周氏克金岩方有效成分槲皮素促进肺癌细胞NCI-H460凋亡的相关机制研究

目的观察周氏克金岩方有效成分槲皮素诱导肺癌细胞NCI-H460凋亡的相关作用机制。方法采用Hoechst33258染色及透射电镜(TEM)观察槲皮素诱导细胞凋亡的形态学变化,结合Western blot法检测槲皮素对细胞内EGFR-Ras-Raf-MEK/ERK1/2及凋亡相关通路的影响。结果各浓度的槲皮素处理细胞24h后,以25、50μmol/L 2个药物浓度处理组的凋亡特征更为显著,荧光显微镜下可见细胞核或细胞质内浓染致密的颗粒块状荧光;在25μmol/L槲皮素处理细胞48h后在透射电镜的观察图片中也呈现出了细胞凋亡的特征;Western blot法对信号通路相关蛋白的检测结果表明,12.5μmol/L的槲皮素能显著抑制c-Raf的活化,而在25μmol/L下能促进caspase-3和caspase-7的活化。结论槲皮素能通过抑制c-Raf的激活,抑制EGFR-Ras-Raf-MEK/ERK1/2信号通路,同时诱导肺癌细胞凋亡。

周氏克金岩方促进舌苔形成相关细胞凋亡作用机制

目的探讨周氏克金岩方促进舌苔形成相关细胞凋亡的作用机制。方法体外培养SAS和TCA-8113舌鳞癌细胞,撤除血清模拟舌苔形成相关细胞凋亡环境,周氏克金岩方正丁醇部位作用舌鳞癌细胞,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡,ELISA检测细胞培养上清PGE2含量。结果与对照组相比,周氏克金岩方丁醇部位能够降低舌鳞癌细胞的增殖活性,促进SAS和TCA-8113细胞凋亡率升高,抑制细胞分泌PGE2,且具有剂量和时间依赖性。结论周氏克金岩方正丁醇部位促进舌苔形成相关细胞凋亡与抑制PGE2合成相关。

周氏克金岩方提取部位抗A549细胞增殖的研究

目的观察周氏克金岩方提取部位对肺癌A549细胞生长和凋亡的影响。方法MTT法观察不同浓度的克金岩方提取部位对肺癌A549细胞和正常人胚肺成纤维细胞HFL-I生长增殖的影响。Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察A549细胞凋亡的形态变化,同时用流式细胞仪进行细胞周期检测分析。结果不同浓度提取部位E对A549细胞有不同程度的生长抑制作用;作用48 h后,荧光显微镜下可见A549细胞核固缩,染色质凝聚等凋亡形态学特征;流式检测显示G0/G1期细胞增多,并有凋亡细胞出现。结论周氏克金岩方提取部位E能够显著抑制肺癌细胞的生长,并对人体正常细胞(胚肺成纤维细胞)无显著影响。

周氏克金岩方抗A549肺癌细胞多糖组分的研究

目的研究周氏克金岩方治疗肺癌的物质基础。方法用醇沉法提取周氏克金岩方多糖,采用Sevag法纯化,DEAE纤维素阴离子交换树脂制备多糖组分,紫外光谱检测蛋白存留情况,红外光谱分析组方药的归属,采用蒽酮-硫酸比色法测定多糖组分含量。结果该有效多糖组分在240nm和260nm处无吸收,其红外光谱图与组方药玉竹、猫爪草和仙鹤草的红外光谱图有很大的相似性,周氏克金岩方中该多糖组分含量为1.41%。结论抗A549肺癌细胞多糖组分不含蛋白和核酸,来源于组方药玉竹、猫爪草和仙鹤草,周氏克金岩方中含有一定量的多糖组分。

周氏克金岩方抗肺癌A549细胞有效部位Ⅰ成分分析研究

目的对周氏克金岩方有效部位Ⅰ的成分进行定性定量分析,为深入研究周氏克金岩方抗肺癌有效部位群物质基础奠定基础。方法通过试管反应和TLC方法定性鉴别有效部位成分,建立亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定总黄酮含量、香兰素-冰醋酸-高氯酸比色法测定总皂苷的含量。结果周氏克金岩方有效部位Ⅰ中主要含黄酮、皂苷类成分,含量分别为0.85%、 1.07%,纯度分别为29.7%、 37.4%。结论周氏克金岩方有效部位Ⅰ中主要含有黄酮和皂苷类成分,总纯度为67.1%。

GC法同时测定周氏克金岩方挥发油配伍前后变化

目的建立周氏克金岩方(红花、麦冬、苏木、仙鹤草、鱼腥草、猫爪草等)中5个挥发油成分定量测定方法,比较配伍前后含有量变化特征。方法利用GC法测定5种挥发油成分。HP-innowax型色谱柱(15 m×0.25 mm×0.25μm);程序升温,初始为70℃,保持10min,以10℃/min速率升至160℃,保持5 min,以0.5℃/min升至165℃,保持5 min,再以10℃/min速率升至225℃。结果樟脑、甲基正壬酮、乙酸龙脑酯、癸酸及月桂酸分别在0.007 9～0.197 5μg、0.013 6～0.339 5μg、0.363 4～9.085 5μg、0.039 0～0.975 0μg及0.050 2～1.255 0μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为100.17%、98.81%、98.58%、99.40%、100.13%。周氏方挥发油指标性成分量在配伍前后有明显变化,配伍后甲基正壬酮、癸酸、月桂酸量增加为配伍前的274.62%、437.73%、112.63%,樟脑、乙酸龙脑酯量降为配伍前的48.97%、58.86%。结论此方法操作快速简便、稳定可行,初步反映了该方配伍减毒增效的合理性。

周氏克金岩方有效部位中黄酮皂苷的分离工艺研究

目的:对周氏克金岩方有效部位中黄酮皂苷类成分进行分离纯化工艺研究,为深入研究周氏克金岩方抗肺癌物质基础、开发新药奠定基础。方法:应用溶剂法分离,以黄酮、皂苷的含量为指标,采用正交设计优选提取物浓度、PH值、静置条件的最佳分离工艺条件。结果:有效部位提取物的浓度为0.5g.mL-1,PH=7,常温静置24h,黄酮和皂苷提取物的纯度分别为70.25%和71.32%;结论:用溶剂法分离周氏克金岩方有效部位中的黄酮皂苷部位,分离工艺简单,操作容易,能达到较好的分离效果。

周氏克金岩方对Lewis肺癌小鼠凝血功能的影响

肿瘤转移是临床上导致癌症病人死亡的主要原因。肿瘤转移的关键调节信号来源于癌细胞和肿瘤微环境细胞分子之间的相互作用,包括肿瘤相关的成纤维细胞、免疫细胞及内皮细胞等。其中,肿瘤细胞与血小板的相互作用既存在于肿瘤微环境,也存在于血液环境或腹水中,对肿瘤的生长和转移至关重要[1]。临床超过30%的恶性实体瘤病人中都存在血小板增多症[2]。血小板数量和聚集程度的明显提高不仅促进肺癌的血行转移[3],还是造成肺癌病人静脉栓塞的重要原因[4-5]。“周氏克金岩方”(简称克方)为国医大师周仲瑛教授的临床肺癌治疗验方。前期研究表明,其具有较好的抑瘤作用,同时对小鼠生存期及生存质量具有明显的改善作用[6]。本研究拟揭示该方对Lewis肺癌小鼠模型凝血功能的影响。