多沙普仑对新生大鼠延髓脑片呼吸节律性放电的调节作用

目的观察多沙普仑对新生大鼠延髓脑片呼吸节律性放电(RRDA)的调节作用。方法制作主要包含延髓面神经后核内侧区(mNRF)的大鼠离体脑片标本,并保留舌下神经根的完整。将36只新生SD大鼠随机分为Ⅰ～Ⅵ组(n=6)。Ⅰ组为对照组;Ⅱ～Ⅳ组为多沙普仑组(浓度分别为2、5、10μmol/L),Ⅴ组给予丙泊酚(20μmol/L),Ⅵ组给予丙泊酚(20μmol/L)+多沙普仑(5μmol/L),观察给药后l、3、5、l0、l5、30min时舌下神经根呼吸节律性放电的变化,并分析吸气时程(TI)、呼气时程(TE)、呼吸周期(RC)、放电积分幅度(IA)的改变。结果Ⅱ组在给药前后脑片RRDA并无明显改变;Ⅲ、Ⅳ组在给药后1min开始,吸气时程明显延长,放电积分幅度增加;呼气时程于第5min时开始缩短(P<0.05),但呼吸周期仅于第10min时缩短,其余时间点无明显改变;Ⅴ组在第3min时开始出现吸气时程缩短、放电积分幅度下降,并伴有呼气时程及呼吸周期延长(P<0.05),第10min时达最大变化值;Ⅵ组RRDA各时间点均无明显改变(P>0.05)。结论5μmol/L多沙普仑可直接兴奋延髓脑片的RRDA,且可完全拮抗丙泊酚对脑片RRDA的抑制作用,此作用主要通过兴奋吸气中枢实现。

A68930对新生鼠离体延髓脑片呼吸节律性放电的影响

目的探讨激活多巴胺D1受体对延髓脑片基本节律性呼吸放电的影响。方法用SPF级新生SD大鼠(0～3d)制备离体延髓脑片标本,随机分成Ⅰ～Ⅳ组(每组n=5),以改良的Kreb's液恒温灌流,稳定记录到与之相连的舌下神经根的呼吸节律性放电活动(RRDA)。Ⅰ组为对照组,只用Kreb's液灌注;Ⅱ～Ⅳ为实验组,分别给予1、2、5μmol/L的多巴胺D1受体特异性激动剂cis-(±)-1-(aminomethyl)-3,4-dihydro-3-phenyl-1H-2-benzopyran-5,6-diolhydrochlo-ride(A68930)持续灌流10min;观察各组改灌前以及改灌后1、3、5min时舌下神经的呼吸节律性放电活动的变化。结果(1)给药后RRDA的呼吸周期(RC)和呼气时间(TE)随时间延长逐渐缩短,放电积分幅度(IA)逐渐增大,5min时RC、TE和IA的变化最明显;在2、5μmol/L组与用药前比较三项指标有统计学差异(2μmol/L组1min时的IA与用药前相比较没有统计学差异);(2)随用药浓度增大RC、TE逐渐减小,而IA逐渐增大,5μmol/L时RC、TE、IA变化最明显;用2、5μmol/L的A68930灌流后,三项指标与对照组比较有统计学差异。结论多巴胺D1受体参与节律性呼吸的调节;多巴胺D1受体可能主要是通过缩短呼气时程增加呼吸的频率,通过增强吸气放电幅度来参与呼吸运动强度的调节。

5-羟色氨_(2A)受体对新生大鼠延髓脑片节律性呼吸放电的调制作用

目的探讨5-羟色氨2A(5-HT2A)受体对新生大鼠延髓脑片节律性呼吸放电的调制作用。方法制作新生大鼠离体延髓脑片标本,给予灌流恒温改良Kreb′s液,记录舌下神经根呼吸相关节律性放电活动(RRDA)。标本分2组:第1组使用含5-HT2A受体特异激动剂2,5-二甲氧基-4-碘苯基丙烷(DO I)的Kreb′s液灌流脑片,观察其对RRDA的影响;第2组使用含5-HT2A受体特异拮抗剂酮舍林的Kreb′s液灌流脑片,观察其对RRDA的影响。结果DO I延长RRDA吸气放电时程(TI)、缩短呼气时程(TE)、缩短呼吸周期(RC)、增强RRDA放电积分幅度(IA),对RRDA有兴奋作用(P<0.01)。酮舍林缩短RRDA的TI,延长TE和RC、减弱IA,对RRDA有抑制作用(P<0.01)。结论5-HT2A受体参与了新生大鼠基本呼吸节律的产生和调节。

孕期酒精暴露对新生大鼠延髓基本节律性呼吸放电的作用

目的：探讨孕期酒精暴露对子代新生大鼠延髓脑片基本节律性呼吸放电（rhythmic respiratory discharge activity, RRDA）的作用。方法制作包含面神经后核内侧区（the medial region of the nucleus retrofacialis, mNRF）并保留舌下神经根的新生大鼠离体延髓脑片标本，给予灌流改良的Kreb＇s液（modified Kreb＇s solution, MKS），使用吸附电极记录延髓脑片腹侧面舌下神经根RRDA，分析RRDA的变化。实验分为5组：对照组、4%酒精暴露组、6%酒精暴露组、8%酒精暴露组和10%酒精暴露组，研究孕期不同浓度酒精暴露对RRDA的作用。结果对照组、4%酒精暴露组、6%酒精暴露组、8%酒精暴露组各组组内RRDA在50 min内吸气时程（TI）、呼吸频率（RF）、放电积分幅度（IA）无统计学差异，10%酒精暴露组RRDA节律不规整；与对照组相比，4%-10%酒精暴露组的RRDA随酒精浓度增加逐渐降低，TI缩短、RF下降、IA减弱。结论孕期酒精暴露抑制子代新生大鼠延髓脑片舌下神经根RRDA，这可能是孕期酒精暴露抑制子代呼吸功能的基础。

尼莫地平对新生大鼠离体延髓脑片节律性呼吸放电的调节作用

目的研究尼莫地平(Nimodipine)对新生大鼠延髓脑片基本节律性呼吸放电的作用,为延髓呼吸中枢相关疾病的临床治疗和尼莫地平的使用提供思路和实验依据。方法制作新生大鼠离体延髓脑片标本,使用95%氧(O2)和5%二氧化碳(CO2)混合气饱和并持续通气的人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid,ACSF)灌流脑片,吸附电极吸附腹侧面舌下神经根,记录节律性呼吸放电(rhythmic respiratory discharge activity,RRDA)。稳定记录到RRDA后分别使用含0.000、0.025、0.050、0.100和0.200μmol/L尼莫地平的ACSF灌流脑片,每个浓度灌流10 min,观察RRDA的改变。结果模型第二组舌下神经根的RRDA的呼吸周期、吸气时称、放电积分幅度等呼吸指标在60 min变化差异无统计学意义;0.025μmol/L和0.050μmol/L的尼莫地平缩短RRDA的呼吸周期,0.100μmol/L的尼莫地平延长呼吸周期,且0.050μmol/L的尼莫地平能够缩短吸气时称,其余浓度无此作用,而高浓度的尼莫地平会出现过度兴奋或癫痫样放电。结论低浓度尼莫地平对RRDA有兴奋作用,高浓度则会引起神经元过于兴奋,在临床治疗中要注意药物的配伍和浓度。

5-羟色胺2C受体对新生大鼠离体延髓脑片基本节律性呼吸放电的调节作用

目的探讨5-羟色胺2C(5-HT2C)受体对新生大鼠离体延髓脑片基本节律性呼吸放电(RRDA)的调节作用。方法取2日龄Sprague-Dawley大鼠18只制备离体延髓脑片标本,使用人工脑脊液(ACSF)灌流脑片,吸附电极记录脑片舌下神经根RRDA。观察使用空白ACSF灌流脑片15、30、45、60 min时RRDA的吸气时程(TI)、呼吸周期(RC)和放电积分幅度(IA)变化情况;使用含1、5、10、20μmol·L^(-1)5-HT2C受体激动剂MK212的ACSF灌流脑片后RRDA的TI、RC和IA变化情况;使用含1、5、10、20μmol·L^(-1)5-HT2C受体阻断剂RS102221的ACSF灌流脑片后RRDA的TI、RC和IA变化情况。结果空白ACSF灌流脑片15、30、45、60 min时RRDA的TI、RC和IA比较差异均无统计学意义(P>0.05)。1μmol·L^(-1)MK212的ACSF灌流脑片后RRDA的TI、IA和RC与给药前比较差异均无统计学意义(P>0.05);5μmol·L^(-1)MK212的ACSF灌流脑片后RRDA表现为TI延长、IA增加、RC缩短(P<0.05);10μmol·L^(-1)MK212的ACSF灌流脑片后RRDA表现较5μmol·L^(-1)MK212的ACSF灌流脑片后TI进一步延长、IA进一步增加、RC进一步缩短(P<0.05);但20μmol·L^(-1)MK212的ACSF灌流脑片后与10μmol·L^(-1)MK212的ACSF灌流脑片后比较,RRDA的TI、IA、RC差异均无统计学意义(P>0.05)。1μmol·L^(-1)RS102221的ACSF灌流脑片后RRDA的TI、IA和RC与给药前比较差异均无统计学意义(P>0.05);5μmol·L^(-1)RS102221的ACSF灌流脑片后RRDA表现为TI缩短、RC延长(P<0.05),IA差异无统计学意义(P>0.05);10μmol·L^(-1)RS102221的ACSF灌流脑片后RRDA表现较5μmol·L^(-1)RS102221的ACSF灌流脑片后TI缩短、IA减少、RC延长(P<0.05);但20μmol·L^(-1)RS102221的ACSF灌流脑片后与10μmol·L^(-1)RS102221的ACSF灌流脑片后比较,RRDA的TI、IA、RC差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 5-HT2C受体对延髓呼吸中枢起着正性调节作用。

孕期酒精暴露抑制低氧环境下新生大鼠耗氧量和基本节律性呼吸放电

目的研究孕期酒精暴露对低氧环境下新生大鼠在体耗氧量和离体延髓脑片基本节律性呼吸放电（RRDA）有无抑制作用。方法成年大鼠分为酒精暴露组和对照组,酒精暴露组从合笼前3天开始以8%酒精水溶液为唯一饮用水源,对照组正常饮食,其余饲养条件相同,使用两组孕鼠产下的新生大鼠：1采用体积描记法测量2-10 d新生大鼠在空气、15%氧浓度、10%氧浓度、5%氧浓度下单位时间内耗氧量,比较两组新生大鼠在不同氧浓度下耗氧量有无差异;2使用2 d新生大鼠制作离体延髓脑片标本,记录RRDA,依次使用经95%氧O2＋5%二氧化碳CO2、80%O2＋4.2%CO2＋15.8%氮N2、65%O2＋3.4%CO2＋31.6%N2、50%O2＋2.6%CO2＋47.4%N2充分饱和的0℃改良kreb’s（MKS）从高氧到低氧灌流脑片,记录并分析各组脑片RRDA的改变。结果 1在体耗氧量实验显示在空气、15%氧浓度、10%氧浓度下两组新生大鼠单位时间内耗氧量差异无统计学意义,在5%氧浓度下,酒精暴露组耗氧量低于对照组。2酒精暴露组脑片放电弱于对照组,即RRDA的吸气时程（TI）、呼吸周期（RC）、放电积分幅度（IA）均弱于对照组。3随着灌流液氧浓度下降,两组脑片放电均逐渐减弱,TI缩短、RC延长、IA降低,酒精暴露组RRDA降低程度大于对照组。结论 1孕期酒精暴露抑制新生大鼠在低氧浓度下摄取氧的能力及离体延髓脑片RRDA。2两组新生大鼠整体耗氧量在5%氧浓度下差异有统计学意义,而离体脑片放电在80%氧浓度即下降的实验结果间接证实外周化学感受器对呼吸有着重要的调节作用。

腺苷A2A受体对新生小鼠离体延髓脑片基本节律性呼吸放电的调节作用

目的:探讨腺苷A2A受体对新生小鼠离体延髓脑片基本节律性呼吸放电(RRDA)的调节作用。方法:制备新生小鼠离体延髓脑片,分别使用含0.0、2.5、5.0、10.0、20.0 nmol/L腺苷A2A受体激动剂CGS21680或拮抗剂SCH58261的人工脑脊液(ACSF)灌流脑片,每个浓度灌流10 min,在每个浓度灌流第6 min时,使用吸附电极记录脑片RRDA,分析吸气时程(TI)、放电积分幅度(IA)和呼吸周期(RC)。结果:CGS21680可以缩短RC,增加TI和IA(P<0.001),对RRDA有兴奋作用。SCH58261则可以延长RC,减小TI和IA(P<0.001),对RRDA有抑制作用。结论:腺苷A2A受体参与调节新生小鼠延髓RRDA,激活腺苷A2A受体对RRDA有兴奋作用。

黄体酮受体对新生大鼠离体延髓脑片呼吸性基本节律放电的调节作用

目的研究延髓面神经后核内侧区(m NRF)神经元细胞膜黄体酮受体对新生大鼠延髓脑片呼吸性基本节律放电(RRDA)的调节作用。方法选择24只2日龄新生大鼠用于制备离体延髓脑片,脑片灌注体积分数95%O2和体积分数5%CO2混合的饱和气体持续通气的人工脑脊液(ACSF),在记录到RRDA后将脑片随机分为4组,每组6个脑片。对照组使用ACSF灌注脑片50 min,以灌流10 min时的数据为对照;黄体酮组分别使用含5、10、20、40μmol·L^(-1)黄体酮的ACSF灌流脑片;米非司酮组分别以含5、10、20、40μmol·L^(-1)米非司酮的ACSF灌流脑片;混合组使用最适浓度黄体酮和最适浓度黄体酮+最适浓度米非司酮联合灌注脑片;比较不同浓度黄体酮、米非司酮及二者联合使用对脑片RRDA的影响。结果对照组、黄体酮组灌注前和5μmol·L^(-1)黄体酮组吸气时程(TI)、吸气幅度(IA)和呼吸频率(RF)比较差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组、黄体酮组灌注前和5μmol·L^(-1)黄体酮组相比,10、20、40μmol·L^(-1)黄体酮组TI延长,IA增强,RF增加(P<0.05);与10μmol·L^(-1)黄体酮组比较,20、40μmol·L^(-1)黄体酮组TI延长,IA增强,RF增加(P<0.05);40μmol·L^(-1)黄体酮组与20μmol·L^(-1)黄体酮组TI、IA及RF比较差异均无统计学意义(P>0.05)。对照组、米非司酮组灌注前和5μmol·L^(-1)米非司酮组TI、IA和RF比较差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组、米非司酮组灌注前和5μmol·L^(-1)米非司酮组比较,10、20、40μmol·L^(-1)米非司酮组TI缩短,IA减弱,RF减少(P<0.05);与10μmol·L^(-1)米非司酮组比较,20、40μmol·L^(-1)米非司酮组TI缩短,IA减弱,RF减少(P<0.05);40μmol·L^(-1)米非司酮组与20μmol·L^(-1)米非司酮组TI、IA和RF比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组和混合组灌注前比较,混合组灌注黄体酮后TI延长,IA增强,RF增加(P<0.05);与灌注黄体酮相比,灌注黄体酮+米非司酮后TI缩短,IA减弱,RF减少(P<0.05);对照组、混合组灌注前和灌注黄体酮+米非司酮后TI、IA和RF比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论延髓呼吸神经元细胞膜上存在黄体酮受体,其参与调节新生大鼠延髓呼吸中枢RRDA,黄体酮受体被激活后对RRDA有兴奋作用。

γ-氨基丁酸A受体对新生大鼠基本节律性呼吸的调节作用

目的探讨γ-氨基丁酸A(GABAA)受体对新生大鼠基本节律性呼吸的产生和调节作用。方法制备新生大鼠离体延髓脑片标本,包括面神经后核内侧区(mNRF),并保留舌下神经根,予灌流改良Kreb′s液(MKS),记录舌下神经根的呼吸相关节律性放电活动(RRDA)。实验分为3组,每组分别使用6只脑片标本。GABA量效关系组:以10、20、40、60μmol/L的GABA灌流脑片,加药前神经放电为对照组,观察RRDA的变化,描记量效曲线,选择最适质量浓度;荷包牡丹碱(bicuculline)组:以10μmol/L bicucul-line灌流脑片,观察RRDA的变化;GABA和bicuculline组:联合应用40μmol/L GABA和10μmol/L bicuculline灌流脑片,观察RRDA的变化。结果GABA对延髓脑片RRDA有抑制作用,使用含GABA的MKS灌流脑片标本可使RRDA的吸气时程(TI)缩短、放电积分幅度(IA)下降、呼吸周期(RC)延长、呼气时程(TE)延长。40μmol/L的GABA对TI、IA、RC、TE等呼吸指标综合效果最显著。GABA可使RRDA的TI缩短、IA下降、RC和TE延长。bicuculline使TI延长、IA增加、RC和TE缩短,对RRDA有兴奋作用。联合使用GABA和bicuculline对RRDA无明显作用。结论生理条件下内源性GABA通过GABAA受体对新生大鼠的基本呼吸节律的产生和调节发挥重要作用。

乙醇对新生小鼠延髓脑片基本节律性呼吸放电的作用

目的观察乙醇对新生小鼠延髓基本节律性呼吸的作用。方法制作新生小鼠离体延髓脑片标本,包含面神经后核内侧区并保留舌下神经根,给予灌流改良Kreb′s液记录舌下神经根的节律性呼吸放电活动(RRDA)。实验分为2组:模型验证组使用改良Kreb′s液灌流脑片标本,记录舌下神经根的RRDA60 min,观察舌下神经根的RRDA有无改变,以判断实验模型的稳定性;实验组使用含0 mg.L-1(对照组)、200 mg.L-1(200 mg.L-1乙醇组)、800 mg.L-1(800 mg.L-1乙醇组)乙醇的改良Kreb′s液灌流脑片,每个浓度灌流15 min,对比RRDA改变,分析乙醇对延髓基本节律性呼吸作用。结果模型验证组舌下神经根的RRDA的呼吸周期、吸气时程、放电积分幅度等呼吸指标在60 min变化无统计学差异;200 mg.L-1的乙醇缩短呼吸周期、延长吸气时程、增加放电积分幅度,对RRDA有兴奋作用;800 mg.L-1的乙醇延长呼吸周期、缩短吸气时程、降低放电积分幅度,对RRDA有抑制作用。结论低质量浓度的乙醇对新生小鼠延髓基本节律性呼吸有兴奋作用,高质量浓度的乙醇对其有抑制作用。

钠钾氯同向转运体2在新生小鼠延髓脑片基本节律性呼吸放电产生中的作用

目的研究延髓面神经后核内侧区呼吸神经元钠钾氯同向转运体（NKCC2）对基本节律性呼吸的调控作用。方法制作包含面神经后核内侧区（mNRF）并保留舌下神经根的新生小鼠离体延髓脑片标本，灌流改良Kreb液（MKS），使用吸附电极记录其舌下神经根的呼吸相关节律性放电活动（RRDA）。依次使用含NKCC2阻断剂呋塞米0、0．125、0．250、0．500和1．000mmol／L的MKS灌流脑片，以呼吸周期（RC）、吸气时程（TI）和放电幅度积分（IA）为观察指标，研究阻断呼吸神经元细胞膜上NKCC2对RRDA的影响。结果在0—0．500mmol／L浓度范围内，呋塞米可缩短RRDA的RC（P〈0．05或0．01），且呈浓度依赖性，1．000mmol／L的呋塞米延长RC（F=25．623，P〈0．05）。随呋塞米浓度增加RRDA的TI逐渐延长（F=6．063，P〈0．05）。在0—0．500mmol／L浓度范围内，RRDA的IA随呋塞米浓度增加而增加（P〈0．05），1．000mmol／L的呋塞米可降低IA（F=6．778，P〈0．05）。在0～0．500mmol／L浓度范围内，呋塞米对RRDA有兴奋作用，1．000mmol／L的呋塞米对RRDA有抑制作用。结论延髓mNRF神经元细胞膜上存在NKCC2，参与新生小鼠延髓基本节律性呼吸的调控。