咪唑啉1型受体与其候选蛋白的研究进展

咪唑啉1型受体(imidazoline1receptor,I1R)是近年发现的一类新型受体,咪唑啉受体抗体选择性蛋白(imidazolinereceptorantiseraselectedprotein,IRAS)是人工克隆的I1R候选蛋白。该文从I1R和IRAS的特征、分布、生物学功能、信号转导机制等方面近年来的一些研究进展加以阐述,同时对二者的异同点进行比较和分析。

I_1咪唑啉受体对α_(2A)肾上腺素能受体表达和功能的影响

目的在细胞水平研究I_1咪唑啉受体(I_1R)对α_(2A)肾上腺素能受体(α_(2A)AR)表达及功能的影响。方法在完成小鼠I_1R基因和α_(2A)AR基因的质粒测序及酶切鉴定后,分别转染CHO细胞,采用放射性配体-受体结合实验、流式细胞分选技术进行阳性细胞单克隆筛选,建立分别稳定表达I_1R和α_(2A)AR的CHO细胞系,以及共同稳定表达I_1R与α_(2A)AR的CHO细胞系。采用放射性配体-受体结合实验确定α_(2A)AR的亲和力及表达量,用Western印迹法研究I_1R对α_(2A)AR表达量的影响和对α_(2A)AR激动剂右美托咪定刺激细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化作用的影响。结果在转染小鼠I_1R和α_(2A)AR基因质粒后,CHO细胞生长正常。在为稳定表达小鼠α_(2A)AR的CHO细胞膜蛋白所做的放射性配体饱和实验中,3H-RX821002的Kd和Bmax值分别为(0.96±0.24)nmol/L和(0.29±0.03)nmol/g蛋白。在稳定表达小鼠I_1R的CHO细胞以及稳定表达小鼠α_(2A)AR的CHO细胞中再分别转染I_1R基因后,I_1R蛋白表达水平均明显上升(P<0.05,P<0.01)。在共同稳定转染I_1R和α_(2A)AR的CHO细胞系中,I_1R的表达上调了CHO细胞中α_(2A)AR的表达水平(P<0.01),同时也进一步上调了右美托咪定激活α_(2A)AR引起的ERK磷酸化水平(P<0.01)。结论在外源表达的细胞系中,I_1R上调α_(2A)AR蛋白的表达和右美托咪定激活α_(2A)AR后的ERK磷酸化水平。本研究为后续分子水平深入探索I_1R和α_(2A)AR之间的相互作用奠定了基础。

咪唑啉受体及其对阿片药理作用的调节机制

用稳定转染咪唑啉1型受体(I1R)的细胞(CHO-I1),对I1R信号转导途径进行了初步研究。首次直接证实I1R的信号转导途径与活化PC-PLC继而产生DAG,其后引起丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)酶促级联反应过程有关。采用共同稳定表达μ阿片受体(MOR)和I1R的CHO细胞表达系统(CHO-μ/I1细胞),对I1R在受体后水平抑制吗啡依赖的可能分子机制进行了研究。首次提供了胍丁胺通过作用于I1R而抑制吗啡依赖的直接实验证据,其分子机制可能主要是胍丁胺激活I1R抑制吗啡慢性处理时cAMP通路和Ca2+信号通路代偿性适应而抑制吗啡依赖的形成。

I_1受体在家兔眼压调节中的作用

目的 探讨咪唑啉受体 1型 (I1 receptor)激动剂莫索尼定 (moxonidine,MOX)溶液滴眼对家兔眼压的影响 ,以及 I1 受体阻断剂 efaroxan和颈上交感神经节切除术 (superi-or cervical ganglionectomy,SCG)预处理对其效应的影响。方法 观察 7.5、2 5、15 0μg 3种不同剂量的 MOX单侧滴眼后 8h内家兔双眼眼压改变 ,并用 efaroxan滴眼和 SCG的方法分别预处理 MOX 2 5μg用药眼和对侧眼 ,观察其对 MOX滴眼眼压效应的影响。结果 3种剂量的 MOX单侧滴眼均能使家兔双侧眼压显著下降 (P<0 .1) ;efaroxan12 5 μg滴眼预处理 MOX用药眼或对侧眼 ,则 MOX2 5 μg滴眼后 8h内双眼均未观察到明显的眼压下降 ;SCG预处理可取消切除侧眼的眼压下降 ,但对非切除侧 MOX降眼压效应影响不明显。结论 MOX家兔滴眼有确切的降眼压作用 ,这种降眼压作用主要是由 I1 受体介导的 ;I1 受体介导的降眼压效应依赖于眼部交感神经结构和功能的完整。