和血生络方联合早期康复训练对缺血性脑卒中偏瘫患者肢体功能的影响及机制探讨

目的:研究和血生络方联合早期康复训练对缺血性脑卒中偏瘫患者肢体功能的影响。方法:选取缺血性脑卒中偏瘫患者98例,采用随机数字表法将所有患者分为对照组(49例)及治疗组(49例)。2组均给予早期康复训练及其相应常规治疗,治疗组增加和血生络方口服,2组患者均连续治疗6周。所有患者均在治疗前及治疗后,采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定外周血血管内皮生长因子(VEGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)的含量,采用流式细胞仪测定外周血骨髓内皮祖细胞(EPCs)相对数量。应用Fugl-Meyer运动功能量表(FMA)、Berg平衡量表(BBS)和改良的Barthel指数(MBI)分别评估2组患者的运动功能和日常生活活动能力,并记录不良反应及再次脑卒中发病情况。结果:与治疗前比较,2组治疗后的FMA、BBS、MBI评分均出现显著升高;治疗后各时间点比较,治疗组均优于对照组(P<0.05),2组安全性评价差异无显著性(P>0.05)。治疗后,2组VEGF、BDNF、SDF-1α、EPCs水平均出现显著升高,且治疗组高于对照组(P<0.05)。结论:和血生络方联合早期康复训练能够显著改善缺血性脑卒中偏瘫患者肢体运动功能,明显提高其生活质量并具有良好的安全性,其机制可能与和血生络方联合早期康复训练能够促进外周血VEGF、BDNF、SDF-1α、EPCs表达有关。

和血生络方对心肌梗死大鼠碱性成纤维生长因子的影响

目的通过观察和血生络方对碱性成纤维生长因子(bFGF)的影响及其促进心肌梗死大鼠心肌血管新生的作用机制。方法选雄性W istar大鼠,制作心肌梗死大鼠模型,随机分为消心痛组和血生络高、低剂量组及模型对照组,同时建立假手术组,每组8只。药物治疗组分别给予和血生络水溶液(9.9,19.8 g.kg-1.d-1)及消心痛水溶液(2.7 mg.kg-1.d-1)每日1次灌胃,其他组给予等量蒸馏水,连续用药3 w后处死大鼠,检测血清中bFGF的含量及心肌中bFGF mRNA表达。结果和血生络高剂量组、消心痛组血清bFGF含量与模型组相比有显著差异(P<0.05)。各用药组均能促进心肌中bFGF mRNA表达,与模型组有显著差异(P<0.05),而且高剂量组强于低剂量组(P<0.05),与阳性对照组无差异(P>0.05)。结论和血生络方促进血管新生的机制可能是通过促进bFGF生成以利于内皮细胞增殖和迁移实现的。

和血生络方对大鼠脑缺血再灌注损伤后血管内皮生长因子和血管生成素的影响

目的：研究和血生络方对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其对血管新生的作用。方法：将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、和血生络方组，后两组制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注（MCAO／IR）模型，和血生络方组给予和血生络方灌胃，各组分别于1d、3d、7d、14d、21d时免疫组化法检测血管内皮生长因子（VEGF）和血管生成素-1（Ang-1）的表达。结果：模型组各时间点VEGF的表达较正常组增加（P〈0．05），在7d达到高峰，和血生络方组比模型组增加更明显，差异有显著性（P〈0．05～0．01）。模型组各时间点Ang-1的表达较正常组增加（P〈0．05），14d达到高峰，和血生络方组比模型组增加更明显，差异有显著性（P〈0．05～0．01）。结论：和血生络方可能通过增强VEGF、Ang—1的表达来促进大鼠脑缺血再灌注后的血管新生。

基于BDNF-Trk B信号通路探讨和血生络方对脑缺血大鼠认知功能的影响及机制研究

目的:基于BDNF-Trk B信号通路探讨和血生络方对脑缺血大鼠认知功能的影响及其作用机制。方法:成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、和血生络方组和和血生络方+抑制剂组,采用改良Zea-Longa大脑中动脉缺血造模方法建立脑缺血大鼠模型,和血生络方组与和血生络方+抑制剂组给予和血生络方浓缩液灌胃给药18.9 mg/(kg·d),持续14 d,假手术组和模型组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。采用水迷宫试验评价大鼠认知功能。免疫荧光染色观察Brd U+/Nestin+细胞和Brd U+/DCX+在海马齿状回颗粒细胞下层的表达;RT-PCR法检测齿状回颗粒细胞下层中Nestin、DCX、BDNF及Trk B的基因表达;Western blot检测齿状回颗粒细胞下层中Nestin、DCX、BDNF及Trk B的蛋白表达。结果:水迷宫实验显示,与模型组和和血生络方+抑制剂组比较,和血生络方组大鼠的逃避潜伏期均显著缩短(P<0.05),穿越平台次数显著增加(P<0.05)。免疫荧光结果显示,在PMD3、PMD7和PMD14,与模型组、和血生络方+抑制剂组比较,和血生络方组显著增加了Brd U+/Nestin+细胞和Brd U+/DCX+细胞在齿状回颗粒细胞下层的表达(P<0.05)。RT-PCR结果表明,在PMD3、PMD7和PMD14,与模型组、和血生络方+抑制剂组相比,和血生络方组MCAO大鼠齿状回颗粒细胞下层Nestin、DCX、BDNF及Trk B的mRNA表达水平显著增高(P<0.05)。Western blot结果显示出与RT-PCR结果相似的趋势。结论:和血生络方能够改善脑缺血大鼠的学习、记忆和空间定位能力,其作用机制与通过上调BDNF-Trk B信号通路促进海马齿状回颗粒细胞下层神经再生有关。

人脐静脉内皮细胞增殖、迁移与和血生络方干预的影响

目的:和血生络方是在《内经》理论指导下,由人参养荣汤化裁而成,临床治疗缺血性心脏病效果良好。实验拟进一步观察和血生络方对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及细胞周期的影响,探讨其促血管生成作用。方法:实验于2006-11/2007-04在白求恩国际和平医院中心实验室进行。和血生络方所用中药黄芪、人参、熟地、当归、白芍、丹参、降香、红景天等购自石家庄乐仁堂药店。常规煎煮,离心去杂,浓缩为1kg/L的水煎液,分别通过1.20,0.45μm的微孔滤膜过滤,最后无菌条件下通过0.22μm的微孔滤膜过滤,密封分装,4℃冷藏备用。采用人脐静脉内皮细胞系ECV-304为模型。将ECV-304细胞贴壁培养24h后,分别换含0.1,0.5,1.0,2.0,4.0g/L和血生络方的RPMI-1640培养液培养,另设正常对照组。每组实验重复3次。采用四甲基偶氮唑盐法分别于药物作用24,48,72,96h检测人脐静脉内皮细胞增殖;流式细胞仪技术分析细胞DNA含量,计算细胞增殖指数;细胞划痕法检测细胞迁移。结果:①与正常对照组比较,和血生络方各浓度组(0.5～4.0mg/L)均可促进ECV-304细胞增殖(P<0.05,P<0.01),且呈剂量依赖性。②正常对照组及和血生络方固定剂量(2g/L)随作用时间的延长,内皮细胞逐渐增殖,72h达到峰值;不同时间点和血生络方组吸光度值均高于正常对照组(P<0.01)。③正常培养的ECV-304细胞周期中G0/G1期、S期及G2/M期细胞分布比例正常;和血生络方组(2g/L)G0/G1期细胞百分率较正常对照组下降(P<0.01),S期细胞百分率增高(P<0.01),而M期无明显变化。④正常对照组ECV-304细胞6h迁移率为17.49%,24h迁移率为41.32%,不同时间点和血生络方各浓度组(0.5～4.0g/L)细胞迁移率均高于正常对照组(P<0.05,P<0.01),且具有剂量依赖效应。结论:和血生络方能够促进人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及DNA合成,提示具有促血管生成作用,可能是其防治缺血性心脏病的作用机制之一。

和血生络方对缺血性卒中大鼠神经功能的影响及其作用机制研究

探讨和血生络方对缺血性卒中大鼠神经功能的影响及其作用机制。方法成年SD雄性大鼠随机分为Sham组、MCAO组、HX组和HX+k252a组,采用大脑中动脉阻断法诱导建立大鼠脑缺血模型(Sham组除外),HX组和HX+k252a组灌胃给予和血生络方药液,每日1次,持续14d,Sham组和MCAO组给予等量生理盐水灌胃。采用TTC染色法测定脑缺血大鼠的脑梗死体积;采用网屏实验评价大鼠的前肢肌力和Ludmila Belayev 12分评分法评价大鼠感觉运动整合能力。免疫荧光染色观察BrdU+/Nestin+细胞在侧脑室室下区(SVZ)的表达;qRT-PCR法检测SVZ中Nestin、BDNF及TrkB的基因表达;Western Blot检测SVZ中Nestin、BDNF及TrkB的蛋白表达。结果与MCAO组比较,在PMD3和PMD7,HX组大鼠脑梗死体积显著减少(P<0.05),在PMD7和PMD14,HX组大鼠的前肢肌力显著增强(P<0.05),PMD3、PMD7和PMD14,HX组大鼠的感觉运动整合能力显著增强;SVZ中BrdU+/Nestin+细胞表达显著增多(P<0.05),Nestin、BDNF、TrkB的蛋白和基因表达均显著增加(P<0.05)。与HX+k252a组比较,HX组大鼠脑梗死体积减小无显著性差异(P>0.05),HX组大鼠的前肢肌力和感觉运动整合能力显著增强(P<0.05);SVZ中BrdU+/Nestin+细胞表达显著增多(P<0.05),Nestin、BDNF、TrkB的蛋白和基因表达均显著增加(P<0.05)。结论和血生络方能够改善脑缺血大鼠的神经功能,这可能与上调BDNF-TrkB信号通路的表达,促进SVZ神经干细胞增殖有关。