两株禽呼肠孤病毒S1基因的克隆及序列分析

鸡病毒性关节炎是由禽呼肠孤病毒（Avian reovirus,ARV）引起的幼龄肉鸡的一种重要传染病。临床上主要表现为跗关节双侧性肿大、跛行[1]。由于病鸡运动障碍,生长迟缓,从而导致淘汰率增加,使丧失经济价值的鸡高达30%~50%,给养鸡业造成严重的经济损失。

禽呼肠孤病毒广西分离株σ_3基因的克隆和表达

采用RT_PCR技术扩增禽呼肠孤病毒广西分离株R1σ3基因,将σ3基因克隆至PGEX_4T_1载体上,测序结果表明插入的片段为σ3目的基因。切下目的基因σ3,重组到含有谷胱甘肽(GST)的融合蛋白质粒表达载体PGEX_4T_1,获得重组质粒经PCR酶切以及序列分析鉴定,表达σ3基因插入的位置,大小和阅码框架均正确,表明成功构建了融合表达载体PGEX_R1_σ3。构建好的重组质粒,经1mmol/LIPTG诱导,在大肠杆菌DH5α中得到了表达。融合蛋白GST_R1_σ3的分子量为60ku,以包涵体形式存在。Westernblot分析表明,融合蛋白能够与ARV阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。

新分离呼肠病毒BYD1株实验感染食蟹猴的病理学改变及发病机制

目的 :系统观察新分离呼肠病毒感染食蟹猴的病理学变化 ,探讨其发病机制。方法 :用从SARS患者分离的呼肠病毒BYD1株通过滴鼻和静脉注射两种途径 ,感染 4只食蟹猴 (每组 2只 )。每组分别在感染后 7d和 33d各处死 1只 ,进行肺脏、心肌、肝脏、脾脏、肾脏、肠、脑和淋巴等组织病理学检查。结果 :肉眼观察感染猴肺组织可见水肿和红白相间的实变。病理组织学变化主要集中在肺脏、脾脏、淋巴结和全身小静脉。肺脏表现局部肺泡腔出血 ,并有蛋白液渗出。肺泡间隔充血、淤血、水肿 ,导致肺泡壁增厚。支气管上皮细胞和黏膜纤毛脱落 ,支气管周围单核细胞浸润。脾脏、淋巴结白髓减少 ,红髓淤血 ,发生中心淋巴细胞数量减少。全身组织器官小静脉明显淤血。结论 :食蟹猴实验感染呼肠病毒BYD1株后 ,出现间质性肺炎 ,脾脏、淋巴结萎缩和全身小静脉淤血等一系列组织病理学特征。病毒感染后 ,受侵害肺脏出现血氧交换障碍和免疫器官功能下降是导致食蟹猴发病的内在机制。新分离的呼肠病毒感染食蟹猴出现的病理学变化提示可以作为严重呼吸综合征的病理学模型。

一株猪源1型呼肠孤病毒的分离及鉴定

为了研究猪呼肠孤病毒的分子生物学特性,通过在细胞培养液中添加胰酶的方法,从仔猪腹泻粪样中分离、纯化并鉴定了1株能在Vero细胞上稳定产生细胞病变,以细胞颗粒增多、肿胀、漂落等细胞病变为主要特征的猪源1型呼肠孤病毒SHR-A株。根据呼肠孤病毒的理化特性,对病毒进行初步纯化,然后进行电镜观察、核酸提取、RNA电泳、RT-PCR、各病毒基因扩增和克隆测序等常规病毒学鉴定。SHR-A株S1基因的同源性分析和核苷酸系统发育进化树分析表明,该病毒与哺乳动物呼肠孤病毒血清1型的同源性较高,而与血清2型和3型的同源性较低,因此初步判断该SHR-A株为血清1型,为国内首次报道从猪体内分离到血清1型的呼肠孤病毒。进一步分析发现,SHR-A的S1基因全长为1 465bp,其3′-UTR为3型,其余部分则为1型,说明其S1基因是1型和3型的嵌合体,此结果表明,哺乳动物呼肠孤病毒作为RNA病毒,基因重组可能是其除基因突变和基因重排以外的第3种病毒变异进化的重要方式。