胃癌前病变及胃癌组织中抑癌基因P16、Rb及周期素D_1蛋白表达的研究

目的:研究抑癌基因P16、周期素D1(Cyclin D1)、视网膜母细胞瘤(Rb)蛋白在胃癌前病变(不典型增生和肠化)及胃癌组织中的表达。方法:采用免疫组化法检测10例正常胃黏膜,15例胃不典型增生,15例胃黏膜肠化生,30例胃癌组织中P16、Cyclin D1、Rb蛋白的表达,并结合胃癌临床资料进行分析。结果:P16蛋白阳性表达,正常胃黏膜90％,不典型增生86.67％,肠化86.67％,胃癌36.67％,胃癌组与正常对照组及胃癌前病变组(不典型增生及肠化)间差异均有极显著意义(P<0.01)。Cyclin D1蛋白阳性表达,正常胃黏膜10％,不典型增生20％,肠化20％,胃癌53.33％,胃癌组阳性率与其他3组相比差异有显著性(P<0.05)。Rb蛋白在正常胃黏膜、肠上皮化生、不典型增生及胃癌组织中阳性率分别为90％、80％、80％、50％,其中胃癌组阳性率与正常胃黏膜组相比差异有显著性(P<0.05)。P16、Cyclin D1蛋白与胃癌分化程度、淋巴结转移与否、远处转移与否呈一定的相关性。结论:P16、Cyclin D1、Rb基因在胃癌的发生中起一定的作用;P16、Cyclin D1、Rb蛋白的检测在胃癌的早期诊断中具有一定的价值,并有助于胃癌的预后判断。

压力超负荷致心肌细胞增殖细胞核抗原和周期素D1的表达变化及其与心肌肥大的关系

目的观察压力超负荷所致肥大心肌中增殖细胞核抗原和周期素D1的表达变化,探讨其与心肌肥大的相互关系。方法采用腹主动脉缩窄法建立大鼠心肌肥大模型,在术后不同时间点用颈总动脉插管法动态测定心功能并观察左心室体重比及心肌细胞横径的变化,用免疫组织化学方法检测心肌细胞增殖细胞核抗原和周期素D1表达变化,分别计算其阳性细胞占总心肌细胞数的比率。结果腹主动脉缩窄术后各时间点左心室体重比及心肌细胞横径进行性增高(P<0.05),同时心功能也进行性增强(P<0.05)。增殖细胞核抗原和周期素D1阳性率术后1周时显著增高(P<0.01),随后逐步回降,6周时同对照组相比差异无显著性。结论心肌肥大中不仅有心肌细胞体积的增大而且早期伴有增殖指标高表达,这种增殖指标的高表达随着心脏对负荷的适应逐步回降至正常水平,而心肌细胞体积仍进行性增大。

胃肠道间质瘤nm23和周期素D1的表达及其意义

目的 探讨nm23和周期素D1在胃肠道间质瘤中的表达及意义.方法 对59例手术切除胃肠道间质瘤（Gastrointestinal stromal tumors,GISTs）标本进行CD117、CD34、nm23和周期素D1抗体免疫组化染色并进行半定量分析和病理形态学检查包括年龄、性别、肿瘤大小、部位及核分裂像.所有病例随访2～9年,并进行单因素回归分析.结果 随访结果40例一直健在,15例死于GISTs,4例死于其他原因.肿瘤的大小与转移没有明显的相关性（P=0.431）,肿瘤核分裂像在每50个高倍视野大于5个、nm23低表达和周期素D1高表达与肿瘤的转移呈明显相关性（P=0.04,P=0.01和P=0.05）.结论 核分裂像、nm23和周期素D1免疫组化染色可作为GISTs病人的临床预测指标.

人体胰腺癌细胞株PANC-1中四环素可诱导的周期素D1表达抑制系统的建立(英文)

[目的]在人体胰腺癌细胞株PANC-1中建立一个四环素可调控周期素D1表达系统,研究抑制周期素D1对胰腺癌细胞的影响。[方法]反义周期素D1质粒通过两次稳定转染进入胰腺癌细胞株PANC-1细胞中,其表达调控系统采用Tet-Off系统(四环素调控系统)。通过抑制周期素D1表达对PANC-1细胞生长、集落形成能力以及周期素蛋白表达的影响,评价此系统的可调控性和有效性。[结果]通过第一次转染pTet-Off质粒,选择两个最佳表达克隆行第二次转染pTRE-反义周期素D1质粒,并通过免疫印记测定挑选出能在Tet-Off系统中最有效地表达反义周期素D1的克隆。通过Tet-Off系统对反义周期素D1的调控,发现周期素D1的表达抑制可明显地抑制胰腺癌细胞生长和集落能力,并可导致胰腺癌细胞形态学改变。其抑制作用与四环素调控浓度和时间有关。[结论]此研究在PANC-1胰腺癌细胞株中建立了一个高效、可诱导的反义周期素D1的表达系统。通过这个系统的建立,可进一步在体内和体外研究周期素D1的抑制对胰腺癌细胞的影响,并可结合其它治疗手段如化疗来探讨联合治疗在临床的潜在应用价值。

大肠癌p16^(Ink4a)和周期素D1的表达及临床意义

目的探讨大肠癌p16Ink4a和周期素(cyclin)D1的表达及其临床病理指标和预后的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测大肠癌及正常大肠黏膜中p16Ink4a和周期素D1的表达水平。结果大肠癌组织中p16Ink4a和周期素D1表达率为57.35%和73.53%,而对照组为85.00%和0.00%,两组表达阳性率差异有统计学意义(P<0.01)。p16Ink4a和周期素D1表达与大肠癌分化度、淋巴结转移、临床分期有关。大肠癌中p16Ink4a与周期素D1蛋白表达呈负相关(P<0.01)。结论大肠癌发生机制涉及p16Ink4a和周期素D1调节通路中多个基因的异常,且与大肠癌分级、淋巴结转移及临床分期等有关。周期素D1蛋白高表达可能是大肠癌发生中的早期分子事件,可作为大肠癌早期诊断的标志物。p16Ink4a低表达反映了大肠癌恶性进展,是有价值的预后因子。

皮肤癌组织中激酶抑制蛋白-1和周期素D1的表达

目的:探讨皮肤基底细胞癌(BCC)及鳞状细胞癌(SCC)组织中激酶抑制蛋白-1(P27kip1)和周期素D1(Cyclin D1)的表达及意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测27例BCC、23例SCC和20例正常皮肤组织中P27kip1和Cyclin D1蛋白的表达。结果:BCC和SCC组织中P27kip1表达的阳性率分别为63.0%和26.1%,低于正常皮肤中的95.0%(P<0.05);BCC和SCC组织中Cyclin D1表达的阳性率分别为37.0%和78.3%,高于正常皮肤中的0.0%(P<0.05);在BCC和SCC组织中,P27kip1与CyclinD1的表达相关(P<0.05)。结论:P27kip1异常低表达和Cyclin D1异常高表达可能协同参与BCC和SCC的发生、发展。

周期素D1与p16蛋白及Rb基因在大肠癌中的表达及意义

目的研究cyclinD1(周期素D1),p16及Rb基因表达的蛋白产物在大肠癌组织中的变化及其意义。方法应用免疫组化S-P法,在55例原发性大肠癌中检测cyclinD1,p16及Rb基因蛋白产物的表达。结果cyclinD1蛋白表达阳性率为43.64%(24/55),p16蛋白阳性表达率为47.27%,Rb蛋白阳性表达率为76.36%;cyclinD1,p16及Rb阳性表达与正常结肠直肠黏膜组织之间有非常显著性差异(P<0.01);Rb失活与p16表达之间呈负相关关系(P<0.01);Rb蛋白表达与肿瘤分化呈反比(P<0.01);p16蛋白表达与大肠癌淋巴结转移有关(P<0.01);cyclinD1,p16及Rb蛋白阳性表达率在死亡组与生存组之间有显著性差异(P<0.05)。结论大肠癌发生过程中,存在cyclinD1,p16及Rb蛋白表达的异常,p16、Rb及cyclinD1过度表达与患者的预后密切相关,对肿瘤预后评估有重要意义。

周期素D1蛋白表达对食管癌预后的影响

目的探讨食管癌周期素Ｄ１（ｃｙｃｌｉｎＤ１）蛋白表达对预后的影响，评估食管癌治疗后的生存情况。方法１９７９年１１月至１９９６年１２月，１６４例食管癌患者在我院接受术前放疗及根治性食管癌切除术。放疗前活检标本和放疗后手术标本均经病理证实为鳞状细胞癌。采用前后两野垂直照射，肿瘤剂量３０～４０Ｇｙ，１５～２０次／３～４周。常规免疫组化ＳＰ方法检测ｃｙｃｌｉｎＤ１蛋白表达。结果食管鳞癌放疗前、后标本的ｃｙｃｌｉｎＤ１蛋白表达阳性率分别为６２．５％（６５／１０４）和６０．８％（９３／１５３），且放疗不能改变ｃｙｃｌｉｎＤ１蛋白表达水平。放疗后标本ｃｙｃｌｉｎＤ１蛋白表达程度不同，其生存率亦不同（Ｐ＝０．０５５）；表达者与不表达者比较，生存率差异有显著性（Ｐ＝０．０２）。尤其对无淋巴结转移者，放疗前、后ｃｙｃｌｉｎＤ１蛋白的表达，均能明显地预示生存情况。结论ｃｙｃｌｉｎＤ１蛋白表达可以预测食管癌的预后，放疗对其表达无明显影响，有可能作为食管癌临床分期的参考指标。

大肠癌中转化生长因子βⅡ型受体及周期素D_1表达关系的研究

[目的]研究转化生长因子β(TGF-β)Ⅱ型受体(TGF-βRⅡ)及周期素D1(Cyclin D1)在大肠癌、大肠腺瘤中的表达,探讨其在大肠癌发病中的作用机制。[方法]应用免疫组织化学SABC法,即应用兔抗人TGF-βⅡ单抗和鼠抗人Cyclin D1单抗,对56例大肠癌、29例大肠腺瘤及56例相应癌旁正常组织进行免疫组织化学染色。[结果]TGF-βRⅡ表达主要位于细胞膜和细胞质中,其在大肠癌中的阳性表达率(44.64%)明显低于大肠腺瘤组织和正常组织(82.76%和96.43%)。Cyclin D1表达主要位于细胞核,其在大肠癌中的阳性表达率(89.29%)明显高于大肠腺瘤组织(41.38%),而正常大肠黏膜未见Cyclin D1强阳性表达。Cyclin D1过表达可明显降低TGF-βRⅡ的表达,二者呈明显的负相关。[结论]TGF-βRⅡ表达下降及Cyclin D1过表达可能在大肠癌发生过程中起重要作用。

周期素D1在胃癌组织的表达及意义

目的探讨胃癌组织中周期素D1蛋白的表达在胃癌发生发展中的意义。方法应用免疫组织化学SP法,检测周期素D1在不同类型胃组织中的表达。结果周期素D1在胃癌、胃黏膜上皮中-重度不典型增生、轻度不典型增生、慢性浅表性胃炎和正常胃黏膜组织中的阳性表达率分别为64.41%、47.06%、32.73%、16.33%和5.08%。有病变的胃组织中的周期素D1蛋白表达均高于正常胃黏膜(P<0.05);胃癌组织周期素D1蛋白表达高于其他类型胃组织(P<0.05)。结论周期素D1过表达可能是胃癌发生过程中的早期分子事件。

周期素D1和生存素在大肠癌组织中的表达及其相关性

目的探讨周期素(cyclin)D1和生存素(survivin)在大肠癌中的表达及其相互关系。方法应用RT-PCR和免疫组化检测周期素D1和生存素在43例大肠癌及其癌旁正常肠组织的基因转录水平和蛋白表达水平。结果周期素D1和生存素在大肠癌组织中表达明显高于癌旁组织(P<0.05),周期素D1和生存素在大肠癌中转录水平和蛋白水平表达均呈正相关(P<0.05)。结论周期素D1和生存素基因在结直肠癌组织中均呈高表达,两者在大肠癌的发生发展中发挥着协同作用。

Let-7a靶向调节周期素D2抑制胶质瘤细胞增殖

目的探讨let-7a通过靶向调控周期素D2(cyclin D2)对胶质瘤细胞增殖的影响。方法在U87和U251胶质瘤细胞中转染入化学合成的let-7a模拟物上调let-7a表达,荧光素酶报告基因实验检测let-7a与周期素D2的靶向调控关系,Western blot检测转染let-7a后周期素D2的表达情况,MTT和流式细胞术检测let-7a对胶质瘤细胞增殖的抑制作用。结果在胶质瘤细胞中周期素D2是let-7a的靶基因,过表达的let-7a可下调周期素D2表达和抑制胶质瘤细胞增殖。结论let-7a可通过靶向调控周期素D2而抑制胶质瘤细胞增殖。

蛋白酶体抑制剂对星形胶质细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4表达的影响

目的:研究蛋白酶体抑制对体外培养的星形胶质细胞周期素D1(cyclin D1)和周期素依赖性激酶4(CDK4)表达的影响。方法:SD乳鼠皮质星形胶质细胞原代培养,并纯化鉴定;予不同浓度(2和4μmol·-1)的蛋白酶体抑制剂L(lactacystin)对第二代星形胶质细胞进行短期(12h)急性干预处理,应用免疫荧光及Western blot检测星形胶质细胞cyclinD1和CDK4表达的水平。结果:纯化传代的皮质星形胶质细胞经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光鉴定,其阳性率可达99%;lactacystin2和4μmol·-1可诱导星形胶质细胞cyclin D1和CDK4表达的下降,与对照组相比差异有显著统L计学意义(P<0.01)。结论:一定程度蛋白酶体活性抑制可诱导培养的星形胶质细胞cyclin D1和CDK4表达的减少,从而影响胶质细胞细胞周期,促进胶质细胞分化。提示蛋白酶体功能障碍后可能通过影响胶质细胞细胞周期来参与阿尔茨海默病的病理改变。

糖基化终末产物对人表皮角质形成细胞周期调控的影响机制

目的通过体外试验探讨糖基化终末产物(AGEs)对表皮角质形成细胞周期调控的影响机制。方法体外培养的人表皮角质形成细胞经AGEs(150mg/ml)作用后,用噻唑兰(MTT)法研究其增殖活力、流式细胞仪研究细胞周期和凋亡率。用小片断RNA干扰(siRNA)的方法阻断细胞中AGEs受体(receptor of AGEs,RAGE)mRNA的表达,realtime PCR鉴定其阻断效率。RT-PCR法检测RAGE阻断前后各组细胞内RAF-1、黏着斑激酶(FAK)、周期素(cyclin)D1、cyclinB1、周期表依赖性激酶4(CDK4)的核酸水平表达差异。结果经AGEs干预后表皮角质形成细胞增殖活性下降,凋亡率升高,细胞周期G2期的比例显著增高,而细胞周期调控相关因子及信号因子RAF-1、cyclinD1、cyclinB1、CDK4的核酸表达较对照组却明显升高,用RAGE阻断以上因子后表达则与对照组相比无差异。结论在上述体外模型下,表皮角质形成细胞的周期调控因子升高,而增殖却下降且凋亡增加,可能是AGEs干预后细胞内启动内源性代偿调控机制,且这种调控机制与其受体(RAGE)途径相关;AGEs也可能还通过以上细胞周期调控因子以外的其他途径或机制影响细胞生物学功能。

Cyclin D1在急性白血病骨髓组织中的表达及临床意义

目的:探讨Cyclin D1在急性白血病骨髓组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化染色法,检测急性白血病组、对照组骨髓组织中Cyclin D1的表达情况。结果:急性白血病组骨髓组织中Cyclin D1阳性表达率与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);复发难治患者(8/13)骨髓组织中Cyclin D1的表达高于初发未治患者(9/29)。结论:Cyclin D1与急性白血病的发生、发展及预后存在一定关联。

苯那普利和缬沙坦联合应用对肾病大鼠肾脏细胞周期调控的影响

目的:探讨苯那普利和缬沙坦联合应用对肾硬化大鼠肾脏细胞周期调控的影响。方法:55只SD大鼠分为5组,即对照组、模型组、苯那普利组、缬沙坦组及联合组。对模型组和三治疗组大鼠行单侧肾脏切除,1周后给予阿霉素(5mg/kg)尾静脉注射,建立肾小球硬化模型。自注射阿霉素后,苯那普利组和缬沙坦组分别给予苯那普利6mg.kg-1.d-1、缬沙坦20mg.kg-1.d-1灌胃,联合组给予苯那普利3mg.kg-1.d-1联合缬沙坦10mg.kg-1.d-1灌胃。12周后全部处死,检测肾脏周期素D1和P27的表达,计算阳性细胞所占的百分数。结果:周期素D1在苯那普利、缬沙坦、联合组较模型组明显减少(P均<0.01),而联合组与苯那普利、缬沙坦组之间无差异。P27在苯那普利、缬沙坦、联合组较模型组明显增高(P均<0.01),而联合组又高于苯那普利、缬沙坦两组(P均<0.05)。P27与周期素D1均呈负相关。结论:苯那普利和缬沙坦均通过减少肾脏周期素D1和增加P27的表达延缓肾小球硬化,联合应用苯那普利和缬沙坦对P27的调控比单独应用作用更大。

CyclinD_1在大肠良、恶性肿瘤中的表达及与大肠癌生物学特性关系的研究

目的 研究CyclinD1在大肠良、恶性肿瘤中的表达 ,探讨其在大肠癌发病中的作用机制及与大肠癌生物学特性的关系。方法 应用免疫组织化学SABC法进行研究。结果 CyclinD1在大肠癌中的过表达率显著高于大肠腺瘤 ,而正常大肠粘膜中未见CyclinD1过表达 ,CyclinD1过表达与肿瘤部位、组织学类型、组织分化程度、淋巴结转移均无相关性 ,只与组织浸润深度呈显著正相关。结论 CyclinD1过表达在大肠癌形成过程中起重要促进作用 ,且CyclinD1过表达可作为大肠癌预后不良的指标之一。

叶黄素对人食管鳞癌细胞诱导分化效应与机制探讨

目的探讨叶黄素对食管癌EC9706细胞诱导分化的影响及其机制。方法食管癌EC9706细胞采用开放式单层贴壁培养。实验设溶剂对照及叶黄素3个剂量组,采用MTT法及流式细胞术,对EC9706细胞的增殖和细胞周期进行分析,HE染色对细胞的形态学进行观察,酸解DNA甲绿-派洛宁技术了解增殖与分化型细胞比例,免疫组化检测cyclinD1的表达。结果与溶剂对照组比较,叶黄素(100μg/mL和150μg/mL)可明显抑制EC9706细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,降低细胞增殖指数,细胞形态趋向良性分化,cyclinD1表达水平降低。结论叶黄素可通过抑制cyclinD1表达而介导食管癌EC9706细胞增殖抑制和诱导成熟分化。