周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)在大鼠脑发育过程中的表达及其分布

目的 研究周期素依赖性蛋白激酶 5 (CDK5 )的mRNA及蛋白在大鼠发育过程中脑内的表达及分布。方法 采用胚胎至老年期Wistar大鼠脑片行原位杂交组织化学和免疫细胞化学染色。 结果 1 原位杂交结果显示 ,脑内CDK5mRNA在大鼠E14～P35 0整个发育过程中均有表达 ,成年后趋于稳定 ;脑内CDK5mRNA主要定位于神经元 ,阳性区域主要分布于大脑皮层、海马、丘脑、下丘脑、小脑及部分神经核团。 2 免疫组织化学结果显示 ,出生后脑内CDK5蛋白表达较强 ,胚胎及老年鼠表达较弱 ;阳性区域集中在室周区、海马、小脑及部分神经核团内 ;老年鼠仅在海马、小脑蒲肯野细胞层内表达。 结论 以上结果进一步证明 ,脑内CDK5的作用贯穿了整个神经发育的各个时期 ;

小分子细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制剂flavopiridol联合泰素治疗卵巢癌的实验研究

目的:检测flavopiridol联合泰素对人卵巢癌细胞系SKOV3、裸鼠人卵巢癌皮下及腹腔移植瘤模型的治疗作用。方法:应用CCK-8法、流式细胞术和原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测flavopiridol和泰素作用后卵巢癌细胞系SKOV3的细胞存活率和凋亡率;应用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测作用前后细胞中cyclinD1的表达:应用ELISA法检测细胞中活性caspase-3的表达。建立裸鼠人卵巢癌皮下及腹腔移植瘤模型,观测flavopiridol和泰素治疗前后裸鼠肿瘤体积的变化并计算抑瘤率,用TUNEL和免疫组化法分别检测作用前后肿瘤组织中的凋亡情况和微血管密度(MVD)值。结果:flavopiri-dol(300nmol/L)或泰素(1μmol/L)单独应用24h均能显著降低细胞存活率,增强caspase-3活性,诱导细胞凋亡,并下调细胞中cyclinD1的表达。Taxol先作用24h再用flavopiridol作用24h的联合用药对二者的上述作用产生显著的协同效应:联合用药后细胞存活率为(5.2±0.8)%,凋亡率为(51.10±2.52)%,caspase-3活性相对值为0.602±0.008,cy-clinD1相对表达水平为0.264±0.076。Flavopiridol和泰素单独应用均能显著抑制皮下移植瘤生长(抑瘤率分别为84.5%和85.7%),并降低肿瘤组织MVD值(分别为12.4±4.7vs 35.2±10.3和15.2±2.9 vs 35.2±10.3)。二者联合应用抑瘤作用稍差(抑瘤率68.9%),抑制MVD作用(23.0±5.1 vs 35.2±10.3)也不及单药治疗。结论:Flavopiridol和泰素均能通过致凋亡作用显著抑制卵巢癌细胞及移植瘤生长,二者联合应用对体外培养的卵巢癌细胞具有协同杀伤作用,但体内治疗中无协同抑瘤作用。

周期素依赖性蛋白激酶5及其激动剂在神经系统发育中的作用

周期素依赖性蛋白激酶5（cyclin dependent kinase5，CDK5）是CDKs家族的成员之一，属于丝氨酸／苏氨酸激酶家族，具有与其他的CDKs成员同源的序列。CDK5最早是从Hela细胞中分离并克隆，并且发现是一种PSSALRE激酶与cdc2和CDK2的基因序列有57％的同源性，故又称为edc2相关的蛋白激酶。近年的研究表明CDK5并不像其他家族成员（CDKs）主要参与细胞周期的调控，

老年性学习记忆减退与大鼠脑发育过程中周期素依赖性蛋白激酶5的表达(英文)

背景:周期素依赖性蛋白激酶5是周期素依赖性蛋白激酶家族的成员之一,脑发育过程中周期素依赖性蛋白激酶5m RNA 及其蛋白在脑内的表达及分布状况与神经退行性变思维认知学的关系一直被研究者关注。目的:探讨大脑发育过程中的周期素依赖性蛋白激酶5对神经系统的发生和退行性变的影响。设计:单因素方差分析实验。单位:解放军第一军医大学组织学与胚胎学教研室和神经生物学教研室。材料:实验在解放军第三军医大学组织学与胚胎学实验室完成。W istar大鼠胚胎期(E8～E21)、新生期(P0～P15)、幼年期(P16～2个月)、成年期(>2个月)及老年期(>8个月后)5个阶段25只大鼠,每组5只。方法:采用胚胎期至老年期大鼠脑片行原位杂交组织化学和免疫细胞化学染色。主要观察指标:不同脑区内周期素依赖性蛋白激酶5m RNA 及其蛋白的阳性细胞分布及表达状况。结果:25只大鼠全部进入结果分析。①周期素依赖性蛋白激酶5mRNA 在大鼠E14～P350整个发育过程中均有表达,成年后趋于稳定;周期素依赖性蛋白激酶5mRNA 主要定位于神经元,阳性区域主要分布于大脑皮质、海马、丘脑、下丘脑、小脑及部分神经核团。②出生后周期素依赖性蛋白激酶5表达较强,胚胎及老年鼠表达较弱;阳性区域集中在室周区、海马、小脑及部分神经核团内;老年鼠仅在海马、小脑蒲肯野细胞层内表达。结论:脑内周期素依赖性蛋白激酶5的作用贯穿了整个神经发育的各个时期,在新生期、幼年期有较为显著的表达,成年后表达下降,尤以老年期显著。老年大鼠海马内周期素依赖性蛋白激酶5的表达下调可能与老年性学习记忆减退的发生密切相关。

周期素依赖性蛋白激酶抑制物1A相互作用锌指蛋白1在结肠癌中的表达及临床意义

目的:探讨周期素依赖性蛋白激酶抑制物1A相互作用锌指蛋白1(Ciz1)在结肠癌中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学染色方法观察Ciz1蛋白在80例结肠癌和正常结肠组织中的表达。结果:癌组织中Ciz1蛋白的阳性表达率显著高于正常结肠组织(62.5%vs42.5%,P=0.007),Ciz1蛋白过表达与结肠癌T分期(P=0.027)、淋巴结转移(P=0.033)、M分期(P=0.027)以及AJCC分期(P=0.022)显著相关。结论:Ciz1蛋白过表达可能在结肠癌发生发展过程中发挥重要作用。

周期素依赖性蛋白激酶-5在不同成年牛皮肤中的表达

采用不同毛色的牛皮作为研究对象,运用免疫组织化学法对周期素依赖性蛋白激酶-5(CDK-5)在成年牛皮肤中的表达进行定位和定性研究。结果表明,CDK-5在牛皮肤毛囊的外根鞘和毛球部呈阳性表达,说明CDK-5可能与牛毛色形成有关。

替米沙坦在细胞周期依赖性蛋白激酶5介导的过氧化物酶体增殖物激活受体γ磷酸化调节脂联素表达中的作用

目的研究替米沙坦在细胞周期依赖性蛋白激酶（CDK）5介导的过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ磷酸化水平上升、调节3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的机制。方法诱导至转化率达到80%的3T3-L1脂肪细胞以不同浓度肿瘤坏死因子（TNF）-α（10、50、100 ng/ml，分别为T10、T50、T100组）刺激1h，T100组以替米沙坦不同剂量（0.1、5、10 μmol/L，分别为Tel0.1、Tel5、Tel10组）干预24 h后利用Western blotting法检测CDK5、p35蛋白表达水平和PPARγ磷酸化水平；实时荧光定量聚合酶链反应检测CDK5、p35、PPARγ mRNA表达变化；酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测培养基上清脂联素释放变化。构建并包装携带p35基因的逆转录病毒感染3T3-L1细胞，以空载体病毒为对照，同时设置CDK5抑制剂组，检测CDK5、p35/p25、磷酸化PPARγ（pPPARγ）及脂联素表达。实验数据以±s表示，多组间比较采用单因素方差分析。结果与未处理组相比，T10、T50、T100组CDK5 mRNA及蛋白相对表达量差异无统计学意义（均P〉0.05）；T50、T100组p35 mRNA（2.11±0.66、2.71±0.59比1.22±0.35；q=3.77、4.91）及蛋白（0.32±0.02、0.45±0.04比0.09±0.01；q=2.19、4.55）相对表达量显著上升（均P〈0.05）；各组PPARγ mRNA及蛋白相对表达量差异均无统计学意义（均P〉0.05），T50、T100组pPPARγ/PPARγ显著上升（0.21±0.03、0.47±0.04比0.11±0.02；q=3.89、6.91），脂联素释放显著下降（1.56±0.34、1.07±0.12比2.36±0.55；q=6.32、6.99，均P〈0.05）；替米沙坦干预后，与T100组相比，各组CDK5、p35 mRNA及蛋白相对表达量差异均无统计学意义（均P〉0.05）；Tel5、Tel10组pPPARγ/PPARγ显著降低（0.11±0.03、0.05±0.01比0.38±0.02；q=4.91、5.22），脂联素释放显著上升（1.71±0.26、1.92±0.17比1.11±0.05；q=5.77、6.43，均P〈0.05）；过表达p35可检出p25表达，同时显著上调pPPARγ/PPARγ（0.87±0.12比0.07±0.02，q=9.13）并下调脂联素释放（1.39±0.12比2.21±0.33，q=5.67），抑制剂组pPPARγ/PPARγ下降（0.15±0.01比0.87±0.12，q=3.14），脂联素释放上升（1.95±0.24比1.39±0.12，q=4.99），差异均具有统计学意义（均P〈0.05）。结论替米沙坦能够抑制CDK5过度激活导致的PPARγ磷酸化，调节3T3-L1脂肪细胞脂联素表达。

外阴上皮内非瘤样病变女性患者细胞周期蛋白D1、周期素依赖性蛋白激酶4和周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27的表达及意义

目的探讨外阴上皮内非瘤样病变(NNEDV)女性患者细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)、周期素依赖性蛋白激酶4(CDK4)和周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27 (P27)的表达及意义,为临床诊治提供参考依据。方法采用免疫组织化学(SP)法研究NNEDV患者皮损中Cyclin D1,CDK4及P27蛋白的表达。结果①NNEDV组织的3组病理类型[外阴鳞状上皮增生(SH)组、外阴硬化性苔癣(LS)组、SH合并LS组]中Cyclin D1、CDK4蛋白阳性表达率明显高于正常组,差异有统计学意义(均P<0. 05),P27蛋白阳性表达率低于正常组,但差异无统计学意义(均P>0. 05);而病变的3组病理类型之间Cyclin D1、CDK4及P27蛋白阳性表达率差异无统计学意义(均P>0. 05)。②Cyclin D1和CDK4在NNEDV组中棘细胞层/基底细胞层阳性表达率的比值高于正常组,差异有统计学意义(均P<0. 01); P27的棘细胞层/基底细胞层阳性表达率比值在两组中差异无统计学意义(P>0. 05)。结论①Cyclin D1及CDK4蛋白的高表达可能是NNEDV发病的原因之一。②NNEDV的3种病理类型可能具有共同的或相似的发病机制。③NNEDV组织各层上皮细胞增殖不平衡说明NNEDV存在恶变的可能性。④本研究认为在NNEDV的随访中P27蛋白作为随访病变恶变的指标比Cyclin D1及CDK4的意义更大。

聚焦超声治疗外阴上皮内非瘤变后对细胞周期素D 1和周期素依赖性蛋白激酶4表达的影响

目的探讨聚焦超声治疗外阴上皮内非瘤变(nonneoplastic epithelial disorders of vulva,NNEDV)后细胞周期素D 1(Cyclin D 1)和周期素依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK 4)的表达及意义。方法回顾性分析2015年8月至2016年7月西南医科大学附属医院妇产科收治的20例NNEDV患者的皮损标本,设为病例组,经聚焦超声治疗后5~12月(平均8月)在原活检部位再次取材;选取因各种外阴疾病就诊局部活检后经病理证实为正常组织者10例为正常组。采用免疫组织化学法研究NNEDV患者聚焦超声治疗前后皮损中Cyclin D 1和CDK 4蛋白的表达。结果 NNEDV组织中Cyclin D 1和CDK 4蛋白阳性表达组织学评分治疗前高于治疗后及正常组(P<0.05),治疗后与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前NNEDV患者Cyclin D 1和CDK 4在上皮组织棘细胞层/基底细胞层阳性表达组织学评分比值均高于治疗后及正常组(P<0.05),治疗后与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论聚焦超声可以有效阻断NNEDV组织中Cyclin D 1、CDK 4的高表达而达到治疗目的,治疗后Cyclin D 1和CDK 4阳性细胞在NNEDV的上皮组织各层中的分布趋于正常。

细胞周期素依赖激酶抑制剂的研究现状与前景

细胞周期是一个细胞经过生长、分裂而增殖成两个细胞的过程，它是生命起源过程中最基本的、也是最重要的过程。细胞周期的基本调节机制在进化过程中是保守的，从酵母到人，其细胞周期的进行都由细胞周期素蛋白依赖激酶（cyclin-dependent kinases，CDKs）基因控制。细胞周期的准确调控对细胞的增殖、分化和凋亡十分重要。当细胞周期调节出现异常时，在人类会导致各种疾病的发生如肿瘤、神经退行性疾病、心血管病和病毒感染等。

电化学治疗对宫颈癌细胞系细胞周期及CDK、cyclin表达的影响

目的:探讨不同电化学治疗剂量对肿瘤细胞生长周期的影响、细胞周期变化特点及对宫颈癌细胞系CDK和cyclin表达的影响。方法:用体外实验方法,用不同电化学剂量处理宫颈癌细胞系后分别用流式细胞仪和RT-PCR测定细胞周期分布及细胞CDK和cyclin mRNA的表达。结果:(1)不同电化学治疗剂量组合作用后S期细胞所占比例均低于空白组,差异有统计学意义(P<0.01),但G1细胞所占比例均高于空白组,差异有统计学意义(P<0.01)。G2期细胞所占比例与空白对照的差异无统计学意义(P>0.05);(2)(5V,10C)、(10V,10C)处理组cyclin D1表达阴性;(5V,5C)、(10V,5C)处理组cyclinD1表达阳性。各电化学剂量处理组CDK4、CDK1、cyclin B1表达均阳性;(3)不同电化学治疗剂量组合作用后各基因表达与G2期比例无明显相关,但cyclinD1基因表达与G1期呈负相关,与S期呈正相关。CDK1基因表达与G1期呈正相关,与S期呈负相关。结论:电化学治疗能通过调节肿瘤细胞CDK和cyclin基因的表达影响其细胞周期各时相的分布。

舌鳞状细胞癌组织中Cks1、Skp2和p27^(kip1)蛋白的表达及其临床意义

目的:检测舌鳞状细胞癌(舌癌)组织中Cks1、Skp2和p27kip1蛋白的表达,分析其与患者临床病理特征的关系,探讨其在舌癌的发生发展及预后中的作用。方法:采用免疫组织化学法检测45例舌癌组织、30例癌旁组织和10例正常舌黏膜组织中Cks1、Skp2和p27kip1蛋白的表达情况;比较不同类型舌组织中各蛋白表达阳性率的差异;分析Cks1、Skp2和p27kip1蛋白表达与舌癌临床病理学参数的关系。结果:在舌癌组织中,Cks1和Skp2蛋白呈强表达,阳性表达率为73.3%和62.2%,在癌旁组织和正常舌黏膜组织中其阳性表达率依次降低,阳性表达率分别为23.3%、10.0%和36.7%、10.0%;在舌癌组织中,p27kip1蛋白表达明显减少或缺失,阳性表达率为24.4%,在癌旁组织中和正常舌黏膜组织中其阳性表达水平依次升高,阳性表达率分别为30.0%和70.0%;在舌癌组织中Cks1和Skp2蛋白阳性表达率高于正常舌黏膜组织和癌旁组织(P<0.05),而p27kip1蛋白阳性表达率低于正常舌黏膜组织和癌旁组织(P<0.05)。舌癌组织中Cks1、Skp2和p27kip1蛋白阳性表达率与舌癌患者的年龄和性别无关联(P>0.05);与癌组织淋巴结转移、TNM分期、分化程度和临床分期有关联(P<0.05)。结论:舌癌组织中Cks1和Skp2蛋白阳性表达率升高、p27kip1蛋白阳性表达率降低,Cks1、Skp2和p27kip1蛋白阳性表达率的检测有助于判断舌癌的恶性程度和预后。

粘膜白斑损害中HPV DNA的检测及细胞周期相关因子的表达

目的 探讨人乳头瘤病毒 (HPV)感染和细胞周期相关因子周期素E(cyclinE)及周期素依赖性蛋白激酶抑制蛋白p2 7在外生殖器粘膜白斑损害发病中的作用。方法 采用通用型引物PCR方法对 3 2例外生殖器粘膜白斑损害进行粘膜型HPVDNA的检测 ,并应用SP免疫组化方法检测病变中cyclinE和p2 7表达。结果 3 2例粘膜白斑损害中粘膜型HPVDNA全部阴性 ;粘膜白斑损害cyclinE表达阳性率及阳性强度均高于正常对照 ,且有统计学差异 (P <0 .0 5) ;而p2 7表达阳性率及阳性强度均低于正常对照 ,但无统计学差异 (P >0 .0 5) ,粘膜白斑损害中cyclinE和p2 7的表达有显著相关性。结论 外生殖器粘膜白斑损害的发生可能与HPV感染关系不大 ;细胞周期相关因子cyclinE和p2

细胞周期中关键的调控分子——2001年诺贝尔生理学或医学奖简介

今年的诺贝尔生理学或医学奖授予了三位研究细胞周期的科学家 ,他们的突出贡献是发现了所有真核有机体中细胞周期的关键调控分子 .众所周知 ,所有有机体都是由通过分裂而增殖的细胞而组成的 ,而细胞周期中不同的时相又必须通过相互协调来完成 .三位科学家经过研究认为周期素依赖性蛋白激酶 (cyclindependentkinase,CDK)和细胞周期素 (cyclin)一起驱动细胞从循环的一个时相向另一个时相转换 .本文概述了细胞周期的基本概念及技术与三位杰出科学家的贡献 .

小鼠脑发育中CDK5 mRNA表达变化的研究

目的 观察周期素依赖性蛋白激酶 5 (CDK5 )mRNA在脑发育中的表达与分布。方法 采用胚胎期至老年期小鼠全胚胎及脑切片的原位杂交染色。结果 ①全胚胎原位杂交染色发现脑内CDK5mRNA从胚胎 10 5d(E10 .5 )开始表达 ,主要分布于神经上皮的套层细胞内 ;②脑切片的原位杂交染色观察到从E14到成年期脑内均见CDK5mRNA阳性信号 ,主要定位于神经元的胞浆与核周 ,于新生期前后表达达高峰 ;分布于包括大脑皮层、海马、丘脑、下丘脑、小脑及许多神经核团。在老年期上述区域CDK5表达均有减弱 ,部分区域呈阴性。结论 表明脑内CDK5作用贯穿了整个脑的发育阶段 ,且主要参与了神经系统的早期发育 ;成年后CDK5可能继续保持对某些区域中神经元的功能调节。

Cdk5与大鼠脑缺血再灌注损伤时细胞凋亡的关系

目的利用大鼠可逆性大脑中动脉栓塞模型(MCAO),研究周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin dependent kinase 5,Cdk5)对视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)的磷酸化作用与细胞凋亡的关系。方法线栓法制作大鼠MCAO模型,随机分为再灌注0、3、6、9、24h组。通过免疫组化染色观察缺血侧大脑Cdk5和磷酸化Rb的数量和变化,TUNEL标记法检测凋亡神经元数量和变化,Westernblot检测不同再灌注时间Cdk5蛋白水平的表达。结果缺血侧Cdk5随再灌注时间增加而增加,24h达到高峰;再灌注6h出现磷酸化的视网膜母细胞瘤蛋白(pRb),并随再灌注时间增加而增加,24h达到高峰。缺血侧凋亡阳性细胞变化趋势与Cdk5基本一致。缺血侧Cdk5蛋白的表达随再灌注时间增加而增加,缺血对侧无明显变化。结论大鼠局限性脑缺血再灌注损伤可以诱导Cdk5数量和激酶活性增加,通过底物磷酸化作用引起神经细胞凋亡。

CDK5基因修饰神经干细胞体系的建立和分化特性的研究

目的建立携带CDK5与绿色荧光蛋白(GFP)的神经干细胞体系并观察CDK5对神经干细胞的作用。方法采用PCR、分子克隆与测序等技术成功构建CDK5-pEGFP表达质粒;并通过基因转染等技术将其转染入体外培养的神经干细胞中。结果(1)CDK5-pEGFP表达质粒经酶切、测序鉴定重组成功。(2)转染后神经干细胞分化24h后观察到表达CDK5的GFP荧光细胞已显示清楚的短突起,而对照组细胞的突起不明显;72h后表达CDK5的GFP细胞突起增长尤为明显,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);GFP阳性细胞体积也增大,突起明显增多、加粗。结论CDK5的表达可促进分化后神经细胞突起的生长和延长,并能加快神经细胞的形态成熟。

Cdk5/p35参与了慢性应激诱导的大鼠抑郁样行为

背景:对抑郁症发生机制的研究表明,抑郁症患者表现为海马以及其他脑边缘结构的体积减少和细胞丢失,抗抑郁剂可显著促进抑郁模型动物海马神经元发生,提示神经可塑性机制涉及了抑郁症的发生过程。周期素依赖性蛋白激酶-5(Cdk5)及其活性调节蛋白p35是保持成熟神经系统内边缘系统,尤其是海马中神经元具有潜在可塑性的关键激酶。Cdk5在中枢神经系统发育过程中起着至关重要的作用,主要与神经元迁移、轴突生长和神经递质释放有关,还参与细胞骨架形成、轴突导向、膜转运、突触功能和多巴胺信号转导等多种神经功能调控。然而,在某些病理性因素作用下,Cdk5激酶活性异常升高会引起神经元的过度死亡,导致一些神经退行性疾病的发生。Cdk5在调节神经元的生存方面发挥着重要的作用,那么在抑郁症损伤的海马神经元中,Cdk5是否也参与了神经元的生存过程,从而介导了抑郁症的发生尚未见到报道。目的:本研究将基于抑郁症神经可塑性的研究基础,探讨Cdk5/p35在抑郁症模型大鼠抑郁样行为中的作用,以期进一步阐明抑郁症发生的神经生物学机制,并为临床发现新的治疗抑郁症的有效手段奠定理论基础。方法:采用连续21d的慢性不可预见性的中等强度应激抑郁模型(CMS),以动物的体重变化、蔗糖水偏爱(sucrosep reference)和自发活动能力为指标,考察抑郁模型动物行为学变化;通过测定Cdk5特定底物-组蛋白H1被磷酸化的程度检测大鼠海马部位Cdk5激酶活性,用Westernblot的方法检测p35蛋白的表达;同时在应激过程中,采用微量注射的方法,分别在海马齿状回(DG),CA1及CA3亚区给予Cdk5激酶抑制剂(butyrolactone),观察抑制不同脑区Cdk5激酶对抑郁症模型动物体重,糖水偏爱、自发活动性等抑郁样行为的影响。此外,在慢性应激的同时,连续给予抗抑郁药venlafaxine和mirtazapine,考察抗抑郁剂的治疗作用对海马p35蛋白表达水平的影响。结果:慢性应激大鼠海马部位Cdk5激酶活性显著升高;Western blot结果表明应激大鼠海马DG区胞膜组分p35蛋白的表达水平明显上调,而胞浆p35蛋白表达水平显著降低;相关性分析结果表明海马Cdk5激酶活性与胞膜p35蛋白的表达水平呈明显正相关,而与胞浆p35蛋白的表达水平呈明显负相关;大鼠体重增加值,糖水偏爱与海马胞膜p35蛋白的表达水平呈显著负相关。上述结果表明海马Cdk5激酶活性升高参与了慢性应激诱导的大鼠抑郁样行为。行为学检测结果表明,海马DG区微注射Cdk5激酶抑制剂butyrolactone(50,100ng)可显著逆转慢性应激引起的大鼠抑郁样行为,而在CA1和CA3区微注射butyrolactone(100ng)则对大鼠的抑郁样行为没有明显影响,说明抑制Cdk5激酶活性改善大鼠抑郁样行为具有脑区特异性。在慢性应激实验中发现连续给予抗抑郁药venlafaxine(40mg·kg-1)和mirtazapine(20mg·kg-1)可明显降低DG区胞膜p35蛋白的表达水平,促进p35蛋白由胞膜转运至胞浆,而抗精神病药aripiprazole(5mg.kg-1)对慢性应激引起的DG区胞膜p35蛋白表达增加没有明显影响,说明降低胞膜p35蛋白的表达水平,抑制Cdk5激酶活性是抗抑郁药物特异性的。结论:本研究通过一系列实验证实了Cdk5/p35在慢性应激大鼠抑郁样行为中的作用,抑制Cdk5活性可有效逆转动物的抑郁样行为,抗抑郁剂在发挥治疗作用的同时可抑制Cdk5激酶的异常激活。因此,本研究结果为抑郁症的神经生物学机制研究和临床抗抑郁治疗药物研究开发提供了新的思路。

Cdk5在肾小球足细胞中的表达及作用

目的研究周期素依赖性蛋白激酶-5(Cdk5)及其激活剂p35在肾小球足细胞中的表达及作用。方法分别培养原代小鼠神经细胞、原代小鼠分化成熟的离体足细胞(简称足细胞)以及人胚肾细胞(HEK293细胞),应用免疫印迹、免疫沉淀及同位素标记等方法检测Cdk5、p35的表达及Cdk5的活性;以原代小鼠分化成熟的离体足细胞为研究对象,分为正常组、ROS组(Cdk5活性抑制组)、Cdk5 siRNA组(Cdk5表达沉默组),观察Cdk5的表达及活性,并应用Cdk5 siRNA、Cdk5化学抑制剂-Roscovitine进行抑制实验。结果离体培养原代小鼠分化成熟的足细胞中均有Cdk5及p35蛋白的表达;Cdk5在足细胞中具有活性;沉默Cdk5表达、应用Cdk5活性抑制剂Roscovitine抑制Cdk5活性后,可引起足细胞特异性标志物WT1的表达减少,说明足细胞受到损伤,数量减少。结论 Cdk5的表达及活性在维持正常足细胞功能中起重要作用。