对腺病毒合并呼吸合胞病毒双重感染婴幼儿肺炎中药治疗的临床观察

腺病毒合并呼吸合胞病毒双重感染的婴幼儿肺炎是冬、春季节的常见病、多发病,在临床上已有报道,其病程较长,直接损害婴幼儿健康。在有效抗瘸毒药物尚未问世之际。

天龙喘咳灵干预呼吸合胞病毒诱导小鼠哮喘模型BALF细胞因子的影响

目的 :观察天龙喘咳灵干预呼吸道合胞病毒 (RSV)感染引起BALB c小鼠哮喘模型支气管肺泡灌洗液 (BALF)细胞因子白细胞介素 4 (IL 4 )、白细胞介素 5(IL 5)和γ 干扰素 (IFN γ)的影响及其与气道炎症反应的关系。方法 :用酶联免疫吸附试验 (ELISA)法 ,分析了 18例RSV感染引起BALB c小鼠哮喘 (其中RSV致敏组 8例 (A组 )、天龙喘咳灵干预组 5例 (B组 )、纯化抗小鼠IL 5单克隆抗体干预组 (C组 )和 5例阴性对照组 (D组 )的BALF经RSV诱导表达IL 4、IL 5和IFN γ的水平 ,并分析RSV感染引起BABL c小鼠哮喘模型BALF炎症细胞聚集浓度及肺组织病理与气道炎症反应的关系。结果 :(1)B组干预RSV感染诱导BALB c小鼠IL 4 [(8 2 4± 5 33)pg ml]、IL 5[(5 4 2± 4 2 8)pg ml]和IFN γ[(10 5± 2 1 4 7)pg ml]的分泌与A组的IL 4、IL 5和IFN γ的分泌比较 ,差异有显著性 (P均 <0 0 5)。 (2 )B组BALF液的回收率及其细胞分类计数与A组、D组比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5)。 (3)气道及血管周围炎症改善以B组较显著。结论 :天龙喘咳灵对呼吸道合胞病毒感染引起的小鼠哮喘模型 ,可减少其支气管肺泡灌洗液嗜酸细胞的聚集及改善气道免疫因子分泌紊乱 ,进而提示天龙喘咳灵具有抑制炎症细胞活化 。

喜炎平与利巴韦林治疗儿童呼吸合胞病毒肺炎的疗效及安全性比较

目的比较喜炎平与利巴韦林治疗儿童呼吸合胞病毒（RSV）肺炎的疗效和安全性。方法选取2013年9月至2014年12月在天门市第一人民医院治疗并确诊为RSV肺炎的患儿72例为研究对象,采用随机数字表法分为喜炎平组和利巴韦林组,每组36例。喜炎平组患儿在常规治疗的基础上给予喜炎平[0.4 m L/（kg·d）喜炎平注射液加入到100 m L 5%的葡萄糖溶液中,静脉滴注,每日1次]治疗;利巴韦林组患儿在常规治疗的基础上给予利巴韦林[10~15 m L/（kg·d）利巴韦林注射液加入到30 m L 5%的葡萄糖注射液中,分2次静脉滴注]治疗。比较两组患儿临床症状消失时间、病灶消失时间和住院时间;比较两组患儿的疗效、血清白细胞介素6（IL-6）、IL-8及肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平以及治疗期间不良反应发生情况。结果喜炎平组患儿发热、咳嗽、鼻塞和流涕、肺部啰音消失时间胸部X线片上显示的病灶消失时间以及住院时间均短于利巴韦林组[（3.7±0.4）d比（4.8±0.6）d,（4.5±0.5）d比（6.1±0.8）d,（2.2±0.4）d比（3.9±0.6）d,（5.3±0.6）d比（6.8±0.7）d,（6.0±0.6）d比（7.3±0.7）d,（8.0±0.4）d比（11.6±0.6）d],差异有统计学意义（P〈0.01）。喜炎平组总有效率为97.2%（35/36）,利巴韦林组为88.9%（32/36）,喜炎平组临床疗效优于利巴韦林组,差异有统计学意义（P〈0.05）。治疗后,喜炎平组血清IL-6、IL-8及TNF-α水平低于利巴韦林组[（18.4±5.6）ng/L比（26.0±6.3）ng/L、（8.5±2.2）ng/L比（25.5±3.3）ng/L、（12.7±2.9）ng/L比（41.1±6.4）ng/L],差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）。两组不良反应发生率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论喜炎平治疗儿童RSV肺炎的效果较利巴韦林更佳,其还能降低IL-6、IL-8及TNF-α等血清炎性因子的水平,值得在临床推广应用。

基于“肺与大肠相表里”的理论探讨大黄免煎颗粒对呼吸道合胞病毒感染小鼠的治疗效果

目的:从“肺与大肠相表里”理论出发,探讨大黄对呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)感染小鼠的治疗效果。方法:42只Balb/c小鼠随机分为空白对照组、利巴韦林组、大黄低剂量组、大黄中剂量组、大黄高剂量组、病毒对照组,每组各7只。除空白对照组外,其余组小鼠通过滴鼻感染RSV造模,灌胃给药3 d后通过Western bolt法检测小鼠肺组织中的病毒所带荧光蛋白(RSV-GFP)的表达;q-PCR检测小鼠肺组织病毒基因(RSV-G)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达;苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠肺病理学形态变化;冰冻切片观察肺组织病毒荧光情况;病毒空斑法检测小鼠肺匀浆病毒滴度。结果:与病毒对照组小鼠相比,大黄低剂量组小鼠RSV-GFP蛋白表达量降低(P<0.05),差异有统计学意义;大黄各剂量治疗组的RSV-G、TNF-α mRNA相对表达量均低于病毒对照组小鼠(P<0.05),差异有统计学意义;病毒对照组小鼠肺组织出现明显病理改变,肺间质增厚,组织毛细血管淤血,肺泡壁炎细胞浸润,各治疗组病理改变均有所减轻,肺泡壁炎细胞浸润减少;大黄低剂量组、利巴韦林组与病毒对照组相比,病毒荧光强度降低;大黄低剂量组、利巴韦林组小鼠肺部病毒滴度也较病毒对照组下降(P<0.05),差异有统计学意义。结论:大黄免煎颗粒可抑制RSV在小鼠肺组织中复制,降低肺内炎症因子的表达,减轻炎症反应,提高小鼠生存质量。

小儿清炎合剂(716合剂)治疗呼吸道合胞病毒所致呼吸道感染疗效观察及血清学研究

目的探究小儿清炎合剂(716合剂)治疗呼吸道合胞病毒所致呼吸道感染疗效观察及血清学研究。方法将2023年1月至2023年9月江西省儿童医院收治的呼吸道合胞病毒所致呼吸道感染的80例患儿作为研究对象,根据随机对照表法将其分为观察组40例,对照组40例。对照组采用雾化吸入联合静脉输液进行治疗,观察组在对照组的基础上口服小儿清炎合剂(716合剂)。比较两组的临床疗效,治疗前后炎性因子[白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、C反应蛋白(CRP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)],免疫功能水平(CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)),恢复情况和不良反应。结果观察组治疗有效率为95.00%,高于对照组的80.00%(P<0.05)。治疗后,两组IL-6、IL-10、CRP、SAA、TNF-α水平均下降且观察组低于对照组(P<0.05);观察组CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均高于对照组,而观察组CD8^(+)水平低于对照组(P<0.05)。观察组退热、止咳、平喘以及住院时间均小于对照组(P<0.05)。两组在治疗过程中均未出现任何不良反应。结论小儿清炎合剂(716合剂)能够缓解呼吸道合胞病毒感染患儿的炎性症状,增强患儿免疫功能,促进患儿恢复,安全性良好。

更昔洛韦联合雾化重组人干扰素α1b治疗对呼吸道合胞病毒感染肺炎患儿炎症因子及免疫功能的影响

目的:分析更昔洛韦联合雾化重组人干扰素α1b治疗对呼吸道合胞病毒感染肺炎患儿炎症因子及免疫功能的影响。方法:选取本院收治的呼吸道合胞病毒感染肺炎患儿100例作为研究对象。根据随机数表法分为对照和观察两组,各50例;比较两组治疗前、后的炎性因子降钙素原(PCT)、白介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)与免疫球蛋白IgA、IgG、IgM水平,详细记录症状体征消失时间并分析治疗期间发生的不良症状。结果:治疗后两组比较,观察组持续发热、咳嗽、憋喘以及肺啰音消失时间短(P<0.05),血清PCT、IL-6与CRP水平低(P<0.05),血清IgG、IgA、IgM水平明显升高(P<0.05);治疗期间,两组恶心呕吐、白细胞降低、皮疹的总发生率比较无统计学意义(P>0.05)。结论:对呼吸道合胞病毒感染肺炎患儿实施更昔洛韦联合雾化重组人干扰素α1b联合用药可缩短症状体征消失时间,减轻机体炎症反应,提高机体免疫力,安全性相对较好。

热毒宁注射液结合更昔洛韦治疗小儿呼吸道合胞病毒感染肺炎的疗效及对其血清炎性因子的影响

目的探讨热毒宁注射液结合更昔洛韦治疗小儿呼吸道合胞病毒感染肺炎的疗效及对其血清炎性因子的影响。方法选取2020年5月—2023年3月枣庄市薛城区人民医院收治的86例呼吸道合胞病毒感染肺炎患儿进行前瞻性研究,按随机数表法分为对照组和观察组,各43例。对照组采取更昔洛韦注射液治疗,观察组在对照组基础上采取热毒宁注射液治疗,两组均用药7 d。比较两组临床疗效、临床症状消退时间、血清炎性因子水平、免疫学指标、血气分析指标及不良反应发生情况。结果观察组的总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患儿临床各项症状消退时间均短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组患儿血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1(IL-1)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平均低于对照组,CD3^(+)、CD4^(+)高于对照组,CD8^(+)、B细胞低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组患儿酸碱度(pH)、动脉氧分压(PaO_(2))高于对照组,动脉二氧化碳分压(PaCO_(2))低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论将热毒宁注射液与更昔洛韦联合用于呼吸道合胞病毒感染肺炎患儿的临床治疗中,能够有效消除患儿症状,减少炎性因子生成,还可提高患儿免疫力,调节血气分析,且具有较高的安全性。

内蒙古牛呼吸道合胞体病毒的分离鉴定及其全基因组分析

为确定引起内蒙古地区3月龄~6月龄荷斯坦犊牛暴发呼吸系统疾病的病原,并分析其基因组序列,本研究对病死犊牛剖检并观察其各脏器的剖检病变,制备各组织病理切片,观察其组织病变。结果可见犊牛肺脏呈深红色有光泽的肌肉样实变,心脏肥大,肝脏表面散在细小的结节状灰白色病灶,肾脏表面散在细小深红色出血点;组织病理学观察可见典型间质性肺炎,多数各级细支气管腔和肺泡腔内巨噬细胞和淋巴细胞大量增生和浸润,偶见合胞体细胞,在各级细支气管部分黏膜上皮细胞浆内有大小不等的圆形红染的病毒包涵体;轻度纤维化和小坏死灶的变质性肝炎,急性炎性脾肿,多发性小出血灶的慢性硬化性肾小球肾炎。进一步进行RT-PCR检测,结果显示,扩增获得约600 bp的目的条带,测序后与GenBank中相关基因序列比对,结果显示目的基因与牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)美国分离株USII/S1(KU159366)的同源性最高(98.42%),表明该地区某牧场犊牛感染了BRSV。将该病例肺组织研磨上清液接种牛肾细胞(MDBK)盲传3代出现典型的细胞病变,经RT-PCR检测确认为BRSV,进一步表明分离到1株BRSV,命名为IM BRSV-39。分段扩增IM BRSV-39株的全基因组序列,经测序后拼接获得长度为15130 bp的BRSV全基因组序列。采用MegAlign软件分析IM BRSV-39株的全基因组序列、G基因序列和F基因序列的同源性及突变位点;采用MEGA 11软件构建分离株全基因组进化树分析其遗传进化关系。结果显示,IM BRSV-39株的全基因组序列、G基因和F基因序列均与BRSVⅢ亚型分离株相应基因序列的同源性最高、且位于同一进化分支,证实IM BRSV-39株属于BRSVⅢ亚型;突变位点分析结果显示:与BRSVⅢ亚型参考株相比,IM BRSV-39株G基因序列存在7个突变位点,F基因序列存在12个突变位点;G蛋白氨基酸序列存在4个突变位点,其中L13H处在G蛋白的胞质结构域(aa1~aa37);Y^(127)H、I^(139)T、P^(177)L、A^(186)T处在G蛋白的胞外结构域(aa66~aa257);F蛋白氨基酸序列存在5个氨基酸突变位点,其中M^(4)T、M^(7)T、S^(14)C处在F蛋白氨基末端信号肽区(aa1~aa26)。本研究检测并分离到1株BSRV,揭示了该病毒基因组的遗传进化特征,为国内BRSV的深入研究奠定了基础。

苦参碱调控PI3K/AKT信号通路对呼吸道合胞病毒感染小鼠肺部炎症的作用机制研究

目的:基于PI3K/AKT信号通路观察苦参碱对呼吸道合胞病毒(RSV)感染小鼠的保护作用机制。方法:采用RSV病毒悬液滴鼻感染C57BL/6J小鼠建立模型。实验分为3组:对照组、RSV组、RSV+苦参碱组,每组10只。苏木精—伊红(HE)染色及Masson染色法观察小鼠肺组织病理学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定小鼠肺泡灌洗液炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)水平,蛋白免疫印迹(western blotting)检测肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、Bcl-2、Caspase-3及PI3K/AKT信号通路关键蛋白的表达,免疫组化检测肺组织Bax、Caspase-3、PI3K、AKT表达。结果:与对照组比较,RSV组可见明显肺水肿,肺组织细胞呈现染色体聚集,核膜收缩,出现显著的肺部病变症状,同时,肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平上升,Bax和Caspase-3表达水平升高,Bcl-2、P-PI3K、P-AKT表达水平降低(均P<0.05)。与RSV组相比,RSV+苦参碱组小鼠肺水肿显著缓解,肺部病变症状显著减轻,肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、Caspase-3表达水平显著降低,Bcl-2、PPI3K、P-AKT表达显著升高(均P<0.05)。结论:苦参碱可抑制RSV导致的小鼠肺部炎症反应,促进肺组织细胞凋亡,其机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。

人原代呼吸道上皮细胞培养及抗呼吸道合胞病毒活性

为建立人原代呼吸道上皮细胞(Human airway epithelial cell,hAEC)的培养方法,并在hAEC体系上探讨3-硫代吲哚类化合物RSV-A-4和免疫抑制剂代谢产物6-MMPr的抗呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)活性及其机制,从而构建可用于RSV药物筛选及药效评价的细胞模型。采集人呼吸道上皮细胞样本,分离细胞后建立hAEC的培养方法,并进行细胞形态和活力鉴定;在hAEC体系上检测小分子化合物RSV-A-4和6-MMPr的抗RSV活性及其细胞毒性;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)与Time-of-addition assay技术,探讨RSV-A-4和6-MMPr的抑制RSV复制的作用机制。培养的hAEC经鉴定:其体外培养存活率可达93.51%;RSV-A-4和6-MMPr的半数抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC_(50))分别为(207.30±4.77)μmol/L和(3191.00±6.11)μmol/L,6-MMPr的半数细胞毒性浓度(Half maximal cytotoxic concentration,CC_(50))为(95526.00±10.97)μmol/L,而RSV-A-4对hAEC未见明显细胞毒性;RSV-A-4和6-MMPr均在RSV病毒基因组复制阶段抑制RSV复制。成功建立可用于抗RSV药物筛选及体外评价的hAEC培养体系,RSV-A-4和6-MMPr在细胞水平均能有效抑制RSV复制。

儿童呼吸道合胞病毒感染临床诊治中国专家共识(2023年版)

儿童呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染疾病负担重。据《柳叶刀》报告,2019年全球5岁以下儿童RSV相关急性下呼吸道感染(lower respiratory tract infection,LRTI)病例高达3300万例,住院患儿约360万例,死亡病例逾10万例,目前尚无显著下降趋势[1-2]。2019年我国5岁以下儿童RSV相关LRTI病例数达350万,住院人数62万~95万[1]。与此同时,RSV感染防治技术取得了长足的进步,如RSV疫苗研发获得了突破性进展。

五虎汤对呼吸道合胞病毒感染细胞外泌体致哮喘小鼠自噬及IL-8、IL-23、muc5ac表达的影响

目的观察五虎汤对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的骨髓间充质干细胞外泌体(BMSCs-ExoRSV)致哮喘小鼠肺组织自噬及白细胞介素(IL)-8、IL-23、muc5ac表达的影响,探讨其治疗哮喘的作用机制。方法40只SPF级雄性C57小鼠随机分为空白组、模型组、五虎汤组和利巴韦林组,每组10只。空白组予PBS滴鼻,其余组予BMSCs-Exo-RSV滴鼻,隔日1次,共7次。造模结束后24 h,五虎汤组灌胃五虎汤药液,利巴韦林组灌胃利巴韦林溶液,空白组和模型组灌胃蒸馏水,每日1次,连续7 d。观察小鼠一般状况,检测小鼠呼气峰流速(PEF)和用力肺活量(FVC),HE和Masson染色观察肺组织炎性浸润和胶原沉积情况,RT-qPCR检测肺组织LC3A/B、beclin-1、p62、IL-8、IL-23、muc5ac mRNA表达,Western blot检测肺组织LC3B、beclin-1、p62蛋白表达,免疫组化检测肺组织IL-8、IL-23、muc5ac蛋白表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量下降,出现呼吸急促、点头样喘息、上肢缩抬、耸肩、竖毛、搔鼻等改变,PEF和FVC降低(P<0.01),肺组织炎性浸润和胶原沉积增多,肺组织LC3A/B、beclin-1、IL-8、IL-23、muc5ac mRNA表达升高(P<0.01),p62 mRNA表达下降(P<0.01),LC3BⅡ、beclin-1、IL-8、IL-23、muc5ac蛋白表达及LC3BⅡ/Ⅰ比值升高(P<0.01),LC3BⅠ、p62蛋白表达下降(P<0.01)。与模型组比较,五虎汤组和利巴韦林组小鼠哮喘症状有所改善,PEF和FVC升高(P<0.01,P<0.05),肺组织炎性浸润和胶原沉积减少,肺组织LC3A/B、beclin-1、IL-8、IL-23、muc5ac mRNA表达下降(P<0.01),p62 mRNA表达升高(P<0.01),LC3BⅡ、beclin-1、IL-8、IL-23、muc5ac蛋白表达及LC3BⅡ/Ⅰ比值下降(P<0.05,P<0.01),LC3BⅠ、p62蛋白表达升高(P<0.01)。结论BMSCs-Exo-RSV能通过促进小鼠肺组织自噬及IL-8、IL-23、muc5ac表达诱发哮喘改变,五虎汤能通过抑制自噬并降低IL-8、IL-23、muc5ac表达对哮喘小鼠发挥治疗作用。

化湿败毒颗粒治疗呼吸道合胞病毒肺炎模型小鼠的脂质组学研究

目的探究化湿败毒颗粒对呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)肺炎模型小鼠的治疗作用以及对肺组织脂质代谢的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、利巴韦林组、地塞米松组、化湿败毒颗粒低剂量组和化湿败毒颗粒高剂量组。分别采集各组小鼠肺组织样本,观察其病理改变,检测肺组织中RSV-F、RSV-G、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平。采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用(UPLC-Q Exactive Orbitrap MS)技术对肺组织进行脂质组学分析,寻找脂质代谢变化。结果与空白组相比,模型组小鼠肺组织出现肺间质增厚,可见明显炎症浸润。肺组织病毒载量及肺部炎症因子如IL-1β、TNF-αmRNA水平显著升高(P<0.001)。同时,与空白组相比,模型组呈现脂质代谢的明显异常,具体表现为磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油(PG)、鞘磷脂(SM)、神经酰胺(Cer)、甘油三酯(TG)、甘油二酯(DG)、脂肪酸(FA)、醚磷脂酰胆碱(PC O)、醚溶血磷脂酰胆碱(LPC O)等脂质代谢紊乱。经化湿败毒颗粒(25.12 g·kg^(-1)·d^(-1))干预可以调节上述脂质紊乱。结论化湿败毒颗粒可以通过调控脂质代谢,降低RSV感染小鼠肺组织中的病毒载量,减轻炎症反应等途径治疗RSV肺炎。

甘草酸抑制呼吸道合胞病毒感染支气管上皮细胞凋亡的机制研究

目的:探讨甘草酸对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的支气管上皮细胞凋亡的影响,分析其机制是否与内源性酪氨酸激酶2(JAK2)/信号传导和转录激活因子3(STAT3)信号通路有关。方法:将HBE细胞分为对照组、感染组(RSV组)、低剂量甘草酸组(RSV+L-甘草酸组)、中剂量甘草酸组(RSV+M-甘草酸组)、高剂量甘草酸组(RSV+H-甘草酸组)、RSV+Colivelin组、RSV+H-甘草酸+SD-1029组。对照组细胞不经任何处理;RSV组用含0.0001 PFU/mL的RSV病毒溶液培养细胞2h,再更换为正常培养液培养24h;RSV+L-甘草酸组、RSV+M-甘草酸组和RSV+H-甘草酸组在RSV感染HBE细胞模型的基础上,用30、60、120μg/mL甘草酸处理的培养基培养的细胞;RSV+Colivelin组在RSV感染HBE细胞模型的基础上,用含有浓度为0.5μmoL/L JAK2/STAT3信号通路激活剂Colivelin处理的培养基培养细胞;RSV+H-甘草酸+SD-1029组在RSV感染HBE细胞模型的基础上,用120μg/mL甘草酸和10μmoL/L JAK2/STAT3信号通路抑制剂SD-1029共同处理的培养基培养细胞。24h后收集细胞,CCK-8试剂盒检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;ELISA检测细胞上清液中IL-6、TNF-α水平;western blot检测细胞中Bax、cleaved-Caspase-3、Bcl-2、p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白表达情况。结果:与对照组比较,RSV组OD值、Bcl-2、cleaved-Caspase-3、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、IL-6、TNF-α水平、Bax蛋白表达量显著升高(P<0.05);与RSV组比较,RSV+L-甘草酸组、RSV+M-甘草酸组、RSV+H-甘草酸组、RSV+Colivelin组OD值、Bcl-2、cleaved-Caspase-3、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达均显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、IL-6、TNF-α水平、Bax蛋白表达量显著降低(P<0.05);与RSV+H-甘草酸组比较,RSV+H-甘草酸+SD-1029组OD值、Bcl-2、cleaved-Caspase-3、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、IL-6、TNF-α水平、Bax蛋白表达量显著升高(P<0.05)。结论:甘草酸可能通过激活JAK2/STAT3信号通路,促进RSV感染的支气管上皮细胞增殖,抑制RSV感染的支气管上皮细胞的凋亡。

HMGB1对呼吸道合胞病毒毛细支气管炎合并肾脏受累型过敏性紫癜患儿单核细胞免疫功能的影响

目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)对呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎合并肾脏受累型过敏性紫癜(HSP)患儿单核细胞免疫功能的影响。方法:选择初诊为RSV毛细支气管炎合并肾脏受累HSP患儿30例作为观察组,选取同期进行体检的健康足月婴幼儿30名作为对照组,2组婴幼儿入院后采集血浆样本,进行常规血细胞分析和C反应蛋白(CRP)水平检测,并采用ELISA法检测2组婴幼儿血浆中HMGB1的表达水平。采用人重组RSV-A2病毒转染人支气管上皮细胞系16HBE,并收集细胞培养上清检测HMGB1。使用经孔板共培养RSV感染细胞、无感染组的人支气管上皮细胞系16HBE和单核细胞THP1,qRT-PCR法测定细胞总RNA,采用Western blotting检测单核细胞中Toll样受体TLR-4和TLR-7的水平。结果:RSV毛细支气管炎合并肾脏受累HSP患儿外周血较健康对照组较健康对照组中HMGB1的表达水平升高(t=5.84,P<0.05),且外周血单核细胞数量、外周淋巴细胞数量及CRP水平与RSV毛细支气管炎合并肾脏受累HSP患儿外周血中HMGB1表达水平呈正相关关系(r=0.606、0.301、0.394,P<0.05),其中外周血单核细胞数量与外周血中HMGB1表达水平相关性最显著(P<0.05)。经qRT-PCR检测,经病毒转染后的16HBE细胞培养基中HMGB1的表达相较对照组显著增加(t=5.41,P<0.05)。RSV转染的16HBE细胞、感染对照组、HMGB1抑制组分别与单核细胞THP-1进行共培养后,经Western blotting检测单核细胞中TLR-4和TLR-7蛋白的表达水平,结果显示THP-1细胞中TLR-4的表达水平增加(P<0.05),而TLR-7水平无显著变化(P>0.05)。结论:HMGB1的表达水平与儿童RSV毛细支气管炎合并肾脏受累HSP病情的发展有关,HMGB1在单核细胞介导的免疫性炎症中起着重要作用,对掌握儿童RSV毛细支气管炎的发病机制具有重要意义。

牛呼吸道合胞体病毒一步法实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立一种牛呼吸道合胞体病毒(Bovine respiratory syncytial virus, BRSV)快速简便的检测方法,本研究基于BRSV M基因保守区序列,设计特异性引物及探针,通过优化反应条件,建立用于BRSV检测的一步法实时荧光定量PCR,并验证了该方法的敏感性、特异性和重复性;同时利用建立的检测方法对采集的临床样本进行检测。结果表明:本研究所建立的BRSV荧光定量检测方法,其特异性好,仅对BRSV存在特异性扩增;敏感性高,最低可达10 copies/μL;稳定性好,组内变异系数和组间变异系数小。使用所建立的BRSV一步法实时荧光定量PCR对宁夏地区94份临床样品进行检测,阳性率为5.3%(5/94)。上述结果表明,本研究建立的检测方法可为BRSV的快速诊断提供有力的技术支持。

牛呼吸道合胞体病毒G和F蛋白的生物学功能

牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus, BRSV)是一种在世界范围内引起牛呼吸道疾病的病毒性病因之一,主要引起1岁龄以下犊牛的严重下呼吸道感染。BRSV共编码9种结构蛋白,其中附着蛋白(G蛋白)和融合蛋白(F蛋白)是BRSV表面主要的包膜糖蛋白,参与病毒吸附、融合宿主细胞的过程。G和F蛋白含多种识别表位,能够刺激机体产生中和抗体反应,常常是牛呼吸道合胞体病(bovine respiratory syncytial disease, BRSD)疫苗开发所关注的重点。探究G和F蛋白在BRSV侵染中的作用机理对于病毒致病机理分析、疫苗开发具有重要意义。本文旨在对牛呼吸道合胞体病毒G和F蛋白的结构功能及有关疫苗的开发加以综述,以期为BRSV疫苗的研制和BRSD的防控提供参考。

呼吸道合胞病毒感染诱导哮喘发病机制及中医药防治进展

呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)感染作为反复发作性喘息的潜在易感性因素,可通过免疫损伤、气道上皮屏障损伤、气道炎症浸润、气道高反应性、诱导易感基因高表达等途径影响哮喘的发生发展。中医学认为RSV感染所致哮喘多因感邪后机体气机失调以及邪气留伏所致。通过梳理近年来RSV感染在哮喘发生发展中的作用机制及中医药干预研究,以期为未来应用中西医结合手段防治哮喘提供思路。

非药物干预措施对儿童呼吸道合胞病毒感染的影响

目的探究非药物干预对儿童呼吸道合胞病毒感染的临床特征的影响,为疫情放开后预防呼吸道合胞病毒感染提供依据。方法选取2018年至2021年期间我院住院患儿中确诊为RSV感染者960名,按时间分为无非药物干预期间(2018年至2019年)和非药物性干预(non-pharmaceutical interventions,NPIs)期间(2020年至2021年)两组,收集两组患儿的病例信息,分析两组临床特征情况。结果共有960例患儿,其中无NPIs期间400例,NPIs期间560例,<6月龄组儿童发病率最高(54.3%),重症率为4.2%,无死亡病例。无NPIs期间RSV感染全年散发,NPIs期间RSV感染率随NPIs执行程度变化而变化,无明显季节性变化。无NPIs期间患儿喘息的发生率较高(43.8%vs 37.1%)、患肺炎比例较高(73.0%vs 65.7%)、淋巴细胞百分比,血小板计数、血红蛋白及谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、谷草转移酶的异常频率所占比例较高,住院天数较长[(5.4±1.6)d vs(5.1±1.6)d],差异均有统计学意义(P<0.05)。无NPIs期间RSV感染患儿呼吸频率(respiratory rate,RR)较高,达峰时间比(time to peak tidal expiratory flow as a proportion of expiratory time,TPEF/TE)、达峰容积比(volume to peak expiratory flow as a proportion of exhaled volume,VPEF/VE)较低,差异均有统计学意义(P<0.05),重症发生率两个时期比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论NPIs期间RSV感染流行季节被扰乱,且RSV患儿的气道损伤较轻,两个时期重症率无变化。

尿石素A通过活化miR-136介导的Sirt1信号通路减轻呼吸道合胞病毒诱导的新生小鼠肺部感染

目的探讨尿石素A(UA)治疗呼吸道合胞病毒(RSV)引起的新生小鼠肺部感染的疗效及作用机制。方法将Babl/c小鼠(5~7 d)随机分为5组(n=10):正常对照(Control)组、RSV感染(RSV)组、低剂量UA(UA-L)组、中剂量UA(UA-M)组、高剂量UA(UA-H)组。BEAS-2B细胞同样分为Control组、RSV组、UA-L组、UA-M组和UA-H组。除正常对照组外,其余4组小鼠或细胞均给予RSV感染。RSV感染2 h后,UA-L组、UA-M组和UA-H组小鼠分别腹腔注射2.5、5和10 mg/kg的UA,1次/d,连续注射2周;UA-L组、UA-M组和UA-H组细胞分别用2.5、5和10μmol/L的UA处理48 h。HE染色评价肺组织病理学改变。收集支气管肺泡灌洗液用于炎症细胞计数和炎症因子检测。炎症、细胞活力、凋亡和自噬分别采用酶联免疫吸附实验、CCK-8实验、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记实验、流式细胞术、Western blotting和免疫荧光染色检测。qRT-PCR检测miR-136和Sirt1 mRNA的表达,双荧光素酶报告基因系统验证miR-136和Sirt1的相互关系。结果与Control组相比,RSV感染组小鼠肺组织病理评分、病毒荷载量、TUNEL阳性细胞数、LC3-II/I、Beclin-1和miR-136表达及BALF中总细胞数、炎症细胞数和炎症因子含量显著升高(P<0.0001),而p62和Sirt1表达显著减少(P<0.0001);与RSV组相比,UA处理则呈剂量依赖性逆转上述检测指标值(P<0.05)。与Control组相比,RSV组BEAS-2B凋亡细胞数、LC3B阳性细胞数及miR-136表达明显增多,Sirt1表达减少(P<0.01);与RSV组相比,UA处理剂量依赖性地减弱上述指标的改变(P<0.01)。与miR-NC组相比,miR-136组Sirt1-WT的荧光素酶活性显著降低,Sirt1表达减少(P<0.001),Sirt1-MUT的荧光素酶活性不变(P>0.05)。与RSV+UA组相比,RSV+UA+miR-136组和RSV+UA+Ex527组炎症因子含量和凋亡细胞数明显增加(P<0.05),LC3B表达显著减少(P<0.0001);miR-136与Ex527共处理进一步改变上述指标值(P<0.05)。结论UA通过活化miR-136介导的Sirt1信号通路减轻RSV诱导的新生小鼠肺部感染。