实急性全脑缺血-再灌注时大鼠海马神经元Cdk-5活性升高,与氧化应激反应密切相关。

hTERT对干预后人胚胎神经元cdk5 P-CREB表达影响的初步观察

目的对干预后人胚胎神经元周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase 5,cdk5)、cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,P-CREB)表达影响。方法人胚胎大脑皮质神经元原代培养后,用hTERT重组腺病毒转染神经元,用Aβ25-35干预转染后神经元。实验分为转染组和非转染组。Western-blot检测cdk5、p-CREB的变化。结果 Aβ25-35干预后,神经元内cdk5表达量明显增加,而hTERT基因转染组cdk5增加的低于非转染组。干预后神经元内p-CREB表达量明显降低,而hTERT基因转染组,p-CREB表达量高于非转染组。结论 Aβ25-35干预人胚胎大脑皮质神经元,可以导致cdk5的异常活化,p-CREB的降低;hTERT基因转染可有效抑制cdk5的异常激活,防止p-CREB的降低。

miR-145-3p通过下调CDK1抑制骨肉瘤MG-63细胞系的增殖、侵袭与凋亡

目的研究mircoRNA-145-3p(miR-145-3p)对骨肉瘤细胞系MG-63细胞的增殖、侵袭与凋亡的调控作用。方法通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定miR145-3p在MG-63细胞与人成骨细胞系hFOB1.19细胞中的表达水平。将MG-63分成实验组和对照组,通过人工合成miR145-3p-mimic(miR-145-3p类似物),使用慢病毒载体将miR-145-3p-mimics转入实验组MG-63细胞内,同时使用慢病毒载体将空质粒转入对照组细胞内。通过CCK-8方法检测两组细胞增殖能力;流式细胞仪分析两组细胞的细胞周期及凋亡情况; Transwell实验测定细胞侵袭能力; RT-PCR测定两组细胞miR-145-3p和周期素依赖性蛋白激酶1(CDK1)的表达情况;通过Targetscan数据库和荧光素酶实验确定CDK1是否为miR-145-3p的靶基因; Western印迹法检测基因的表达水平。结果 miR-145-3p在骨肉瘤细胞系MG-63细胞中的表达量为(0. 59±0. 24),较人成骨细胞系hFOB1. 19细胞中的表达量(1. 46±0. 21)明显降低,差异具有统计学意义(P <0. 05)。CCK-8结果显示,在48 h、72 h、96 h、120 h时,实验组细胞增殖能力较对照组明显降低,差异具有统计学意义(P <0. 05)。流式细胞周期结果显示,处于G1期细胞数量为(69. 92±0. 13)%,较对照组(49. 43±0. 09)%明显增多(P <0. 05),而处于S期细胞数量(26. 01±0. 08)%,较对照组(40. 67±0. 11)%明显减少,差异具有统计学意义(P <0. 05)。凋亡实验结果显示,实验组细胞的凋亡比率为(31. 3±4. 7)%,较对照组(9. 35±1. 9)%明显增高,差异具有统计学意义(P <0. 05)。转染野生型CDK1后,实验组荧光素酶活性较对照组明显降低,差异有统计学意义(P <0. 05);而转染突变型CDK1后,实验组荧光素酶活性较对照组无明显变化,差异无统计学意义(P> 0. 05)。Western印迹实验结果显示,实验组中CDK1的表达量较对照组明显降低,且表达水平较对照组也明显降低(P <0. 05)。结论 miR-145-3p通过下调节CDK1表达,抑制骨肉瘤细胞系MG-63细胞的增殖、侵袭能力,并促进其凋亡。

miR-138-5p通过PDK1对人肺癌细胞系H23生物学行为的影响

目的探讨微小RNA-138-5p(miR-138-5p)通过3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)对人肺腺癌细胞系H23生物学行为的影响。方法以肺腺癌细胞系H23作为研究对象,分别转染miR-NC(对照组)或miR-138-5p(实验组);qRT-PCR与Western blot法检测miR-138-5p、PDK1 mRNA在转染后人肺腺癌细胞系H23中表达水平;双荧光素酶报告基因检测miR-138-5p及基因PDK1之间的靶向关系;MTT法、划痕实验、Transwell实验检测增殖、迁移与侵袭能力。结果qRT-PCR检测H23细胞转染后miR-138-5p mRNA表达水平升高,PDK1 mRNA与蛋白表达下调,荧光素酶报告基因实验提示miR-138-5p可与PDK1的3’-UTR直接结合,与PDK1存在靶向关系。miR-138-5p可抑制H23细胞增殖、迁移和侵袭能力。结论miR-138-5p可通过靶向干扰PDK1抑制人肺腺癌细胞系H23细胞的增殖、迁移与侵袭能力,提示miR-138-5p与PDK1可能是治疗肺癌的潜在靶点。

Cdk5在肾小球足细胞中的表达及作用

目的研究周期素依赖性蛋白激酶-5(Cdk5)及其激活剂p35在肾小球足细胞中的表达及作用。方法分别培养原代小鼠神经细胞、原代小鼠分化成熟的离体足细胞(简称足细胞)以及人胚肾细胞(HEK293细胞),应用免疫印迹、免疫沉淀及同位素标记等方法检测Cdk5、p35的表达及Cdk5的活性;以原代小鼠分化成熟的离体足细胞为研究对象,分为正常组、ROS组(Cdk5活性抑制组)、Cdk5 siRNA组(Cdk5表达沉默组),观察Cdk5的表达及活性,并应用Cdk5 siRNA、Cdk5化学抑制剂-Roscovitine进行抑制实验。结果离体培养原代小鼠分化成熟的足细胞中均有Cdk5及p35蛋白的表达;Cdk5在足细胞中具有活性;沉默Cdk5表达、应用Cdk5活性抑制剂Roscovitine抑制Cdk5活性后,可引起足细胞特异性标志物WT1的表达减少,说明足细胞受到损伤,数量减少。结论 Cdk5的表达及活性在维持正常足细胞功能中起重要作用。

小鼠脑发育中CDK5 mRNA表达变化的研究

目的 观察周期素依赖性蛋白激酶 5 (CDK5 )mRNA在脑发育中的表达与分布。方法 采用胚胎期至老年期小鼠全胚胎及脑切片的原位杂交染色。结果 ①全胚胎原位杂交染色发现脑内CDK5mRNA从胚胎 10 5d(E10 .5 )开始表达 ,主要分布于神经上皮的套层细胞内 ;②脑切片的原位杂交染色观察到从E14到成年期脑内均见CDK5mRNA阳性信号 ,主要定位于神经元的胞浆与核周 ,于新生期前后表达达高峰 ;分布于包括大脑皮层、海马、丘脑、下丘脑、小脑及许多神经核团。在老年期上述区域CDK5表达均有减弱 ,部分区域呈阴性。结论 表明脑内CDK5作用贯穿了整个脑的发育阶段 ,且主要参与了神经系统的早期发育 ;成年后CDK5可能继续保持对某些区域中神经元的功能调节。

Cdk5与大鼠脑缺血再灌注损伤时细胞凋亡的关系

目的利用大鼠可逆性大脑中动脉栓塞模型(MCAO),研究周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin dependent kinase 5,Cdk5)对视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)的磷酸化作用与细胞凋亡的关系。方法线栓法制作大鼠MCAO模型,随机分为再灌注0、3、6、9、24h组。通过免疫组化染色观察缺血侧大脑Cdk5和磷酸化Rb的数量和变化,TUNEL标记法检测凋亡神经元数量和变化,Westernblot检测不同再灌注时间Cdk5蛋白水平的表达。结果缺血侧Cdk5随再灌注时间增加而增加,24h达到高峰;再灌注6h出现磷酸化的视网膜母细胞瘤蛋白(pRb),并随再灌注时间增加而增加,24h达到高峰。缺血侧凋亡阳性细胞变化趋势与Cdk5基本一致。缺血侧Cdk5蛋白的表达随再灌注时间增加而增加,缺血对侧无明显变化。结论大鼠局限性脑缺血再灌注损伤可以诱导Cdk5数量和激酶活性增加,通过底物磷酸化作用引起神经细胞凋亡。